金银花及土壤中三唑酮残留量的气相色谱测定方法

河南农业科学　金银花及土壤中三唑酮残留量的气相色谱测定方法　刘清浩　，一，刘红彦　，王恒亮　，刘新涛　，张玉军　（１．河南省农业科学院植物保护研究所，河南郑州４５０００２；２．河南工业大学，河南郑州４５００５２）　摘要：对金银花、土壤中三唑酮残留量测定的气相色谱方法进行了研究。样品用丙酮一水进行提　取，经二氯甲烷液一液分配。金银花样品需经过弗罗里硅土与活性炭柱净化，用气相色谱、氮磷检　测器、ＯＶ一１７毛细管柱进行检测。外标法定量，该方法的回收率均大于８３％，最低检出量为　０．０９５　ｒａｇ，最低检出浓度为０，００９５　ｍｇ／ｋｇ（花蕾）和０．００２３７５　ｒｎｇ／ｋｇ（土壤）。　关键词：金银花；三唑酮；残留量；气相色谱　中图分类号：Ｓ５６７．７＋９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４—３２６８（２００６）０３—００８９—０３　ＧＣ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｒｉａｄｉｍｅｆｏｎ　Ｒｅｓｉｄｕｅｓ　ｉｎ　Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ　ａｎｄ　Ｓｏｉｌ　ＬＩＵ　Ｏｉｎｇ—ｈａｏ　’　，ＬＩＵ　Ｈｏｎｇ—ｙａｎ　，ＷＡＮＧ　Ｈｅｎｇ—ｌｉａｎｇ　，ＬＩＵ　Ｘｉｎ　ｔａｏ　，ＺＨＡＮＧ　Ｙｕ—ｊｕｎ２　（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｈｅｎａｎ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５０００２，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　０ｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ　４５００５２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒｉａｄｉｍｅｆｏｎ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｉｎ　ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ　ａｎｄ　ｓｏｉｌ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂ—　ｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅ￣ｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ａｃｅｔｏｎｅ＊ｗａｔｅｒ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ　ｂｙ　ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ．Ａｎｄ　ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｌｅａｎｅｄ　ｕｐ　ｏｎ　ａ　ｃｏｌｕｍｎ　ｏｆ　Ｆｌｏｒｉｓｉｌ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｅａｒ—　ｂｏｎ　ｍｉｘｔｕｒｅ．Ｆｉｎａｌｌｙ　ｔｒｉａｄｉｍｅｆｏｎ　ｗａｓ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｏｔｈｅｒ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＯＶ一１７　ｃａｐｉｌｌａｒｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｌｕｍｎ．ａｎｄ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＮＰＤ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｒｉａｄｉｍｅｆｏｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｅｘｔｅｍａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　ｏｖｅｒ　８３％．