阴离子交换色谱—积分脉冲安培检测法分离测定氨基酸注射液中的氨基酸和葡萄糖

维普资讯 http://www.cqvip.com 第２０卷第５期　２００２年９月　色　谱　Ｖｏ１．２０　Ｎｏ．５　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２００２　ＯＦ　ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹ　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　一一—一　—：　一一　一一—＝＝＝＝＝＝＝Ｉ＝＝＝—＝＝二—＝＝＝：＝＝＝＝＝＝＝＝＝—＝＝＝＝＝＝　阴离子交换色谱．积分脉冲安培检测法分离测定　氨基酸注射液中的氨基酸和葡萄糖　于　泓　，一，　丁永　胜　，　牟世芬ｌ’２　（１．中国科学院生态环境研究中心，北京１０００８５；２．Ｄｉｏｎｅｘ中国有限公司应用研究中心，北京１０００８５；　３．哈尔滨师范大学化学系，黑龙江哈尔滨１５００８０）　摘要：用阴离子交换色谱一积分脉冲安培检测法测定了氨基酸注射液中１７种氨基酸和葡萄糖。研究了氨基酸和葡　萄糖在阴离子交换色谱中的保留行为。采用了优化的水、ＮａＯＨ和ＮａＡｃ三元梯度淋洗条件。在优化的梯度淋洗　条件和积分脉冲安培检测条件下，氨基酸和葡萄糖的检出限为０．３　ｐｍｏｌ～１０．３　ｐｍｏｌ，线性范围约为２个数量级　样品加标回收率为８８．３％～１０４．６％。方法简单、灵敏、准确。　关键词：阴离子交换色谱；积分脉冲安培检测；氨基酸；葡萄糖；氨基酸注射液　中图分类号：０６５８　文献标识码：Ａ　文章编号：１０００—８７１３（２００２）０５—０３９８—０５　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　Ｇｌｕｃｏｓｅ　ｉｎ　Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄ　Ｉｎｊ　ｅｃｔｉｏｎ　ｂｙ　Ａｎｉｏｎ　Ｅｘｃｈａｎｇｅ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｗｉｔｈ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｐｕｌｓｅｄ　Ａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ＹＵ　Ｈｏｎｇ　一，ＤＩＮＧ　Ｙｏｎｇ—ｓｈｅｎｇ　，ＭＯＵ　Ｓｈｉ—ｆｅｎ　，２　（１．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒｆｏｒ　Ｅｃｏ－Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔｈｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆＳｃｉｎｅｃｅｓ，ＢｅＯｉｎｇ　１０００８５，Ｃｈｉｎａ；　２．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏＤｉｏｎｅｘ　ｈＣｉｎａ　Ｃｏ．Ｌｔｄ．，ＢｅＯｉｎｇ　１０００８５，Ｃｈｉａｎ；　３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｆｏＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｈａｒｂｉｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｍｉ￣，Ｈａｒｂｉｎ　１５００８０，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｄｉｒｅｃｔ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｉｎ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ａｎｉｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｗｉｔｈ　ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　ｐｕｌｓｅｄ　ａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．Ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ｎｏ　ｎｅｅｄ　ｆｏｒ　ｓａｍｐｌｅ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｂｅｈａｖｉｏｒ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｎｉｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ　ａｎｄ　ｓｏｄｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｓ　ｅｌｕｅｎｔ．