D01：10.16488/j.cnki.l005-9873.2017.01.013
不同产地紫芝子实体中活性成分的测定分析
刘艳芳s应一君2，唐庆九s韩伟2，杨焱s周帅s张忠s冯娜s吴迪s张劲松h
p上海市农业科学院食用菌研究所，农业部南方食用菌资源利用重点实验室，国家食用菌工程技术研究中心，
国家食用菌加工技术研发分中心，上海市农业遗传育种重点开放实验室，上海201403;
2华东理工大学药学院，上海200237)
摘
要：对来自浙江省、老挝和福建省的紫芝（Gtmoderma
似e)(编号分别为GS-ZJ、GS-LW、GS-FJ)子实
体中水溶性多糖、卩-葡聚糖、海藻糖、糖醇、核苷和三萜等多种活性成分的含量进行测定。结果表明：GS-ZJ和
GS-LW中水溶性多糖的含量差异不显著，分别为1.27%和1.20%,GS-FJ中水溶性多糖含量相对较低，为
0.95%,三者(B-葡聚糖含量差异不显著，均在16%左右；GS-FJ中含有的海藻糖和糖醇含量较高，其中甘露醇 含量达到4037.7 仲/g,远高于另外两种紫芝子实体；核苷类成分比较结果显示，GS-FJ含量最高，其次为GS-
ZJ,GS-LW在种类和含量上均较少；但是GS-LW中三萜种类较丰富，其总三萜含量为538.8 吨/g,远高于另
外两种紫芝。
关键词：紫芝；多糖；三萜
灵芝是一种名贵的药用真菌，素有“仙草”之誉。在2010年出版的《中国药典》中把紫芝 (Ganoderma如6似6)和赤芝（G. ZwcidMm)的干燥子实体规定为灵芝的正品[1]。据文献报道，紫芝子 实体中含有多种丰富的活性物质，主要包括多糖、三萜、甾类、核苷类、生物碱、挥发油等[2_4]。药理实验 也表明紫芝在人体心脑血管、内分泌、消化、呼吸、神经、运动等各个系统均表现出一定的调节作用，尤 其是在免疫、肿瘤、肝脏病变、失眠以及抗衰老方面表现出十分显著的作用[5_6]。
一直以来，紫芝作为珍贵中药材，颇受欢迎，在药品和保健品领域均应用广泛。紫芝的生长发育和 其品质的形成受多种因素的影响，例如气候、土壤、品种和栽培条件等，并且不同地区由于生态环境、种 植习惯、采收时间以及采收方式等多种条件的不同，所产紫芝的形态以及成分种类和含量会存在较大 差异。目前，对不同产地紫芝的成分以及含量进行系统的测定未见报道，系统分析各个产地紫芝子实 体中的多糖、三萜、核苷、海藻糖和糖醇等成分的含量，对于建立紫芝子实体的质量评价方法及紫芝产 品的开发研究具有重要意义。
1
材料与方法
紫芝（G.