ｔｈｅ　ｍｉｎｉｒ¨ｌ１ｌｎ　ｄｅｔｅｃ—　ｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔ　ｗａｓ　０．０９５ｎｇ，ｔｈｅ　ｌｏｗｅｓｔ　ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　０．００９５　ｍｇ／ｋｇ（ｆｏｒ　ｆｌｏｗｅｒ）ａｎｄ　０．００２３７５　ｍｇ／ｋｇ（ｆｏｒ　ｓｏｉｌ）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｈｏｎｅｙｓｕｃｋｌｅ；Ｔｒｉａｄｉｍｅｆｏｎ；Ｒｅｓｉｄｕｅ；ＧＣ　在中药材病虫害防治中，农药的不合理使用造　低毒、低残留、持效期长、内吸性强的杀菌剂㈨，广　成农药在中药材中的高残留。近年来，随着中药材　泛用于防治金银花白粉病，目前，尚未见报道金银花　规范化管理（ＧＡＰ）的实施，国内外加强了中药材中　中三唑酮残留量的测定方法。本研究对此进行了研　农药残留的检测和控制，以确保中药材安全和有效　究，以便为制定三唑酮在金银花上的安全使用标准　地使用…。对中药材中农药残留量检测的报道已　奠定基础，并满足金银花质量评价的需要。　有一些，如孙秀燕等用ＧＣ—ＰＣＩ—Ｍｓ法测定了金　银花、人参中的有机磷类农药残留量ｌ２　；韩桂茹等　１材料与方法　，　与日本学者联合采用气相色谱法对金银花等５种中　１．１仪器　药材和２种中成药中的有机磷残留进行了测定ｌ３　；　ＧＣ一１７Ａ气相色谱仪（岛津有限公司产品），配　卫煜英等用气相色谱法检测金银花中杀螟松的残留　套设置：毛细管色谱柱，固定液：２％ＯＶ一１０１；ＮＰＤ　量【　；薛健等用高效液相色谱法测定金银花中保卫　检测器、ＪＫＱ—ｌ０净化空气发生器、ＳＧＨ一３００高纯　田的残留量ｌ５５。三唑酮（ＴｒＪｉａｄｉｍｅｆｏｎ）是一种高效、　氢发生器、ＰＹＢ型普通摇床、４０／６０目标准分样筛、　收稿日期：２００５—０９～２８　基金项目：国家科技攻关计划（２００１ＢＡ７０１Ａ５８—０１）　作者简介：刘清浩（１９７９一），女，河南南阳人，在读硕士研究生，主要研究方向：应用化学。　通讯作者：刘红彦（１９６４一），男，河南嵩县人，研究员，博士，主要从事中药材规范化种植及植物病理学研究。　・　８９・　维普资讯 http://www.cqvip.com

２００６年第３期　ＣＬ１２离心机、Ｆｗ一８０微型高速万能试样粉碎机、　２５０　ｍｌ三角瓶中，水相再用２５　ｍｌ二氯甲烷萃取２　ＳＸ一２．５—１０箱式电阻炉、ＲＥＲ一５２旋转蒸发器、　次，合并有机相，经无水硫酸钠干燥，在旋转蒸发器　Ｓ卜玎３一ＩＩＩ循环水真空泵、ＪＪ３００精密电子天平、　（３５℃）上浓缩近于。土壤用５ｍｌ丙酮定容，经离心　ＦＡ１６０４移动电子天平。　后上气相测定。　１．２材料　１．５．２．２柱层析对金银花花蕾浓缩液选用３０　试验用金银花及土壤采自河南封丘金银花田。　ｃｍ（长）×２　ｃｍ（内径）的层析柱，在玻璃层析柱中依　１．３试剂　次装入少许脱脂棉，２　ｃｍ厚无水硫酸钠，１２　ｇ混合　三唑酮标准品纯度为９９．８％，由国家标准物质　吸附剂［弗罗里硅土：活性炭＝１０：１（ｗ　）］，２　ＣＩＴＩ　研究中心提供。丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷均为Ａ．　厚无水硫酸钠。用２５　ｍｌ氯仿：丙酮混合液为１９：１　Ｒ．级，所用溶剂全部经过全玻璃蒸馏装置重蒸馏。　（Ｖ／、厂）预淋，将浓缩的样品转入到层析柱中，用１３０　氯化钠、无水硫酸钠均为分析纯；弗罗里硅土（６０～　ｍｌ上述混合液分多次淋洗，收集淋出液，然后在旋　１００目）、装柱子用的无水硫酸钠（７００℃灼烧５　ｈ）、　转蒸发器（４０℃）上浓缩近干，残留物用５ｍｌ丙酮定　酸性处理的活性炭【７ｌ。　容，离心后上气相测定。　１．４标准溶液的配制　１．５．３气相色谱测定条件色谱柱：毛细管柱，固　用电子天平（精确至０．０００１　ｇ）称取约０．００９５　ｇ　定液：２％ＯＶ一１０１；检测器：ＮＰＤ；检测温度：色谱柱　的三唑酮标准品，用丙酮溶解并定容至１００　ｍｌ，所　２２０℃，检测器２９０℃，进样口２９０℃；载气：Ｎ２，３０　配母液浓度为９５　ｍｇ／Ｌ，放于冰箱中保存。并用丙　ｍｌ／ｍｉｎ，燃烧气：Ｈ２，４０　ｋＰａ（压力），空气：５０　ｋＰａ（压　酮将上述母液稀释成０．０９５，０．４７５，０．９５，１，９，　力），尾吹气：３０ｋＰａ（压力）；进样量：５　；保留时间　４．７５，９．５　ｍｇ／Ｌ系列浓度的标准液，制作标准曲线。　（ＴＲ）３．６ｒａｉｎ。用外标法定量。　