HPLC测定不同产地川党参中党参炔苷的含量

2008年9月

ChinaJournalofChineseMateriaMedica

　　　中国中药杂志

Vol.33,Issue　17September,2008

HPLC测定不同产地川党参中党参炔苷的含量

宋　丹

1,2,3

,程雪梅

1,2,43

,李隆云,钟国跃,王峥涛

331,2,43

(1.上海中医药大学中药研究所,上海201203;2.中药标准化教育部重点实验室,上海201203;

3.重庆市中药研究院,重庆400065;4.上海中药标准化研究中心,上海201203)

[摘要]　目的:分析不同产地的川党参中党参炔苷的含量,为川党参的质量标准建立提供参考。方法:采用高

效液相色谱分析,SupelcoDiscoveryC18色谱柱(416mm×250mm,5μm);乙腈2015%醋酸水(20∶80)为流动相,检测波长268nm。结果:24批不同种与不同产地的党参中党参炔苷含量介于010403～019667mg・g-1。结论:该方法操作简便,结果稳定可靠,可用于川党参的质量评价。[关键词]　川党参;高效液相色谱法;党参炔苷[中图分类号]R284.1　[文献标识码]A　[文章编号]100125302(2008)1722133204

　　桔梗科植物党参为常用中药。《中国药典》

2005年版一部收载了党参Codonopsispilosula(Franch.)Nannf.、素花党参C.pilosulaNannf.var.modesta或川党参C.tangshenOliv.3种。根据文献报道,党参中主要要有三萜、甾类、聚乙炔醇、酚酸、

[122]

木脂素、倍半萜、黄酮等多种化学成分。党参提取物具有抗溃疡活性,初步的药理学研究证明,提取物中党参炔苷对乙醇造成的胃黏膜损伤有很好的保护作用,与党参补中益气的传统功效相符,为党参胃粘膜保护作用的活性成分,可作为党参质量控制指标之一。以往对党参的质量控制研究报道很多,但至今尚无统一规范的质量控制方法,2005年版药典仅收载了党参炔苷为对照的薄层定性鉴别方法,并未收载党参的定量检测方法,且收载的3个品种作

[325]

为共有成分的党参炔苷含量的相关报道也较少。川党参C.tangshenOliv.,产于重庆东部、南部及重庆、湖北、陕西交界处,现已大面积栽培。川党参因产地及加工方法不同,有不同的商品名。重庆市巫溪县称“大宁党”、重庆市巫山县称“巫山党”、“单支党”、“条党”、“庙党”,重庆市奉节县称“条党”,川党参也是一种传统的出口品种,以其单支、肥壮、狮头、味甜、肉厚质量为佳,畅销港澳、台湾及

[收稿日期]　2007211221

[基金项目]　国家“十一五”科技支撑项目(2006BAI06A11209)

[通讯作者]　程雪梅,Tel:(021)5080552223037,E2mail:chengxuemei1963@163.com;3王峥涛,Tel:(021)021251322507,E2mail:wangzht@hotmail.com

3

东南亚地区。由于川党参产地较多,且价格较为混乱,为了确保川党参合理有效的应用,使川党参的定性、定量标准评价有具体的量化指标,作者对川党参的资源分布进行了调查和样品采集,在川党参化学成分系统研究的基础上,利用反相高效液相色谱法测定了川党参药材主要产区重庆市巫溪县、巫山县、奉节县、南川市、湖北省竹溪县、陕西省平利县的川党参药材中党参炔苷含量。并跟药典收载的党参、素花党参进行比较,为下一步川党参的质量标准研究提供依据。1　仪器与试药

Agilent1100Series高效液相色谱仪(AgilentUSA)包括在线真空脱气系统,四元泵,自动进样器,

柱温箱,二极管阵列检测器;SB2200超声清洗机

(SHANGHAIBRANSON);AE200电子分析天平(METTLER);SB-2000旋转蒸发仪(EYELA上海

爱朗仪器有限公司)。

党参炔苷(lobetyolin)对照品(上海中药标准化研究中心,供含量测定用);乙腈(FisherScientific);甲醇为分析纯(上海化学试剂公司)。

川党参19批样品由重庆市中药研究院彭锐副研究员鉴定为C.tangshen的干燥根,党参及素花党参5批样品由香港科技大学董婷霞教授鉴定,样品来源及采集时间见表1。2　方法与结果

2.1　色谱条件　SupelcoDiscoveryC18色谱柱(416mm×250mm,5μm);流动相乙腈2015%醋酸水溶

・2133・

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表1　样品来源及采集日期

　　　中国中药杂志

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No.2C.3C.4C.5C.6C.7C.8C.9C.10C.11C.12C.13C.14C.15C.16C.17C.18C.19C.20C.21C.22C.23C.24C.

