酵母感受态制备后可以离心吗
2024-07-26
来源：个人技术集锦
酵母感受态制备后可以离心，感受态制备所需仪器：水浴锅(VWR)、离心机(Eppendorf)、30 °C摇床与恒温培养箱(VWR)、培养皿。
酵母感受态细胞的制备
(1)从YPD平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母EBY100单克隆至10 mlYPD液体培养基，30℃，250 rpm培养过夜；
(2)测定过夜培养物的OD600值为3.0～5.0之间；
(3)将10 ml YPD过夜培养物稀释至OD600值为0.2～0.4；
(4)在28～30℃摇床中继续培养3～6hr，使其OD600值达到0.6～1.0；
(5)于室温1500g离心5 min收集酵母细胞，弃上清；
用10ml洗液洗酵母细胞，随后于室温1500g离心5 min离心收集细胞，弃上清；
(7)用1 ml TE/LiAc重悬酵母细胞，以每管50μl分装。
酵母感受态细胞的储存
每次转化时使用新鲜的感受态细胞是明智的，因为长时间储存，转化效率会降低，但这并不总是可行的。感受态细胞可以存储在-80°C长达一年，没有转化潜能的损失。然而, 瞬间冻结在液氮或-80°C冰箱是不建议的。感受态细胞需要在冷冻保护剂中，像哺乳动物细胞一样缓慢地冷冻。
1、使用硬纸板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等储存。
2、用纸片等将盒子里的细胞管隔开，分成多个小格子。
3、复苏过程中，在37°C解冻细胞，转化前用丰富培养基清洗防冻剂。
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