子实体分别来自浙江省龙泉县灵芝栽培基地（编号为GS-ZJ)、福建仙芝楼生物
1. 1材料与试剂
科技有限公司（编号为GS-FJ)、老挝灵芝栽培基地（编号为GS-LW)，60 °C烘干，用粉碎机（上海淀久公 司，DJ-10A)粉碎至60目备用。
标准品：赤藓糖醇、阿拉伯糖、甘露糖醇、海藻糖、葡萄糖和胞嘧啶、黄嘌呤等14种核苷标准品均购 自Sigma公司（美国）；灵芝酸八、：8、(22、0、0\\^、0、8、丁、灵芝烯酸6、灵芝醇：8和灵芝酮三醇等灵芝 三萜类化合物标准品（纯度大于95%)均由上海市农业科学院食用菌研究所加工技术研究室纯化并经 过结构和纯度鉴定；|3-葡聚糖试剂盒购自M
egazyme公司（爱尔兰）；色谱级乙腈、甲醇购自安普科学仪
收稿日期：2016-12-06原稿；2016-12-27修改稿
基金项目：农业部公益性行业(农业)科研专项（201303080)、上海市农委重点攻关项目[沪农科攻字（2015)第6-1-6
号]资助
作者简介：刘艳芳（1980 -),女，在读博士，副研究员，主要研究方向为真菌多糖化学。
* 本文通讯作者 E-mail:syjal6@saas.sh.cn
第1期刘艳芳，等：不同产地紫芝子实体中活性成分的测定分析73
器有限公司，其它试剂均为国产分析纯。
1.2仪器
2695型高效液相色谱仪(美国Waters公司），2996型二极管阵列检测器（美国Waters公司），ICS- 2500 型高效离子色谱仪 （美国 Dionex 公司 ），HWS24 型电热恒温水浴锅 （上海一恒科学仪器有限公 司），旋转蒸发仪(瑞士 BtiCHI公司），FA2004型分析天平（上海精密科学仪器有限公司）。
1.3水溶性多糖和|5—葡聚糖含量测定
水溶性多糖含量测定：精密称取粉碎后的样品1 g，置50 mL离心管中，加人85%乙醇50 mL，超 声处理（功率250 W、频率40 kHz)0.5 h，室温放置1 h，10000 g离心15 min，弃上清液，重复上述步骤 1次。将残渣移人l〇〇mL容量瓶中，加水80mL，100°C水浴提取2h。提取液静置至室温后定容至 100 mL，取上清液参照文献[7]中所描述的苯酚-硫酸法测定各提取液中的多糖含量。
|3 _葡聚糖的含量测定，按照试剂盒所述操作步骤进行。
1.4海藻糖和糖醇含量测定
精密称取粉碎后的样品1 g于带塞三角瓶中，加1〇〇 mL超纯水，沸水浴2 h，冷却后，转移到容量 瓶中定容至1〇〇 mL，混勻后取2 mL溶液于离心管中，在13400 g条件下离心15 min，取上清液。采用 高效阴离子色谱-脉冲安培法（high performance anion exchange chromatography-pulse ampere
detector，HAPEC-PAD)测定海藻糖和糖醇的含量[8]。1.5核苷含量测定
精确称取0.5 g粉碎后的样品于15 mL离心管中，加人15 mL蒸馏水，超声（功率250 W、频率 40 kHz)提取0.5 h，提取液在13400 g转速下离心20 min，上清液用0.22
1.6三萜含量测定
水相膜过滤后，进行高效
液相（high performance liquid chromatography,HPLC)分析，色谱条件同文献[9]。
精确称取0.5 g粉碎后的样品于15 mL离心管中，加人10 mL无水乙醇，超声提取30 min，提取 液于13400 g条件下离心15 min，取上清液用0.22 条件同文献[10]。
1.7数据处理
表1
不同产地紫芝子实体水溶性多糖和P-葡聚糖含量
有机相膜过滤，对滤液进行HPLC分析，色谱
以上各试验均重复三次，测定 结果取平均值，利用SPSS软件对 含量进行差异显著性分析。
Table 1 Water-soluble polysaccharide and p-glucan levels in
G. sinense fruit bodies cultivated at different locations样品
Sample GS-ZJ GS-FJ GS-LW
水溶性多糖含量
Water-soluble polysaccharide
1.27±0.07 a 0.95±0.02 b 1.20±0.06 a
卩-葡聚糖含量
(3-Glucan15.97 ±0.46 a15.28 ±0.075 a16.71 ±0.23 a
2
结果与分析
2.1水溶性多糖和|3-葡聚糖含量 分析
水溶性多糖和卩-葡聚糖含量 测定结果见表1，GS-ZJ和GS-LW 中水溶性多糖含量均在1.20%以 上，二者无显著性差异，GS-FJ中 多糖含量较低，为0.95%;三种紫
数据为三次百分数平均值土标准误，不同小写字母表示差异显著（尸<0. 05) Values
are the means (expressed as percentage dry weight of fruit body) 土 SD (n = 3);
Different lower case letters indicate a significant difference at P 0.05；GS-ZJ, GS-FJ and GS-LW represent G. sinense fruit bodies originating from Longquan County in Zhejiang Province, GanoHerb Bio-Technology Group (Fujian Province) and Laos, respectively