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ　ｗａｓ　ｃｈａｎｇｅｄ，ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｔｅｎ—　ｔｉｏｎ　ｔｉｍｅｓ　ｗａｓ　ｇｅｎｅｒａｌｌｙ　ｇｒｅａｔｅｒ　ｆｏｒ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｔｈａｎ　ｆｏｒ　ｇｌｕｃｏｓｅ．Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｉｍ—　ｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｍａｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ　ｗａｓ　ｃｈａｎｇｅｄ，ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ　ｔｉｍｅｓ　ｗａｓ　ｇｅｎｅｒａｌｌｙ　ｇｒｅａｔｅｒ　ｆｏｒ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｔｗｏ　ｃａｒ—　ｏｂｘｙｌ　ｇｒｏｕｐｓ　ｔｈａｎ　ｆｏｒ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｏｎｌｙ　ｏｎｅ　ｃａｒｂｏｘｙｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉ—ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｍｏｎｏ—ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ．Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｅｓｐａｒａｔｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ，ａ　ｔｅｒｎａｒｙ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｉｔｈ　ｗａｔｅｒ，ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ　ａｎｄ　ｓｏｄｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｓ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅｓ　ｗａｓ　ｅｍｐｌｏｙｅｄ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙ—　ｓｉｓ　ｏｆ　１７　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｉｎ　ｍａｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　Ｔｈｅ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｐｒｏｇｒａｍ　ｗａｓ　７４　ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　３０℃，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃ—　ｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔｓ　ｆｏｒ　１７　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ｗｅｒｅ　０．３　ｐｍｏｌ一１０．３　ｐｍｏ１．Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｇｒａｐｈｓ　ｏｆ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ｆｏｒ　ａｌｌ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅｓ　ａｂｏｕｔ　ｔｗｏ　ｏｒｄｅｒｓ　ｏｆ　ｍａｇｎｉｔｕｄｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ（ＲＳＤｓ）（　＝５）ｗｅｒｅ　０．７％一３．８％．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ａｄｄｅｄ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｗｅｒｅ　８８．３％一　１０４．６％．