碧云天植物RIPA裂解液(强) 100ml 说明书

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植物RIPA裂解液(强)

产品编号 P0045-100ml

产品名称

植物RIPA裂解液(强)

包装 100ml

产品简介：

 碧云天生产的植物RIPA裂解液(Plant RIPA Lysis Buffer)是一种传统的植物细胞、组织或原生质体快速裂解液。植物RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。

 本产品可以用于植物细胞、组织或原生质体样品，也可以用于动物的细胞或组织样品、真菌或细菌样品。

 RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。关于不同的RIPA裂解液以及碧云天生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考我们的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm。

 植物RIPA裂解液(强)的主要有效成分包括1% Triton X-100、1% sodium deoxycholate和0.1% SDS等去垢剂，以及sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA和leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

 用植物RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/ P0012S)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

包装清单：

产品编号 P0045-100ml

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产品名称

植物RIPA裂解液(强)

说明书

包装 100ml 1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。

注意事项：

 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

 需自备PMSF。PMSF (ST506)可以向碧云天订购。也可以选购总体效果更佳的碧云天生产的P1045/P1046 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 50X)，或者根据具体用途选择P1055/P1056 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 50X)、P1048/P1049 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X)、P1050/P1051蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X)、P1060/P1061 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 50X)、P1065/P1066 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 50X)。如果无需检测磷酸化蛋白，也可以选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂化合物。  裂解样品的所有步骤都需在冰上或4ºC进行。  关于裂解液的选择，一方面可以参考碧云天的相关网页：http://www.beyotime.com/support/lysis-buffer.htm选择合适的裂解液；另一方面也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1. 对于培养的植物细胞样品：

a. 融解植物RIPA裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

b. 离心收集植物细胞，按照每50-100万细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，在冰上裂解2-10分钟。

c. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 2. 对于植物原生质体样品：

a. 把组织剪切成细小的碎片，制备原生质体。

b. (可选)质粒转化原生质体，继续培养16-48小时，并可以根据需要给予适当的实验条件处理。 c. 100-500g低速离心收集原生质体。

d. 融解植物RIPA裂解液，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

e. 按照每50-100万原生质体加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的原生质体沉淀。如果原生质体量较多，必需分装成50-100万原生质体/管，然后再裂解。大团的50-100万原生质体较难

裂解充分，而少量的50-100万原生质体由于裂解液容易和50-100万原生质体充分接触，相对比较容易裂解充分。 3. 对于植物组织样品：

a. 把植物组织剪切成细小的碎片。

b. 融解植物RIPA细胞裂解液(强)，混匀。取适量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

c. 按照每20毫克植物组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

d. 用玻璃匀浆器匀浆，或使用碧云天生产的E6600 TissueMaster™手持式组织研磨仪研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。

e. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

f. 如果植物组织样品本身非常细小和柔嫩，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解比较充分。

注：植物RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。

在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

附录：碧云天生产的各种裂解液主要特点、差异和选择

P0013J P0013K P0043 P0045 植物Western及RIPA裂解Western及Western及植物RIPARIPA裂解RIPA裂解RIPA裂解NP-40裂解SDS裂解IP细胞裂液(强，无产品名称 IP细胞裂IP细胞裂裂解液(强) 解液(无抑液(强) 液(中) 液(弱) 液液抑制剂) 解液解液制剂) 1% Triton 1% NP-40, 1% Triton 1% Triton 1% NP-40, X-100, 1% 0.5% X-100, 1% X-100, 1% 1% Triton 0.25% 1% Triton 1% Triton deoxycholdeoxychol1% NP-40 1% SDS deoxycholdeoxychola有效裂解成分 X-100 deoxycholX-100 X-100 ate, 0.1% ate, 0.1% ate, 0.1% te, 0.1% ate SDS SDS SDS SDS 裂解强度温和强中温和温和强温和强温和强对膜蛋白的提一般很好较好一般一般很好一般很好一般很好取对胞浆蛋白的很好很好很好很好很好很好很好很好很好很好提取对核蛋白的提较好很好较好较好较好很好较好很好较好很好取胞浆磷酸化蛋很好很好很好很好很好很好很好很好很好很好白提取细胞核转录因很好很好很好很好很好很好很好很好很好很好子提取含蛋白酶抑制是是是是是是否否是是剂含磷酸酯酶抑是是是是是是否否是是制剂不同物种样品高高高高高高高高高高兼容性植物WB, IP, WB, IP, WB, IP, WB, IP, 植物WB, IP WB, IP WB, ChIP WB, IP 主要用途 WB, IP, co-IP co-IP co-IP co-IP WB, IP co-IP  用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液(P0013)，该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用，发表大量SCI论文，用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。

 对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。

 对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强或中)或SDS裂解液。使用RIPA裂解液(强)的用户也非常多，发表了大量SCI论文。

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400-1683301/800-8283301 碧云天/Beyotime

首先请参考下表，了解各种裂解液的主要特点和差异。 P0013 P0013B P0013C P0013D 产品编号 P0013F P0013G  对于植物样品，优先推荐使用植物Western及IP细胞裂解液(P0043)和植物RIPA裂解液(强) (P0045)。P0043裂解性能良好，对于IP和co-IP有更好的兼容性；P0045的裂解能力更强，更适用于WB和IP，对于co-IP的兼容性不是很好。

 用于特定用途需要自行添加特定抑制剂或不需要添加抑制剂时，可以考虑选购P0013J或P0013K。P0013J在很多时候可以兼容酶活性和生物小分子的检测，对于特定的酶或生物小分子的检测是否兼容需要自行测试，碧云天不提供具体的应用信息。P0013J的裂解能力比P0013K弱一些，但用于酶活性和生物小分子时，P0013J的兼容性通常会更好一些。

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