芝中的卩-葡聚糖含量差异不显著，均在16%左右。
2.2海藻糖和糖醇含量分析
如表2所示，紫芝子实体中不仅含有多糖，还含有多种游离的糖醇、海藻糖和葡萄糖。不同产地紫 芝子实体在游离单糖和糖醇的种类上相似，均含有赤藓糖醇（除GS-FJ外）、阿拉伯糖、海藻糖、甘露糖 醇和葡萄糖，但是在各成分的含量上存在较大差异。GS-FJ虽未检测到赤藓糖醇，但其它成分含量均 较高，其甘露糖醇含量达到4037.7 pg/g。
74食用菌学报
第24卷
表2三种紫芝子实体海藻糖和糖醇含量比较
Table 2 Trehalose and alditol levels in G. sinense fruit bodies cultivated at different locations
样品
SampleGS-ZJGS-FJGS-LW
数据为三次平均值
赤藓糖醇
Erythritol566.3±68.9 a
-87.4±7.0 b
阿拉伯糖
Arabitol134.6±5.9 b1253.5 ±124.9 a246.4±73.1 b
甘露糖醇
Mannitol207.1±2.8 b4037.7±91.2 a649.0 ±0.170 b
海藻糖
Trehalose344.2±110.0 a560.6± 117.9 a407.7± 123.7 a
葡萄糖
Glucose596.1 ±41.3 ab1345.7 ±472.0 a231.7± 18.5 b
±标准误，数值单位为Mg/g，不同小写字母表示差异显著（P<0.05)，-：未检测到
ValuesCexpressed as /xg/g dry weight of fruit body) are the means 土 SD (n = 3); Different lower case letters indicate a significant difference a.t P 0.05, - ： None detected
2.3核苷含量分析
表3结果显示，不同产地紫芝子实体中核苷种类和含量都有明显差异。GS-FJ和GS-ZJ中核苷含 量远高于GS-LW。GS-FJ中主要含有尿苷、鸟苷和腺苷，含量均超过180 yg/g。GS-ZJ中主要含有胞 苷和尿苷，含量均高于1〇〇 yg/g。
三种紫芝子实体核苷含量
Table 3 Nucleoside levels in G. sinense fruit bodies cultivated at different locations
名称
SampleGS-ZJGS-FJGS-LW
注同表
表3
尿嘧啶
Uracil12.6±1.1 b31.3±3.0 a25.9±6.8 a
胞苷
Cytidine119.3±4.2 a118.7±13.9 a
-
黄嘌呤
Xanthine
-10.7±0.1 a
-
尿苷
Uridine199.8±3.0 b
腺嘌呤
Adenine7.5 + 0.2 b
肌苷
Inosine5.5±2.2 b26.7±5.6 a6.0±1.1 b
鸟苷
Guanosine51.7±6.1 b213.8±39.6 a20.9±4.0 b
胸苷
Thymidine22.0±0.4b11.3±6.3 b46.8±9.2 a
腺苷
Adenosine51.8±4.4 b184.0±21.8 a25.8±5.2 b
276.1 ±17.0 a15.6±3.0 a96.6±7.6 c
-
2 Footnotes as in Table 2
2.4三萜含量分析
高效液相色谱法测定三萜含量结果见表4。12种灵芝三萜标准品中，灵芝酸G、灵芝烯酸B、灵芝 酸B和灵芝酸D在三种紫芝子实体中均未测出，福建（GS-FJ)和浙江（GS-ZJ)的紫芝子实体三萜种类 相近，总三萜含量均较低。而老挝紫芝（GS-LW)中三萜种类相对较丰富，总三萜含量为538.8 yg/g，远 高于另外两种子实体。
GS-LW中含有较多的灵芝酮三醇和灵芝醇B，GS-FJ中含量相对较多的为灵芝酸F和灵芝酸 DM，GS-ZJ中含量最多的则为灵芝酸DM。此外，GS-LW中还含有灵芝酸(22和灵芝酸A，而GS-FJ
和GS-ZJ中均未检测到，表明不同产地紫芝中三萜种类和含量上有较大差异。
三种紫芝子实体三萜含量比较
Table 4 Triterpenoid levels in G. sinense fruit bodies cultivated at different locations
灵芝酸
名称
SampleGS-ZJGS-FJGS-LW
注同表
表4
灵芝酸A
Ganoderic acid A--42.1±0.0 a
灵芝酸F
Ganoderic acid F68.1±1.4a71.3±1.2 a63.3 + 17.8 a
灵芝酸DM
灵芝酮三醇
Ganodermanontriol
34.8±2.5 a39.6±0.7 a105.3±48.1 a
Ganoderic acid DM83.7±0.8 a53.9±1.4a
灵芝酸s
Ganoderic acid S30.2±4.6 a37.6±2.3 a
灵芝酸T
Ganoderic acidT28.5±3.8 a28.5±0.0 a
灵芝醇B
Ganoderiol B
总含量
Totaltriterpenoids
C2 Ganoderic acid C2--37.7±0.0 a