１．５测试样品制备【８－　２结果与分析　１．５．１提取准确称取粉碎的金银花花蕾（过６０　目筛）５．０　ｇ或土壤１０．０　ｇ（过４０目筛），置于２５０　ｍｌ　２．１　色谱条件的选择　具塞三角瓶中，加８０　ｍｌ丙酮及２０　ｍｌ蒸馏水，浸泡　当选用柱温２１０℃，检测器温度２９０℃，进样口　过夜用振荡器提取１　ｈ，真空抽滤。残渣中加入５０　温度２９０℃，载气：Ｎ２：５０　ｍｌ／ｍｉｎ，燃烧气：Ｈｚ：４０　ｍｌ丙酮及３０　ｍｌ蒸馏水，用振荡器提取３０　ｍｉｎ，合　ｋＰａ（压力），空气：５０　ｋＰａ（压力），尾吹气一３０　ｋＰａ（压　并滤液。　力），进样量：２　ｌ时，出的峰太小，三唑酮的保留时　１．５．２净化　间太短；当提高柱温至２２０℃，Ｎ２流速减小到３０　１．５．２．１液一液分配提取液在旋转蒸发器上浓　ｍｌ／ｍｉｎ，进样量５肚ｌ时，出峰比较好，且保留时间为　缩，除去大部分丙酮，然后移至２５０　ｍ１分液漏斗中，　３．６　ｒａｉｎ左右。　加入３０　ｍｌ饱和ＮａＣ１水溶液，４０　ｍｌ二氯甲烷，５０　在本试验条件下，三唑酮标准品及金银花、土壤　ｍｌ蒸馏水，振摇２　ｍｉｎ后静止分层。有机相移至　样品的气相色谱分离情况见图１。　３．６ｌ１　花奢空白　花蕾样品　土壤空白　±ｊＩ样品　图１三唑酮在金银花、土壤中的色谱峰　・　９０－　维普资讯 http://www.cqvip.com

河南农业科学　２．２线性范围　在上述色谱条件下，分别进样，进样浓度在　０．０９５－９，５　ｍｇ／Ｌ。峰面积（ｙ）与进样量（ｘ）呈线性　好地防止乳化现象。样品提取液中的水经无水硫酸　钠干燥后，不影响测定结果，同时可减少农药的损　失。　关系，线性方程为：ｙ＝１９６９，ｌｘ＋１９５５．８，ｒ＝０．９９９，　见图２。　ｌ２００００　ｌ０００００　金银花提取液中含有大量的色素和杂质，虽然　测定时无干扰峰影响，但是会污染检测池，时问长会　造成进样出峰出现拖尾，所以必须通过净化柱除去。　选用弗罗里硅土与活性炭柱，能除去大部分的色素　和杂质。　蓬８００００　６０００Ｏ　４００００　本试验建立的金银花中三唑酮的提取、净化和　测定方法，添加回收率在８０％以上，符合农药残留　分析要求，为下一步制定金银花上三唑酮安全使用　标准奠定了基础。　ｌ０　２０　３０　４０　５０　２００００　０　０　进样量（ｎｇ）　参考文献：　图２三唑酮标准曲线　［１］粱祈，魏雪芳．中药材黄芪中有机氮农药残留量的液　相色谱检测方法［Ｊ］．分析测试学报，２０００。１９（２）：２５　—２．３方法检测限及回收率　２８．　２．３．１方法的最低检出限将标准品稀释成一系　列浓度，以２倍的噪声作为方法最低检出限，以花蕾　１０　ｇ或土壤４０　ｇ计算出最低检出浓度。最低检出　量是０，０９５　ｎｇ，最低检出浓度是０．００９５　ｍｇ／ｋｇ（花　［２］　孙秀燕，王立云，王素娟，等＋中药材中有机磷类农药　残留量的ＧＣ—ＰＣＩ—ＭＳ法测定（Ｉ）［Ｊ］．分析测试学　报，２００３，２２（３）：３５　３８．　陈太平．杨建红．中药中有机磷农药残留量的　［３］　韩桂茹。研究［Ｊ］．中国中药杂志，１９９６，２１（１２）：７２３．　蕾）或０．００２３７５　ｍｇ／ｋｇ（土壤）。　２．３．２回收率在样品中分别加入相当于测试样　品中含三唑酮０．１，０．５，５　ｍｇ／ｋｇ的标准溶液，按上　述提取、净化、测定操作程序进行，平均回收率及变　异系数（（、Ｖ）均达到农药残留分析要求（表１）。　表１三唑酮在不同浓度下的回收率　卫煜英，张利民，柳莺．气相色谱法检测金银花中杀螟　松的残留量［Ｊ］．药物分析杂志，１９８８，８（５）：３１３—３１４．　薛健，陈建民．高效液相色谱法测定金银花中保卫田　残留量［Ｊ］．分析试验室，１９９６，１５（３）：８２—８３．　周昱，林立毅．水果中三唑酮　龋量的气相色谱和气　相色谱一质谱分析［Ｊ］．分析化学研究报告，１９９７，２５　（５）：５１０—５１４．　中华人民共和国国家进出口商品检验局《食品分析大　全》编写组．食品分析大全（第一卷）［Ｍ］．北京：高等　教育出版社，ｔ９９７．１５—１６．　中国标准出版社第一编辑室．农药残留国家标准汇编　［Ｍ］．北京：中国标准出版社，１９９９．１３５—１３７．　农药残留使用检测方法手册（第一卷）［Ｍ］．北　［９］　李本昌．京：中国农业科技出版社，１９９５．３７１—３７６．　３讨论　刘墨祥，张春红，等．连翘等３种中药材中有　［１Ｏ］　李月茹，机氯农药残留量研究［Ｊ］．吉林农业大学学报，２００１，　２３（１）：７２—７６．　金银花样品在提取过程中极易产生乳化现象，　先加入饱和ＮａＣ１溶液，再ＪＪＨ－－氯甲烷来萃取，能更　・　９ｌ　・