湖北中医杂志 ２０１０年２月第３２卷第２期 ・７４・ Ｈｕｂｅｉ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＴＣＭ Ｆｅｂ．２０１０．Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．２ ＨＰＬＣ法测定药用菊花中木犀草素的含量 朱丽，卢化 （湖北省武汉市第三人民医院药剂科，湖北武汉４３００６３） 摘要：目的采用高效液相色谱法测定药用菊花中木犀草素的含量，研究药用菊花中木犀草素的分布及含 量差异，探讨以多指标成分评价药用菊花品质的方法。方法 采用反相高效液相色谱法，色谱柱：ＤＩＯＮＥＸ—ＡＣ・ ＣＬＡＩＭ．１２０ Ｃ。 （２５０ｍｍ Ｘ４．６ｍｍ，５Ｉｘｍ）；以磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ＝２．５）一甲醇为流动相梯度洗脱；流速为０．５ ｍＬ／ ｍｉｎ；柱温为３５￣Ｃ；检测波长为３５０ｎｍ。结果木犀草素的含量在药用菊花中依次为福田白菊、杭白菊、亳州白菊和 黄山贡菊。结论木犀草素可以作为控制药用菊花质量的指标之一。 关键词：药用菊花；木犀草素；含量测定；ＨＰＬＣ法 中图分类号：Ｒ２８５．６ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００—０７０４（２０１０）０２—００７４—０２ 菊花是菊科菊属植物菊Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆｏｌｉｍｕ Ｒａｍ ａｔ．的干 ２方法与结果 燥头状花序，为《中国药￣＞＞２００５版一部中收载的药用菊花。具有疏 ２．１ 对照品溶液的制备 风清热、平肝明目、解毒之功效。作为我国常用中药，临床上用于治 精密称取木犀草素对照品适量，加甲醇溶解，制成０．２４ｒａｇ／ 疗头痛、眩晕、目赤、心胸烦热、疔疮、肿毒等症。且木犀草素等黄酮 ｍＬ的溶液，作为对照品溶液。 类化合物为主要活性物质之一－ｌ Ｊ，其中菊花又按药材产地和加工 ２．２供试品溶液的制备 方法不同分为毫菊、贡菊、杭菊等。中国药典规定其含量测定是以 取本品粉末（过二号筛）１．ｏｇ，精密称定，精密加入甲醇２０ｍＬ，称 绿原酸为指标。然而绿原酸结构不稳定，在含量测定时易受其同分 定重量，超声提取３０ｍｉｎ，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重 异构体的干扰，所以笔者以具有清热解毒、抗炎、镇咳、祛痰等作用的 量，过滤，滤液置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至５ＯｒａＬ量 木犀草素为指标成分 Ｊ，采用高效液相色谱法测定药用菊花（包括 瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。 毫州白菊、福田白菊、杭自菊、黄山贡菊）中木犀草素的含量，研究药 ２．３色谱条件 用菊花中木犀草素的分布及含量差异，探讨以多指标成分评价药用 色谱柱：ＤＩＯＮＥＸ—ＡＣＣＬＡＩＭ．１２０ ＣＩ８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ， 菊花的方法，以寻求更加客观科学的评价药用菊花的品质，为菊花 类商品的临床应用提供科学依据。 ５ ｍ）；以磷酸盐缓冲溶液（ＰＨ＝２．５）一甲醇为流动相按表１的 顺序递度洗脱；流速为０．５ｍＬ／ｍｉｎ；柱温为３５ｑＣ；检测波长 １仪器、试剂与药品 ３５０ｎｍ，杭白菊进样量３ 、黄山贡菊进样量７／ｘＬ、野菊花进样量 ＤＩＯＮＥＸ—ＵＬＴＩＭＡＴＥ ３０００液相色谱仪，Ｓｔａｒｓｏｒｉｕｓ ＢＳＩ型电 ６ｌｘＬ、其余样品进样量均为５ｔｘＬ。色谱图见图１一图６。 子分析天平（ｄ＝０．０１ｍｇ，北京赛多利斯天平有限公司），ＵＰ５２０Ｈ 表１梯度洗脱条件（例） 超声波清洗机（熊猫集团南京电子计量有限公司），ＤＩＯＮＥＸ— ＡＣＣＬＡＩＭ．１２０ Ｃｌ８（２５０ｒａｍ Ｘ４．６ｍｍ，５１ｘｍ）色谱柱，甲醇为色谱 纯（美国天地公司）、其它试剂均为分析纯，水为三蒸水。