29.7±4.6 b22.5±0.0 b
274.7±4 b253.3±12c538.8±18 a
78.0±22.7 a38.5± 8.3 a27.5±4.4 a146.5±3.0 a
2 Footnotes as in Table 2
3
讨论
紫芝子实体中含有多种活性物质，主要包括多糖、三萜、核苷等，多糖在提高免疫[11]、抗肿瘤[12]、抗
氧化[13]等方面具有很好的功效，三萜具有抗肿瘤、保肝等多种生物活性，核苷类成分在肝炎[14_15]、抗病 毒等方面具有显著的生物活性。本研究在对不同产地紫芝子实体中以上几种成分进行测定的基础上， 还对海藻糖和糖醇成分进行了测定比较，进一步完善了紫芝中化学成分的分析，为不同产地紫芝质量
第1期刘艳芳，等：不同产地紫芝子实体中活性成分的测定分析75
的综合评价提供科学依据。
测定结果表明，不同产地的紫芝子实体|3-葡聚糖含量均为16%左右，浙江产地的紫芝子实体水溶 性多糖含量较高，可以作为后续多糖纯化研究的原料。三种紫芝子实体在其它化合物的种类和含量上 均有一定的差异，福建紫芝中糖醇和核苷类化合物的含量较高，老挝紫芝中三萜含量较高，这可能与菌 种本身及不同地区的气候、栽培条件等因素有关。三萜是紫芝中的一类主要活性成分，与赤芝相比，紫 芝子实体在三萜的种类和含量上均较少[16]，以极性较弱的中性三萜为主[17]。今后可从老挝紫芝中分 离得到三萜类化合物，与赤芝中的成分进行进一步比较。
参考文献
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76食用菌学报第24卷
Bioactive Component Profiles of Ganoderma sinense Fruit Bodies Cultivated in Three Different Regions
LIU Yanfang1 , YING Yijun2, TANG Qingjiu1 , HAN Wei2, YANG Yan1 , ZHOU Shuai1 ,
ZHANG Zhong1 , FENG Na1 , WU Di1, ZHANG Jingsong1*
(institute of Edible Fungi, Shanghai Academy of Agricultural Sciences； Key Laboratory of Edible Fungi Resources and Utilization (South), Ministry of Agriculture, P.R. China； National Engineering Research Center of Edible Fungi； National KSd) Center for Edible Fungi Processing； Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding of Shanghai, Shanghai 201403, China； 2College of Pharmacy, East China University
of Science and Technology, Shanghai 200237, China)
Abstract： Water-soluble polysaccharide, (3-glucan, trehalose, alditol, nucleoside and triterpenoid profiles
were determined for Ganoderma sinense fruit bodies cultivated in Longquan County, Zhejiang Province (GS- ZJ), at the GanoHerb Bio-Technology Group facility located in Fujian Province (GS-FJ) and in Laos (GS- LW). Water-soluble polysaccharide levels in GS-ZJ, GS-LW and GS-FJ were 1.27%, 1.20% and 0.95% respectively, whereas (3-glucan levels were similar (〜16%) in all three samples. GS-FJ fruit bodies contained the highest amounts of nucleosides, trehalose and alditols. Highest mannitol levels (up to 4037.7 jug/g dry weight) were also recorded in these samples whereas the highest triterpenoid levels (538. 8 jug/g) were detected in GS-LW fruit bodies.
Key words ： Ganoderma sinense ； water-soluble polysaccharide ； triterpenoid
[本文编辑]王瑞霞
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