一、实验目的
⒈了解紫外可见分光光度法的基本原理。 ⒉掌握紫外可见分光光度计的基本操作。 ⒊紫外可见吸收光谱的绘制和定量测定方法。 二、实验原理
分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
对溶液进行定量分析。根据Lambert-Beer定律：
A=εbc
（A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度）
在紫外可见吸收分光光度分析中，必须注意溶液的pH值的影响。因为溶液的pH值不但有可能影响被测物吸光强度，甚至还可能影响被测物的峰位形状和位置。酚类化合物就有这一现象，例如苯酚在溶液中存在着如下电离平衡：
图3-1 苯酚的电离平衡
苯酚在紫外区有三个吸收峰，在酸性或中性溶液中，λmax为196.3nm，210.4nm和269.8nm；在碱性溶液中λmax位移至207.1nm，234.8nm和286.9nm。
图3-2为0.021g/L的苯酚分别在0.010mol/L 盐酸溶液与氢氧化钠溶液中的紫外吸收光谱。由图知在盐酸溶液与氢氧化钠溶液中，苯酚的紫外吸收光谱有很大差别，所以在用紫外可见吸收分光光度分析苯酚时应加缓冲溶液，本实验是通过加氢氧化钠强碱溶液来控制控制溶液的pH。
三、仪器和试剂
⒈仪器：
⑴紫外可见分光光度计 ⑵1.00cm石英比色池 ⒉试剂：
⑴苯酚标准溶液:0.5g/L ⑵0.25mol/L NaOH ⑶未知浓度的苯酚溶液
四、实验操作
1.准确移取0.5g/L的苯酚标准溶液5.00ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2.分别准确移取上述苯酚溶液0.00，2.00，4.00，6.00ml于10ml 容量瓶中，上述各容量瓶中分别各加0.4ml 0.25mol/L的NaOH溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待测。
另准确移取合适体积的未知溶液(视未知溶液中苯酚溶液的浓度而定)1份于10ml容量瓶中，加入0.4ml 0.25mol/L的NaOH溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待测。 3.仔细阅读紫外可见分光光度计的基本操作，在紫外区进行，根据提示：
⑴0.01mol/L NaOH溶液作空白绘制上述标准溶液的紫外吸收光谱曲线，找出峰值并打印出参数和工作曲线。
⑵用1.00cm石英比色池，以0.01mol/L NaOH溶液作空白，固定吸收光波长为紫外吸收光谱中波长最大的吸收峰下绘制标准曲线后，测量未知溶液的浓度。 打印出工作曲线和参数。 五、数据处理
⒈计算未知样中的苯酚的浓度；
⒉求出苯酚在碱性溶液的中波长最大吸收峰的摩尔吸光系数。 六、思考题
⒈实验中为什么加NaOH？
⒉本实验是采用紫外吸收光谱中波长最大的吸收峰下进行测定的，是否可以在波长较短的另外两个吸收峰下进行定量测定，为什么？
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