法律分析：不可以。根据法律规定，大客车在凌晨两点到五点不可以在国道行驶。由于高速公路本身的较低的安全系数。夜间能见度不高司机视认性差。夜间司机的驾驶疲劳，凌晨三四点是高速公路客车事故频发时段，大客车班次被安排在了五点之后，五点之前不允许行驶。禁止大客车行驶从根本上杜绝了此时间段的交通事故。大客车人多，安全第一。
法律依据：《中华人民共和国道路交通安全法》
第二十二条 机动车驾驶人应当遵守道路交通安全法律、法规的规定，按照操作规范安全驾驶、文明驾驶。
饮酒、服用国家管制的精神药品或者麻醉药品，或者患有妨碍安全驾驶机动车的疾病，或者过度疲劳影响安全驾驶的，不得驾驶机动车。
任何人不得强迫、指使、纵容驾驶人违反道路交通安全法律、法规和机动车安全驾驶要求驾驶机动车。
第二十四条 公安机关交通管理部门对机动车驾驶人违反道路交通安全法律、法规的行为，除依法给予行政处罚外，实行累积记分制度。公安机关交通管理部门对累积记分达到规定分值的机动车驾驶人，扣留机动车驾驶证，对其进行道路交通安全法律、法规教育，重新考试；考试合格的，发还其机动车驾驶证。
对遵守道路交通安全法律、法规，在一年内无累积记分的机动车驾驶人，可以延长机动车驾驶证的审验期。具体办法由国务院公安部门规定。
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