参炔苷峰面积RSD1104%,精密度良好。

采集日期

200620922220062092222006209222200620922220062092232006209225200620922520062092252006209225200620921220062092122006209212200620921520062092152006209215200621021820062102182006210215200621021520032022202004202206200320221020042092252003212213

/g210002210001210004210001210000210004210004210003210005

样品名称来源

2.6　稳定性试验　精密吸取同一样品溶液,室温放

1Codonopsistangshen

陕西省平利县正阳乡

tangshen陕西省平利县正阳乡tangshen陕西省平利县正阳乡tangshen陕西省平利县正阳乡tangshen陕西省平利县正阳乡tangshen湖北省竹溪县丰溪镇tangshen湖北省竹溪县丰溪镇tangshen湖北省竹溪县丰溪镇tangshen湖北省竹溪县丰溪镇tangshen重庆市奉节县龙桥乡tangshen重庆市奉节县长安乡tangshen重庆市奉节县长安乡tangshen重庆市巫山县庙宇镇tangshen重庆市巫山县庙宇镇tangshen重庆市巫山县庙宇镇tangshen重庆市巫溪县夏布坪tangshen重庆市巫溪县兰英乡tangshen重庆市南川市黄草坪tangshen重庆市南川市黄草坪pilosula山西省繁峙县　　　pilosula甘肃省文县中寨　　pilosula山西省忻州　　　　pilosulavar.modesta陕西省汉中市　　　pilosulavar.modesta陕西省洛南市　　　

置,分别在0,2,4,8,16,24,48h进样,党参炔苷峰面积RSD1163%,表明供试品溶液在48h稳定。2.7　重复性试验　取同一样品,按2.3项下方法制

备6份供试品溶液,并测定党参炔苷含量,RSD1156%。

2.8　加样回收试验　采用加样回收法,精密称取已

知含量(含量为010415%)样品,9份,分别精密加入不同量的党参炔苷对照品溶液,按样品溶液的制备方法处理,在同样色谱条件下测定其党参炔苷的含量,结果见表2。

表2　党参块茎中党参炔苷加样回收率

称样量样品中量/加入量/测得量回收率平均值

mg018308018307018309018307018307018309018309018308018309

mg

/mg

/%1021298181041410319100159819100181001310310

/%10118

RSD/%2175

016860115318016860115088016860115472018820117469018820117169018820117031111760210163111760210109111760210426

-1

液(20∶80),柱温30℃;体积流量1mL・min,检测波长268nm,进样量10μL。

　　10111　　10014　　　　2152　　1142　　

2.2　对照品溶液的制备　精密称取党参炔苷对照

2.9　样品测定　分别精密吸取样品溶液和对照品

品适量,加甲醇制成392mg・L的溶液,即得。2.3　样品溶液的制备　各批药材于60℃干燥3h,

-1

各10μL,注人高效液相色谱仪中,按2.1项下色谱条件测定,测定峰面积积分值,按外标法计算样品溶液中的党参炔苷含量,结果见表3,样品溶液的HPLC图见图1。

表3　样品中党参炔苷含量(n=3)

No.1

23456789101112粉碎,取药材粉末(过3号筛)约4g,精密称定,精密加入甲醇100mL,称重,置80℃水浴中索式提取3h,取出,放冷,用甲醇补足失重,摇匀,精密吸取上

%　

RSD116

117015011121401412160164212213111217清液50mL置100mL圆底瓶中,减压回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中(必要时超声),加甲醇至刻度,摇匀,0145μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。

2.4　线性关系　精密吸取392mg・L党参炔苷

-1

质量分数

01073

0102501045010860109401069010330101601050010250102501060587517174868RSD015511311301790188113019301391130137111215No.131415161718192021222324质量分数

010420102501016010960106101044010290101001004010100105001014367717862320对照品溶液适量,分别配置成61125,12125,2415,49,98,196,23512,31316mg・L的溶液。将上述

-1

对照品溶液进样,进样量10μL,以对照品的进样量对峰面积积分值进行回归,得回归方程为Y=148714X+151552,r=019999,党参炔苷在61125～392μg呈良好的线性关系。

