1. 小摇。挑取新鲜菌落，接种于含抗生素的LB培养基中，37℃小摇12-16h。 2. 大摇。取4ml菌液接种于含400ml LB培养基的大锥形瓶中，37℃大摇14-16h。 3. 收菌。用500ml离心筒收菌，5000rpm离心10min（注意配平）。弃上清，流尽残液。
4. 悬浮。加10ml预冷的溶液Ⅰ重悬菌体，轻轻吹打混匀。
5. 变性。加20ml新配制的溶液Ⅱ轻轻混匀，放置5min（至菌液清亮透明）。 6. 复性。加15ml预冷的溶液Ⅲ，轻轻混匀。
7. 离心。4℃，4800rpm离心15min。将上清移至200ml离心筒中。
8. 抽提。加0.6倍体积（Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ）的异丙醇（约27ml），混匀，放置10min以上。
9. 离心。4℃，11000rpm离心10min。弃上清。
10.每管加3ml TE(或4dH2O)，等沉淀溶解后，再加2-3ml 5mol/L LiCl混匀（可在桌面上来回摩擦晃动混匀）。冰浴10min，12000rpm离心10min。 11.取另一管加8ml异丙醇（等体积），将离心上清倒入加异丙醇的管内，混匀，放置2min，11000rpm离心10min。
12.弃上清，加入少量75%乙醇，快速冲洗、控干（切记用真空泵抽干，室温放干，一定要吸干，不要有乙醇残留），加1ml TE(或4d H2O)溶解沉淀。 13.然后倒入1.5ml EP管中，加3-5ul RNA酶，37℃消化30min。 14.加入0.5ml 40%PEG中，混匀，4℃过夜。
15.12000rpm离心10min。弃上清，沉淀溶于1ml 4d H2O中，用酚与氯仿混合物（250ul+240ul）抽提2遍，氯仿（500ul）抽提1遍。
16.150ul 3mol/L NaAC+无水乙醇+上清液，-20℃放置30min。12000rpm离心10min。75%乙醇洗一次，溶于100ul 4d H2O(或TE)中。
相关溶液配制：
溶液Ⅰ（100ml） 0.5M EDTA 2ml 1M Tris-HCl 2.5ml 水 95.5ml
溶液Ⅱ（100ml） 2M NaOH 10ml 10%SDS 10ml 水 80ml
溶液Ⅲ 0.4M NaOH:2%SDS=1：1
10×TE 1) 量取下列溶液,置于1L烧杯中 1M Tris-HCl Buffer 100ml 500mM EDTA 20ml
2) 向烧杯中加入约800ml去离子水,均匀混合 3) 将溶液定容至1L后,高温高压灭菌 4) 室温保存
40%PEG（m/V） 用 PEG8000配制
因篇幅问题不能全部显示，请点此查看更多更全内容