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初始染菌校正因子测定操作规程

来源:个人技术集锦


一次性使用医用高分子产品

初始染菌校正因子的测定操作规程

××××××××公司

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1、输液(血)器初始染菌数校正因子的测定

1.1内壁校正因子

1.1.1洗脱液的制备:取三套任意规格新制备的样品,在净化操作台上,分别注入15毫升生理盐水,将两端封闭后反复震荡,使盐水在管路内往复运行数十次以上。将冲洗液在无菌的状态下置入事先已经灭菌的具塞三角瓶中,立即盖好备用。

1.1.2营养琼脂培养基的制备:将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制(称取4.2克,加水100毫升,混匀后在电加热炉上煮开),然后在121℃高压灭菌20分钟,放入55℃左右的水浴中备用。

1.1.3接种:在净化操作台上,用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中,将约10-15毫升已融化的50℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中,并立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

1.1.4培养:待上述培养基冷却凝固后,翻转平皿,使低面朝上,置于30-35℃恒温箱中培养48小时。

1.1.5菌落计数:记录各皿碟中的菌落数,取平均值,然后再乘以洗脱液总体积(毫升)数,即得到洗脱液中的全部菌落数。

重复1.1.1-1.1.5步,分别进行第二次、第三次、第四次洗脱,收集各次洗脱菌落数,填入数据表中。

1.1.6内壁校正因子的计算:用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数,得到第一次冲洗去除率,去除率的倒数即为内壁校正因子。

1.2、外壁校正因子

1.2.1洗脱液的制备:在净化操作台上,用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭样品的外表面,然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中,立即盖好备用。

重复上述1.1.2-1.1.6操作。即得到外壁校正因子。

1.3、琼脂覆盖:在净化操作台上,将上述经过4次内壁外壁冲洗后的样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段,任取两段置入皿碟中,将25-30毫升50℃左右的营养琼脂培养基注入皿碟,覆盖在样品上,立即盖好。冷却后倒置,放入培养箱中培养,48小时后计数,每套样品做2个平行样,取平均数,乘以样品总长度(cm),再除以6,即得到全部样品的总琼脂覆盖菌落数。

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表1输血器校正因子测定数据表

测定项目 第一次洗脱 第二次洗脱 第三次洗脱 第四次洗脱 琼脂覆盖 第一次洗脱去除率%

平均去除率

校正因子

内壁:

外壁:

表2输液器校正因子测定数据表

测定项目 第一次洗脱 第二次洗脱 第三次洗脱 第四次洗脱 琼脂覆盖 第一次洗脱去除率%

平均去除率

校正因子

内壁

外壁:

检验: 复核: 日期:2006/1/14

2、穿刺针初始染菌数校正因子的测定

2.1内壁校正因子

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2.1.1洗脱液的制备:选取1个批次新制备的穿刺针样品15套,分成三份,每份5套为一组样品。在净化操作台上,每组产品分别注入15毫升生理盐水,将两端封闭后反复震荡,使盐水在管路内往复运行数十次以上,然后将冲洗液置入事先已经灭菌的具塞三角瓶中,立即盖好备用。 2.1.2营养琼脂培养基的制备:将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制(称取4.2克,加水100毫升,混匀后在电加热炉上煮开),然后在121℃高压灭菌20分钟,放入55℃左右的水浴中备用。

2.1.3接种:在净化操作台上,用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中,将约10-15毫升已融化的50℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中,并立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

2.1.4培养:待上述培养基冷却凝固后,翻转平皿,使低面朝上,置于30-35℃恒温箱中培养48小时。

2.1.5菌落计数:记录各皿碟中的菌落数,取平均值,然后再乘以洗脱液总体积(毫升)数,即得到洗脱液中的全部菌落数。

重复2.1.1-2.1.5步,分别进行第二次、第三次、第四次洗脱,收集各次洗脱菌落数,填入数据表中。

2.1.6内壁校正因子的计算:用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数,得到第一次冲洗去除率,去除率的倒数即为内壁校正因子。

2.2、外壁校正因子

2.2.1洗脱液的制备:在净化操作台上,用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭每组样品的外表面,然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中,立即盖好备用。

重复上述2.1.2-2.1.6操作。即得到外壁校正因子。

2.3、琼脂覆盖:在净化操作台上,将上述经过4次内壁外壁冲洗后的穿刺针样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段,任取两段置入皿碟中,将25-30毫升50℃左右的营养琼脂培养基注入皿碟,覆盖在样品上,立即盖好。冷却后倒置,放入培养箱中培养,48小时后计数,每套样品做2个平行样,取平均数,乘以样品总长度(cm),再除以6,即得到全部样品的总琼脂覆盖菌落数。 测定结果详见表3。

表3穿刺针校正因子测定数据表

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测定项目

第一次洗脱

第二次洗脱

第三次洗脱

第四次洗脱 琼脂覆盖 第一次洗脱去除率%

平均去除率 校正因子

内壁: 外壁:

内壁:

外壁:

检验: 复核: 日期:2006/1/4

3、 头皮针、采血针初始染菌数校正因子的测定

3.1内壁校正因子

3.1.1洗脱液的制备:选取三个批次的样品,每个批次各选10套(采血针20套)样品,在净化操作台上,去掉针套同时插在密闭的生理盐水瓶盖上,用力挤压,将挤出液收集到已事先灭菌的具塞三角瓶中,每批产品共收集15毫升洗脱液,立即盖好备用。

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3.1.2营养琼脂培养基的制备:将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制(称取4.2克,加水100毫升,混匀后在电加热炉上煮开),然后在121℃高压灭菌20分钟,放入55℃左右的水浴中备用。

3.1.3接种:在净化操作台上,用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中,将约10-15毫升已融化的50℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中,并立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

3.1.4培养:待上述培养基冷却凝固后,翻转平皿,使低面朝上,置于30-35℃恒温箱中培养48小时。

3.1.5菌落计数:记录各皿碟中的菌落数,取平均值,然后再乘以洗脱液总体积(毫升)数,即得到洗脱液中的全部菌落数。

重复3.1.1-3.1.5步,分别进行第二次、第三次、第四次洗脱,收集各次洗脱菌落数,填入数据表中。

3.1.6内壁校正因子的计算:用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数,得到第一次冲洗去除率,去除率的倒数即为内壁校正因子。

3.2、外壁校正因子

3.2.1洗脱液的制备:在净化操作台上,用灭菌的脱脂棉蘸30毫升生理盐水反复擦拭每组样品的外表面,然后将擦拭液和脱脂棉一并收集到无菌的具塞三角瓶中,立即盖好备用。

重复上述3.1.2-3.1.6操作。即得到外壁初始染菌数的校正因子。

3.3、琼脂覆盖:在净化操作台上,将上述经过4次内壁外壁冲洗后的样品选取管路中间部分剪成6cm剖面段,任取两段置入皿碟中,将10-15毫升50℃左右的营养琼脂培养基注入皿碟,覆盖在样品上,立即盖好。冷却后倒置,放入培养箱中培养,48小时后计数,每批样品做2个平行样,取平均数,乘以样品总长度(cm),再除以6,即得到全部样品的总琼脂覆盖菌落数。

表4头皮针校正因子测定数据表

测定项目 第一次洗脱 第二次洗脱 第三次洗脱 第四次洗脱

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琼脂覆盖 第一次洗脱去除率%

平均去除率

校正因子

内壁: 外壁:

内壁:

外壁:

表5采血针校正因子测定数据表

测定项目 第一次冲洗 第二次冲洗 第三次冲洗 第四次冲洗 琼脂覆盖 第一次冲洗去除率%

平均去除率

校正因子

内壁: 外壁:

内壁:

外壁:

检验: 复核: 日期:2006/1/6

4、管类产品初始染菌数校正因子的测定

4.1 洗脱液的制备:选取三套新制备的样品,在净化操作台上,将每套样品用无菌的剪刀(导丝用玫瑰剪)剪成大约1厘米长的段,放入事先灭菌的具塞三角瓶中,加15-50毫升(可根据样品本身的大小确定)生理盐水,加塞,充分震荡,使样品的内壁、外壁得到充分的洗脱,然后将冲洗液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中,立即盖好备用。 4.2营养琼脂培养基的制备:将市售的营养琼脂培养基产品按说明书要求进行配制(称取4.2克,加水100毫升,混匀后在电加热炉上煮开),然后在121℃高压灭菌20分钟,放入55℃左右的水浴中备用。

4.3接种:在净化操作台上,用吸管吸取1毫升上述制备的洗脱液注入经过干热灭菌的平皿中,将约10-15毫升已融化的50℃左右的营养琼脂培养基倾注到平皿中,并立即旋摇平皿,使水样与培养基充分混匀。同样方法每组洗脱液做12个平行试验,同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

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4.4培养:待上述培养基冷却凝固后,翻转平皿,使低面朝上,置于30-35℃恒温箱中培养48小时。

4.5菌落计数:记录各皿碟中的菌落数,取平均值,然后再乘以洗脱液总体积(毫升)数,即得到洗脱液中的全部菌落数。

重复4.1-4.5步,分别进行第二次、第三次、第四次冲洗,将各次洗脱液中的菌落数填入数据表中。

4.6校正因子的计算:用第一次洗脱液得到的菌落数除以四次洗脱得到的总菌落数,得到第一次冲洗去除率,取三套样品的第一次冲洗去除率的平均值,平均值的倒数即为校正因子。

表6辅助导管校正因子测定数据表

测定项目 第一次洗脱 第二次洗脱 第三次洗脱 第四次洗脱 琼脂覆盖 第一次洗脱去除率%

平均去除率

校正因子

%

表7冲洗器校正因子测定数据表

测定项目

第一次洗脱 第二次洗脱 第三次洗脱 第四次洗脱 琼脂覆盖 第一次洗脱去除率%

平均去除率

校正因子

%

检验: 复核: 日期:2006/1/11

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