2.5　精密度试验　精密吸取98mg・L的党参炔

-1

3　讨论

依次选用30%～100%甲醇、甲醇2011mol・

-1

L盐酸(1∶1,2∶1,1∶2),甲醇2氯仿(1∶1)为提取溶剂进行考察,结果发现样品用甲醇提取效果最佳,故

苷对照品溶液,重复进样6次,每次进样10μL,党・2134・

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面的研究均具有一定的意义。党参炔苷的存在,可

作为党参的一个重要鉴别和质量评价手段。在对含量测定结果分析时发现,川党参中党参炔苷的含量高于党参和素花党参这两个品种,另外,在对比不同川党参药材主要产区重庆市巫溪县、巫山县、奉节县、南川市、湖北省竹溪县、陕西省平利县的川党参药材中党参炔苷含量时发现,陕西省平利县、湖北省

A.对照品;B.样品;11党参炔苷

图1　党参炔苷对照品和川党参样品HPLC图

选定甲醇为提取溶剂。考察了超声、回流、索式提

取、冷浸共4种提取方法和不同提取时间,发现索式提取效率最高,结果选定用索式提取提取3h作为提取方法。因为药材中党参炔苷含量较低,也考察了1,2,4g3种药材用量进行提取,结果发现用4g药材进行样品溶液制备,进样量10μL,效果最佳。考察了乙腈2水、甲醇2水、乙腈2不同浓度醋酸水溶液,结果发现以乙腈2015%醋酸水溶液(20∶80)为流动相所得色谱图效果最佳。党参中醇溶性成分主要包括聚乙炔醇类和酚酸类等成分,作者分别考察了在230,254,268,285,290nm处样品溶液的色谱图,结合DAD三维图、峰形及个数,选择268nm作为检测波长。

聚乙炔类化合物党参炔苷是重要的特征性成分,对于党参类生药的品质评价以及化学系统学方　　

竹溪县、重庆市巫溪县3地药材党参炔苷相对含量较高,且3县地理位置相互靠近,也与其历来为川党参的主产区相映证。同时作者也发现同一产地的川党参药材中党参炔苷的含量也有一定差异,这是否与本实验采集样品时选择的土壤,气候,海拔等条件有联系,有待于进一步探索。[参考文献]

[1]　朱恩圆,贺　庆,王峥涛,等.党参化学成分研究[J].中国药科

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[2]　HEQing,ZHUEn2yuan,WANGZheng2tao,etal.Flavonesiso2

latedfromCodonopsisxundianensis[J].ChinPharmSci,2004,13(3):212.

[3]　贺　庆,朱恩圆,王峥涛,等.党参中党参炔苷HPLC分析[J].

中国药学杂志,2005,40(1):56.

[4]　赵晓华,刘养清,裴晓丽.党参中党参炔苷的HPLC分析[J].

山西中医学院学报,2006,7(5):49.

[5]　张勇慧,张锦文,阮汉利,等.参芪扶正注射液中党参药材

HPLC指纹图谱研究[J].中药材,2006,29(12):1355.

DeterminationoflobetyolininrootofCodonopsistangshenfrom

variouscultivationareasbyhigh2performanceliquidchromatography

SONGDan

1,2,3

,CHENGXue2mei

1,2,4

,LILong2yun,ZHONGGuo2yue,WANGZheng2tao

331,2,4

(1.InstituteofChineseMateriaMedica,ShanghaiUniversityofTraditionalChinesemedicine,Shanghai201203,China;

2.KeyLaboratoryofStandardizationofChineseMedicinesofMinistryofEducation,Shanghai201203,China;

3.ChongqingAcademyofChineseMateriaMedica,Chongqing400065,China;

4.ShanghaiR&DCenterforStandardizationofChineseMedicine,Shanghai201203,China)

[Abstract]　Objective:TodeterminelobetyolinintherootofCodonopsistangshenfromthevariouscultivationareas.Method:ASupelcoDiscoveryC18Column(416mm×250mm,5μm)wasusedwithacetonitrile2015%aceticacidinwater(20∶80)asthemobilephaseandUVdetectionwasat268nm.Result:Twenty2fourbatchesofthesampleswereanalyzed.Thecontentoflobetyolinrangedfrom0104032019667mg・g.Conclusion:Themethodwassimple,reproducibleandreliable.ItcanbeusedtocontrolthequalityofC.tangshen.

[Keywords]　Codonopsistangshen;highperformanceliquidchromatography;lobetyolin

[责任编辑　王亚君]

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