第１９卷第７期２０１０年７月 Ｖｏ１．１９ Ｎｏ．７ Ｊｕ１．２０１０ Ａｃｔａ Ａｃａｄｅｍｉ武警医学院学报 ａｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ ＣＰＡＦ ５３３ Ｈ ＰＬＣ法测定溶栓颗粒中阿魏酸的含量 石 嫱 ，王焕芸 （１．武警内蒙古总队医院药剂科，内蒙古呼和浩特０１００４０；２．内蒙古医学院药学院，内蒙古呼和浩特０１００２０） 摘要：【目的ｌ采用高效液相色谱法测定溶栓颗粒中阿魏酸的含量。【方法】采用Ｃ１８色谱柱Ｋｒｏｍａｓｉｌ ５ １００Ａ（２５０ｍｍｘ ４．６ｍｍ，５ ｍ）；流动相：甲醇：５％醋酸溶液（２４：７６）；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；柱温：２５￣Ｃ；检测波长：３２３ ｎｍ。【结果】阿魏酸在３．０２～ ｌ８．１２ ｇ／ｍｌ范围内呈良好线形关系，ｒ－＝０．９９９９，（ｎ＝６），平均加样回收率为１００．２％，ＲＳＤ＝Ｉ．２％（ｎ＝６）。【结论】该法可作为溶 栓颗粒的质量控制方法。 关键词：溶栓颗粒；阿魏酸；高效液相色谱法；含量测定 【文章编号】１００８—５０４１（２０１０）０７—０５３３—０３ 【中图分类号】Ｒ９７１ 【文献标识码】Ａ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ Ｒｏｎｇｓｈｕａｎ ｇｒａｎｎｕｌｅ ｂｙ ＨＰＬＣ ＳＨＩ Ｑｉａｎｇ。ＷＡＮＧ Ｈｕａｎ－ｙｕｎ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｒｅｇｉｏｎ Ｃｏｒｐｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｅｏｐｌｅ‘Ｓ Ａｒｍｅｄ Ｐｏｌｉｃｅ Ｆｏｒｃｅ，Ｈｏｈｈｏｔ ０１ ００３１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ Ｒｏｎｇｓｈｕａｎ ｇｒａｎｎｕｌｅ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ｔｈｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｉｎｃｌｕｄｅｄ Ｋｒｏｍａｓｉｌ ５ １００Ａ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ（２５０ ｍｍ ｘ ４．６ ｍｍ，５ ｍ）ａｎｄ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌ ａｌｃｏｈｏｌ：５％ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（２４：７６）．Ｔｈｅ ｌｆｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ ｍｌ／ｍｉｎ，ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ａｔ ２５ ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ３２３ ｎｍ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｔｈｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｗａｓ ｌｉｎｅａｒ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ３．０２￣１８．１２ ｇ／ｍｌ ｆｏｒ ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ，ｒ＝０．９９９９，（ｎ＝６）；ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ １００．２，ａｎｄ ＲＳＤ ｗａｓ １．２％（妇：６）．【Ｃ０ｎｃＩｕｓｉｏｎｓ】Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｖａｉｌｂａｌｅ ｏｆｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆＲｏｎｇｓｈｕａｎ ｇｒａｎｎｕｌｅ． Ｋｅｙ ＷＯｒｄｓ：Ｒｏｎｇｓｈｕａｎ ｇｒａｎｎｕｌｅ；Ｆｅｒｕｌｉｃ ａｃｉｄ；ＨＰＬＣ；Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 溶栓颗粒是由当归、菟丝子、肉苁蓉、杜仲、薏 酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号： 苡仁、车前子、茜草、川芎、桂枝九味中药组成的复 １ １０８１８—２００４０４，甲醇为色谱纯，水为双重蒸馏水， 方制剂。具有活血通经，除痹祛瘀，解毒散结，祛风 其它试剂为分析纯。溶栓颗粒，自制，ｌＯｇ／￣，批号 止痛的功效。方中当归为君药，阿魏酸为当归、川 见表２。 芎的主要有效成分，现代药理研究表明，阿魏酸有 ２方法与结果 抑制血小板聚集、降低血小板活性和改善微循环的 ２．