木犀草 素对照品（中国药品生物制品检定所，批号ｌ１１５２０—２００２０１），毫 州白菊、福田白菊、杭白菊、黄山贡菊均购自湖北天济中药饮片 有限公司，由湖北中医学院中药鉴定教研室陈科力教授鉴定。 图１ 毫州白菊药材ＨＰＬＣ图谱 图２福田自菊药材ＨＰＬＣ图谱 图３杭自菊药材ＨＰＬＣ图谱 ２０１０年２月第３２卷第２期 湖北中医杂志 Ｆｅｂ．２０１０．Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．２ Ｈｕｂｅｉ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＴＣＭ －７５・ 图４黄山贡菊药材ＨＰＬＣ图谱 图５木犀草索标准品ＨＰＬＣ图谱 图６空白溶剂ＨＰＬＣ图谱 ２．４线性关系的考察 表２样品含量测定实验结果 分别４次精密吸取对照品溶液１．０ｍＬ，再分别置于５ｍＬ、 １０ｍＬ、５０ｍＬ、１００ｍＬ容量瓶中，均用甲醇溶解稀释至刻度，摇匀， 以稀释后对照品及对照品储备液为标准曲线系列溶液，依次注 入液相色谱仪，记录木犀草素的峰面积，以进样量（ ）为横坐标 （ｘ），峰面积为纵坐标（Ｙ），得回归方程为：Ｙ＝１１８．０１Ｘ一 ０．４６４５，ｒ＝Ｏ．９９９９。木犀草素在０．０１２１ｘｇ一１．２ｖＬｇ范围内呈线形 关系。 ２．５精密度实验 精密吸取对照品溶液１ｔｒＬ，在上述色谱条件下，连续进样５ 次，注入液相色谱仪，得木犀草素的峰面积分别为３５．９９７，３６． ０３５，３４．９９５，３５．１２９，３５．９８３，ＲＳＤ为１．３０％。 ２．６稳定性实验 精密吸取各个菊花供试品溶液，在上述色谱条件下，记录各 ３小结与讨论 个供试品溶液分别在０ｈ、３ｈ、６ｈ、９ｈ、１２ｈ、２４ｈ木犀草素的峰面积， 笔者用ＨＰＬＣ法测定了毫州自菊、福田白菊、杭白菊、黄山贡 结果表明各个样品溶液在２４ｈ内稳定性良好。 菊中木犀草素的含量，结果表明毫州白菊中木犀草素的含量为 ２．７重复性实验 ０．１８３ ｍｇ／ｇ，福田白菊中木犀草素的含量为０．６９８ ｍｇ／ｇ，杭白菊 精密称取各个菊花的同一批样品５份，每份１．０ｇ，精密称定， 中木犀草素的含量为０．３１７ ｍｅ／ｇ，黄山贡菊中木犀草素的含量 按供试品溶液的制备方法下制备，在上述色谱条件下分别测定，计 为０．１８７ ｍｇ／ｇ。经过比较发现其中木犀草素的含量依次为福田 算各个样品中木犀草素的平均含量，毫州白菊为０．１８２ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ 白菊、杭白菊、黄山贡菊和毫州白菊，药用菊花中福田白菊木犀草 为１．０％；福田白菊为０．６９９ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为０．８％；杭白菊为 素的分布最高。而木犀草素具有清热解毒、镇咳、祛痰、抗炎、抗 ０．３１７ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为１．２％；黄山贡菊为０．１８５ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为１．３％。 过敏和免疫增强作用 】，所以木犀草素可以作为控制药用菊花 ２．８加样回收试验 质量的指标之一。本实验结果为建立多指标成分考察菊花药材 分别精密称取已知含量的同一批样品６份，每份１．０ｇ，精密 的质量，全面客观地评价其品质和临床应用提供科学依据。 称定，再分别加入一定量的木犀草素对照品，按供试品溶液的制 参考文献： 备方法制备，在上述色谱条件下依法分别测定，其中亳州白菊平 ［１］中国药典Ｉ部［Ｓ］．２００５．２１８． 【２］陈文基，绳金房．天然活性成分简明手册［Ｍ］．北京：中国医药科技 均回收率９６．２％，ＲＳＤ为０．９％；福田白菊平均回收率９７．０％， 出版社，１９８８．３５８． ＲＳＤ为０．８％；杭白菊平均回收率９６．８％，ＲＳＤ为０．７％；黄山贡 ［３］黄泰康．常用中药有效成分与药理手册【Ｍ］．中国中医药科技出版 菊平均回收率９６．７％，ＲＳＤ为０．７％。 社，１９９４．１５６５． ２．９样品溶液的测定 ［４］ 卢金清，裴学军．聚酰胺薄层扫描法测定金菊花中木犀草素的含量 按上述测定方法，各样品中木犀草素含量测定结果见表２。 ［Ｊ］．湖北中医学院学报，２００２，４（２）：２９—３０． （收稿日期：２００９—１０—２０编辑：郑晓屏）