１ 色谱条件 作用，并且是本方起疗效的主要成分之一。因此， 色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ ５ １００Ａ Ｃ１８柱（２５０ ｍｍ× 本实验选择阿魏酸作为定量指标，采用高效液相色 ４．６ ｍｍ，５ ｍ）；流动相：甲醇：５％醋酸溶液（２４：７６）； 谱法测定溶栓颗粒中阿魏酸的含量，建立本制剂的 流速：１．０ ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长：３２３ ｒｉｍ。 质量控制方法。 ２．２ 溶栓颗粒供试品溶液的制备 １仪器与试剂 取溶栓颗粒０．５ ｇ，精密称定，置于１００ ｍｌ锥形 岛津ＬＣ一１０ＡＶＰ高效液相色谱仪，配有柱温箱， 瓶中，精密加入２５ ｍｌ甲醇：甲酸（９５：５），称定重量 ＳＰＤ一１０ＡＶＰ检测器，ＣＬＡＳＳ—ＶＰ色谱工作站。阿魏 后，超声处理４０ ｍｉｎ，放冷，再称定重量，用甲醇：甲 ［收稿日期］２００９—１１—２３；［修回日期］２０１０—０３—１２ 酸（９５：５）补足重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。 ［作者简介］石嫱（１９６６一），女，籍贯山东菏泽，本科，副主任药师，主 ２．３ 对照品溶液的制备 要从事医院制剂与药品检验工作。 ５３４ Ａｃｔ Ａ。ａ武警ｄｅｍ 。ｃ Ｆ 第１９卷第７期２０１０年７月 Ｖ０】．１９ Ｎｏ．７ Ｊｕ１．２０１０ 取阿魏酸对照品１．５ ｍｇ，精密称定，置于２５ ｍｌ ２．８稳定性试验 棕色量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度摇匀，即得，作 为贮备液。 ２．４ 阴性样品溶液的制备 对同一供试品溶液分别于０、３、６、１０ ｈ进样，记 录峰面积，结果峰面积均值为１ ２１０ ０２４，ＲＳＤ为 １．８９％。结果表明，供试品溶液在１０ ｈ内稳定。 ２．９回收率试验 取菟丝子、肉苁蓉、杜仲、薏苡仁、车前子、茜 草、桂枝等粉末（相当于０．５ ｇ的溶栓颗粒），按供试 品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。取对照品 采用加样回收法，取已知含量的样品约０．７ ｇ ６ 份，精密称定，分别置具塞的锥形瓶中，加入不同量 溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各进样２０ ｌ。阴 的对照品溶液，以下操作同“供试品溶液的制备”， 性无于扰。见图１。 对照品 Ｂ．供试品 ０ ５ ｔ０ １５ ２０ ２５ ｃ：阴性对照 ０ ５ １０ １５ ２０ ２５ ３０Ｉ 『｝ｉ『 Ｉ图１ 对照品、供试品、阴性对照色谱图 ２．５线性范围考察 精密吸取对照品贮备液０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、 ３．０ ｍｌ，分别置１Ｏ ｍｌ量瓶中，用甲醇一５％醋酸溶液 （１：４），稀释至刻度，摇匀，各进样２Ｏ ｌ，记录峰面 积。以对照品溶液的峰面积（Ａ）为纵坐标、溶液浓 度（Ｃ）为横坐标，绘制标准曲线，并计算。回归方程 为：Ｙ＝１２６５８４Ｘ一８１ １５．６７，（ｒ＝－０．９９９９，ｎ＝６）。阿魏酸 在３．０２～１８．１２ ｇ／ｍｌ范围内呈良好线形关系。 ２．６精密度试验 取阿魏酸对照品溶液，分别重复进样５次，记录 峰面积，结果峰面积均值为ｌ ５１３ １９６．６，ＲＳＤ为 １．６４％，表明本法精密度良好。 ２。７ 重现性试验 取同一批号样品６份，按“供试品溶液的制备方 法”操作，取上述溶液２０ ｌ进样，测定阿魏酸的平 均含量为Ｏ．１９３０ ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为０．５３％，表明本法重复 性良好。 制得加样回收溶液，按上述色谱条件测定，记录峰 面积，阿魏酸平均回收率为１００．２％，ＲＳＤ＝Ｉ．２％（ｎ＝ ６）。见表１。 表１ 回收率试验（几＝６） ２．１０样品测定 按上述方法制备供试品溶液，按外标法测定阿 魏酸的含量。见表２。 表２样品测定（ｎ＝２） ３讨论 ３．１ 流动相的选择 在本实验中根据文献［１—５】对流动相系统的报 道，曾对甲醇一水一磷酸系统，甲醇一水一冰醋酸系统 进行选择，结果分离度差，经过调整流动相的比例 和种类，阿魏酸在本法所选择 （下转第５３７页） ２０１０年７月 武警医学院学报 ５３７Ｖｏ１．１９ Ｎ０．７ Ｊｕｌ ２０１０ ．． Ａｃｔａ Ａｃａｄｅｍｉａｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ ＣＰＡＦ 等严重并发症。由于其临床症状大多数较轻，往往 尽量查明肝损害的病因，以利于调整治疗用药，合 容易被全身症状所掩盖，因此漏诊率较高；而对以 理使用激素及免疫抑制剂，提高治疗效果，改善患 肝损害为首发或主要表现的ＳＬＥ患者认识不够，则 者预后。 易导致误诊。由于ＳＬＥ相关性肝损害可发生于不同 【参考文献】 活动程度的ＳＬＥ，对于治疗过程中或治疗后出现的 ［１］张奉春．内科学【Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００８．６８０． 肝损害应与药物性肝损害相鉴别。 【２Ｊ Ｍｉｌｌｅｒ ＭＨ，Ｕｒｏｗｉｔｚ ＭＢ，Ｇｌａｄｍａｎ ＤＤ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎ 本研究发现ＳＬＥ相关性肝损害组病例与无肝损 ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ［Ｊ］．Ｑ Ｊ Ｍｅｄ，１９８４，５３（２１ １）： 害组比较，ＡＮＡ、抗ｄｓ—ＤＮＡ抗体、抗一ｓｍ抗体、 ４０１— ｌ９． 抗一Ｕ１一ＲＮＰ抗体、抗一ＳＳＡ抗体、抗一ＳＳＢ抗体等自身 ［３］顾越英．临床诊疗指南风湿病分册［Ｍ］．北京：人民卫生出 抗体阳性率及补体ｃ３降低发生率两组间差异无显 版社，２００４．５０—５ １． 【４Ｊ Ｗａｅｌ Ｉ，Ｙｏｕｓｓｅｆ ＭＤ，Ａｎｔｈｏｎｙ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ 著性，而ＩｇＧ增高发生率则具有显著差异性（Ｐ＜ ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ［Ｊ】．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００２，３５（４）： ０．０５）。提示ＳＬＥ相关性肝损害与自身抗体异常没 ３４５－３４９． 有明显的相关性，ＩｇＧ增高发生率高可能与肝功能 ［５］Ｍａｌｎｉｃｋ Ｓ，Ｍｅｌｚｅｒ Ｅ，Ｓｏｋｏｌｏｗｓｋｉ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ 受损后，刺激单核一吞噬细胞系统，导致免疫球蛋白 ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００８， 合成增多有关。新近有资料表明，ＥＢ病毒感染与 ４２（１）：６９－８０． ＳＬＥ患者肝损害相关 ］，因此，ＳＬＥ相关性肝损害患 【６ＪＭｕｋａｉ Ｍ，Ｂｏｈｇａｋｉ Ｔ，Ｎｏｔｏｙａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｌ ｉｖｅｒ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｄｕｅ 者ＩｇＧ升高，也许是这些ＳＬＥ患者在免疫功能紊乱 ｔｏ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ａ ｐａｔｉｅｎｔ ｗｉｈｔ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ 情况下合并了非嗜肝病毒的感染，诱导免疫系统产 ［Ｊ］．Ｌｕｐｕｓ，２０００，９（１）：７４－７７． 生ＩｇＧ，而后通过分子模拟的方式损伤肝细胞。就 【７ Ｊ Ｃｈｏｗｄｈａｒｙ ＶＲ，Ｃｒｏｗｓｏｎ ＣＳ，Ｐｏｔｅｒｕｃｈａ ＪＪ，ｅｔ ａ１．Ｌｉｖｅｒ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ：ｃａｓｅ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ 目前而言，ＳＬＥ相关性肝损害病例中ＩｇＧ升高是因 还是果，其明确机制尚有待进一步研究。 ４０ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，２００８，３５（１ １）：２１５９－２１６４． ［８］郝邯生，王碗朋．ＥＢ病毒感染与系统性红斑狼疮相关性 目前，由于ＳＬＥ相关性肝损害发病机制尚不十 研究［Ｊ］．武警医学院学报，２００９，１８（５）：４１５—４１９． 分清楚，可能为多因素渐进性作用所致，且其可发 （责任编辑：段姚尧） 生于任何活动程度的ＳＬＥ，所以对于合并有肝损害 的ＳＬＥ患者应重视其基础疾病治疗的同时，要注意 （上接第５３４页）色谱条件下，与其它组分达到基线 为超声提取时间。 分离，分离度符合要求，理论塔板数大于３ ５００。 【参考文献】 ３．２提取方法的选择 【１】国家药典委员会．中华人民共和国药典（二部）［Ｍ】．北京： 本实验对溶栓颗粒剂采用超声法和回流法进 化学工业出版社，２００５．附录：２８—３０． 行提取进行了比较，结果显示超声法提取所测阿魏 ［２】阎雪梅，赵慧萍，严红．ＨＰＬＣ法测定通脉颗粒中阿魏酸的 酸的含量高于回流法，并且超声法简便、快速，因此 含量［Ｊ］．中草药，２００３，３４（３）：２３０—２３１． 选择超声法为提取方法。 ［３］解亚华，李建军．ＨＰＬＣ法测定复方归芪胶囊中阿魏酸的 ３．３超声时间的选择 含量［Ｊ］．广州医药，２００２，３３（５）：６８—６９． 【４】薛玉梅．ＨＰＬＣ法测定新生华颗粒中阿魏酸的含量［Ｊ］．基 本试验对溶栓颗粒超声提取的时间进行了选 层中药杂志，２００２，１６（４）：２６—２８． 择。我们比较了溶栓颗粒超声提取２０、４Ｏ、６０、９０ ［５］李玲，王丽．ＨＰＬＣ法测定升血灵口服液中阿魏酸的含量 ｍｉｎ后阿魏酸的含量，结果表明，超声时间为４０ ｍｉｎ ［Ｊ】．中成药，２００４，２６（１２）：１０７７—１０７８． 时，提取已基本完全，超声时间的延长对阿魏酸的 （责任编辑：段姚尧） 提取含量的影响没有明显差异。因此，选择４０ ｍｉｎ