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｎｉｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　ｐｕｌｓｅｄ　ａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ；　ｇｌｕｃｏｓｅ；ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　收稿日期：２００２—０３—１５　作者简介：于泓，男，１９６３年生，教授　通讯联系人：牟世芬，女，研究员，博士生导师，国际离子色谱学会委员会委员，Ｔｅｌ：（ｏｌｏ）６２８４９１８２，Ｆａｘ：（０１０）６２８４９２３９．Ｅ－ｍａ。ｌ　ｓｈｉｆｅｎｍ＠ｍａｉｌ．ｒｃｅｅ￣％．ａｃ　ｃｎ．　维普资讯 http://www.cqvip.com 第５期　于泓等：阴离子交换色薄积分脉冲安培检测法分离测定氨基酸注射液中的氨基酸和葡萄糖。３９９・　氨基酸注射液是一种常用的营养注射液，在对　其质量鉴定时，需要测定其中氨基酸和葡萄糖的含　量。目前，分离测定氨基酸的方法主要有柱后衍生、　光度检测的阳离子交换色谱法ｌ　，柱前衍生、光度　检测的反相高效液相色谱法［２，３］，毛细管电泳法ｌ　。　ｍｍ×２　ｍｍ　ｉ．ｄ．）。进样体积：２５　Ｌ。　淋洗条件：采用梯度洗脱，梯度洗脱条件见表　１，淋洗液流速为０．２５　ｍＬ／ｍｉｎ。　检测条件：积分脉冲安培检测波形见表２。　表１　分析氨基酸和葡萄糖的梯度洗脱条件　Ｔａｂｌｅ　ｌ　Ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ　测定葡萄糖的方法主要有衍生化气相色谱法＿５　Ｊ，直　接示差折光检测或衍生光度检测的高效液相色谱　法＿６，６＿脉冲安培检测的高效阴离子交换色谱法＿７　Ｊ及　毛细管电泳法［　。上述方法在测定氨基酸和葡萄　糖时，通常需要对氨基酸和葡萄糖进行衍生化处理，　操作繁琐，且重现性不是很好。１９９９年，Ｃｌａｒｋｅ等　人　９＿提出了一种积分脉冲安培检测波形，用阴离子　交换色谱一积分脉冲安培检测，无需衍生，直接分离　测定氨基酸和氨基糖的方法。这一技术已被用于蛋　Ｔｉｍｅ　Ｗａｔｅｒ　０．２５ｍｏｌ／Ｌ　１．０ｍｏｌ／Ｌ　、　＋　（ｍｉｎ）　Ｉｎｊｅｃｔ　ｓａｍｐｌｅ　２．０　５．０　８．０　ｌ１．０　ｌ８．０　２１．０　２３．０　４２．０　４２．１　４４．１　４４．２　７４．０　（％）　９０　ＮａＯＨ（％）　１０　ａＡｒ（％）　０．０　白质水解产物、胡萝卜汁、细胞培养基等样品中氨基　酸的测定　。　本文用阴离子交换色谱一积分脉冲安培检测技　术分离测定了氨基酸注射液中的氨基酸和葡萄糖，　研究了氨基酸和葡萄糖在阴离子交换色谱中的保留　行为，优化了色谱分离条件。　＊Ｔｈｅ　ｓｈａｐｅｓ　ｏｆ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｃｕ￣ｅｓ　ａｒｅ　ｄｅｆｉｎｅｄ　ｌｎ　ｔｈｅ　ＧＳ　５０　Ｇｒａｄｉｅｎｔ　Ｐｕｍｐ　Ｏｐｅｒａｔｏｒ’Ｓ　Ｍａｎｕａｌ，ＰＰ　３７，３８　ｌ　实验部分　１．１仪器与试剂　（Ｉ）ｉｏｎｅｘ　Ｌ￣）ｃｕｍｅｎｔ　Ｎｏ　０３１６１２。Ｒｅｖｉｓｉｏｎ　２）（、ｕｒｖｅ　５　ｉｓ　ｌｉｎ—　帅踮　知　Ｈ　Ｈ　加ｌ帅帅　８　ｌｅａｒ　ｗｈｉｅ　Ｃｕｒｖｅ　ｓ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ａｖａｉｌａｂｌｅ　ｃｏｎｃａｖｅ　ｃｕｒｖｅｓ　ｆ　６　９１　ｗｉｔｈ　２０％ｏｆ　ｃｈａｎｇｅ　ａｔ　ａ［ｘ）ｕｔ　６０％ｏｆ　ａ　ｔｉｍｅ　ｓｅｇｍａｅｎｔ　ａｎｄ　７０　ｌ　ｏｆ　ｃｈａｎｇｅ　ａｔ　ａｂｏｕｔ　９０　ｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｎｌｅ　ｐｒｃｇｒａｎｍａｅｄ　ｔｉｍｅ　ｓｅｇｍｅｎｔ　美国Ｄｉｏｎｅｘ　ＤＸ一６００型离子色谱仪，配有ＧＳ５０　ｍ　加　四元梯度泵，ＡＳ５０自动进样器，ＡＳ５０色谱柱室（温　度设定为３０℃），ＥＤ５０电化学检测器（金工作电　表２分析氨基酸和葡萄糖的检测波形　Ｔａｂｌｅ　２　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｆｏｒｍ　ｆｏｒ　ａｍｉｏ　ａｃｉｎｄｓ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ　极，ｐＨ参比电极，钛对电极），Ｐｅａｋ　Ｎｅｔ　６．１色谱工　知　作站。Ｂａｒｎｓｔｅａｄ超纯水系统（ＵＳＡ）。　１７种氨基酸混合标样（ＳＲＭ　２３８９　ＮＩＳＴ，　８　８　８　８　８　５　５　Ｇａｉｔｈｅｒｓｈｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ），Ｄ一葡萄糖（Ｓｉｇｍａ），乙酸　钠（Ｄｉｏｎｅｘ，ＵＳＡ），氢氧化钠、叠氮化钠（分析纯，北　京化学试剂厂），去离子水（１８．３　ＭＱ・ｃｍ）。　标准溶液的配制：用２０　ｍｇ／Ｌ叠氮化钠水溶液　配制氨基酸和葡萄糖的标准溶液。　淋洗液的配制：淋洗液包括去离子水、０．２５　ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＯＨ、１．０　ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＡｃ。去离子水需经过　０．２０　ｍ尼龙滤膜过滤后作为淋洗液。配制氢氧化　钠淋洗液时，先用固体氢氧化钠配制成质量分数为　５０％的氢氧化钠水溶液，放置２４　ｈ后，再用经过　０．２０　ｍ尼龙滤膜过滤的去离子水稀释配制成　０．２５　ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠淋洗液。配制乙酸钠淋洗液　２结果与讨论　２．１氨基酸和葡萄糖的阴离子交换色谱分离　本文选用ＮａＯＨ和ＮａＡｃ为淋洗液分离氨基酸　和葡萄糖。ＮａＯＨ使淋洗液呈碱性（ｐＨ＞１２），使氨　基酸和葡萄糖均以阴离子形态存在，因此，二者均可　时，直接用去离子水溶解固体乙酸钠配制成１．０　ｍｏｌ／Ｌ淋洗液，经过０．２０　ｍ尼龙滤膜过滤后使用。　１．２色谱条件　用阴离子交换色谱分离。ＮａＯＨ中的阴离子ＯＨ一　除了起淋洗离子作用之外，其强碱性介质亦使安培　检测器对氨基酸和葡萄糖有高的灵敏度。ＮａＡｃ中　色谱柱：Ｄｉｏｎｅｘ　ＡｍｉｎｏＰａｃ　ＰＡｌ０阴离子交换　柱，包括分析柱（２５０　ＩＴＩＩＴｔ×２　ＩＴＩＩＴｔ　ｉ．ｄ．）和保护柱（４０　维普资讯 http://www.cqvip.com 色　的阴离子Ａｃ对阴离子交换树脂的亲合力大于　ＯＨ，是一种较强的淋洗离子，对强保留的离子起　了“推”的作用。ＮａＡｃ对淋洗液ｐＨ的影响不大。　不同浓度的氢氧化钠作淋洗液分离¨种弱保　谱　第２０卷　由图２可知：随着乙酸钠淋洗液浓度的变化，含　两个羧基的氨基酸（谷氨酸、天冬氨酸）的保留时间　变化幅度较含一个羧基的氨基酸的保留时间变化幅　度大。这说明含两个羧基的氨基酸可能以近似二价　负离子形式被阴离子交换柱保留，而含一个羧基的　留氨基酸和葡萄糖的结果见图ｌ。由图ｌ可知：随　着氢氧化钠淋洗液浓度的变化，葡萄糖保留时间的　变化幅度小于氨基酸保留时间的变化幅度。可利用　氨基酸以近似一价负离子形式被阴离子交换柱保　留＿ｌ　。可利用这一差异改善含二个羧基的氨基酸　与含一个羧基的氨基酸之间的分离状况：　根据以上氨基酸和葡萄糖在阴离子交换柱中的　这一差异改善葡萄糖与氨基酸之间的分离状况。　保留行为，为实现ｌ７种氨基酸和葡萄糖的分离，实　验采用梯度洗脱方式分离氨基酸和葡萄糖，优化的　梯度洗脱条件见表１，在此条件下得到的分离结果　见图３　，／ｍｉｎ　图３　１７种氨基酸和葡萄糖混合标样的色谱图　ＮａＯＨ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｍｍｏｌ／Ｌ）　Ｆｉｇ．３　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ａ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆ　１７￣ｌｌｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　Ｂｃｏｓｅ　图１氢氧化钠浓度对氨基酸和葡萄糖分离的影响　Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｓｅ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｒｏｍ　Ｔａｂｌｅ　１；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｆｏｒｍ　ｆｒｏｍ　Ｔａｂｌｅ　２；ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ，０．２５　ｍＬ／ｍｉｎ；ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ。３０℃；ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｖｏｌｕｍｅ。２５　ｇＬ；　只用氢氧化钠作淋洗液难以将强保留的氨基　酸，如谷氨酸、天冬氨酸、胱氨酸和酪氨酸等从色谱　柱上洗脱下来，需用强淋洗剂乙酸钠作淋洗液将它　们洗脱。选用８０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＯＨ与不同浓度的乙　ＡｍｉｎｏＰａｃ　ＰＡ　１０　ｃｏｌｕｍｎ　ｓｅｔ　Ｐｅａｋｓ｛ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｐ．ｍｏｌ／Ｌ）：１．ａｒｇｉｎｉｎｅ　ｌ９．４）；２　ｌｙｓｉｎｅ　（７．９）；３　ｇｌｕｃｏｓｅ（１１．６）；４．ａｌａｎｉｎｅ（８．０）；５　ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ（７．７）；　６．ｇｌｙｃｉｎｅ（７．８）；７　ｖａｌｉｎｅ（７．８）；８　ｓｅｒｉｎｅ（７．８）；９　ｐｒｏｌｉｎｅ　（７．８）；１０．ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ（７．７）；１１　ｌｅｕｃｉｎｅ（７．９）：１２　ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ　（７．８）；１３．ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ（９．１）；１４．ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ（７．８）；１５．ｇｌｕｔａｍｉｃ　ａｃｉｄ　ｌ７．９）；１６　ａｓｐａｒｔｉｃ　ａｃｉｄ　ｌ８．０）；１７．ｃｙｓｔｉｎｅ《３．７）；１８　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　（７．９）　酸钠作淋洗液分离组氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、天冬　氨酸、胱氨酸和酪氨酸的结果见图２。　２．２氨基酸和葡萄糖的积分脉冲安培检测　在强碱性介质中，当在安培检测器的金工作电　极与参比电极之间施加足够高的电压时，氨基酸中　的氨基和葡萄糖中的羟基均可在金电极表面被氧　化，因此，二者均可用安培法检测。检测葡萄糖可采　用脉冲安培方法＿ｌ引，但脉冲安培方法不适用于检测　氨基酸。若要对氨基酸进行安培法检测，需采用积　分脉冲安培方法＿９．１　。这种方法既可检测氨基酸　ＮａＡｃ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｍｍｏｌ几１　亦可检测葡萄糖。积分脉冲安培法与脉冲安培法主　要有两方面不同：一方面是积分脉冲安培法采样时　的电位不是恒定的，而脉冲安培法采样时的电位是　恒定的；前者可降低基线噪音，使基线更稳定　另一　图２醋酸钠浓度对氨基酸分离的影响　ｌ在８０　ｎｍａｏｌ／ＬＮａＯＨ存在下）　Ｈｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ａｃｅｔａｔｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ（ｉｎ　８０ｍｍｏｌ／ＬＮａＯＨ）　方面是清洗电位施加次序不同，积分脉冲安培法是　维普资讯 http://www.cqvip.com 第５期　于泓等：阴离子交换色普积分脉冲安培检测法分离测定氨基酸注射液中的氨基酸和葡萄糖’４０１・　采用表ｌ的梯度洗脱条件、表２的检测条件、进　样２５　Ｌ，对氨基酸和葡萄糖的系列混合标样进行　测定，以信噪比为３计算检出限，以５次平行测定的　峰面积计算相对标准偏差，所得精密度、检出限和线　性范围数据列于表３。采用标准加入法检验了方法　的回收率，结果见表３。由表３可知，方法具有较好　的精密度、较低的检出限及较宽的线性范围。　先还原后氧化，而脉冲安培法是先氧化后还原；前一　方式可降低金电极表面损耗。采用积分脉冲安培法　时，施加于工作电极与参比电极之间的电压值与所　用电极有关　本实验用金工作电极，ｐＨ参比电极，　参考文献［９，１４］，确定了检测氨基酸和葡萄糖的电　位波形（见表２）。　２．３方法的精密度、检出限、线性范围及回收试验　表３方法的重现性、检出限、线性范围及回收试验（　＝５）　Ｔａｂｌｅ　３　Ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ．ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔ　ａｎｄ　ｌｉｎｅａｒｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ（　５）　２．４样品分析　氨基酸注射液用去离子水分别稀释ｌ　０００倍（测　定氨基酸）ＮＩＩＯ　０００倍（测定葡萄糖），经过０．４５　ｍ　滤膜过滤后，以选定的色谱条件进行测定，分析结果　见表４，所得色谱图见图４。　表４氨基酸注射液样品分析结果（７１＝５）　Ｔａｂｌｅ　４　Ｄｅｔｃｔｉｅｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆｔｈｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（”＝５）　ｒ／ｍＩｎ　图４氨基酸注射液样品（稀释１　０００倍）色谱图　Ｆｉｇ・４　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｎ　ａｍｉａｎｏ　ａｃｉｄ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｓａｍｐｌｅ　ｄｉｌｕｔｅｄ　ｆｏｒ　１　０００　ｔｉｍｅｓ　Ｔｈｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ　ａｒｅ　ｇｉｖｅｎ　ｉｎ　Ｆｉｇ．３．　３结论　氨基酸之间及氨基酸与葡萄糖之间在阴离子交　换色谱中的保留行为存在差异，利用这一差异改善　氨基酸之间及氨基酸与葡萄糖之间的分离状况，从　而实现了用阴离子交换色谱一积分脉冲安培检测直　接（无需衍生）、同时分离测定了氨基酸和葡萄糖。　维普资讯 http://www.cqvip.com ・４０２・　色　谱　第２０卷　通过实验得到了分离ｌ７种氨基酸和葡萄糖的最佳　梯度淋洗条件，并将此条件用于氨基酸注射液中氨　基酸和葡萄糖的分离测定。样品分析无需特殊前处　［５］　ｘＵ　Ｇｕｉ—ｙｕｎ，ＣＨＥＮ　Ｒｕ—ｘｉａｎ，ＣＨＡＮＧ　Ｌｉ—ｗｅｎ．Ｊｏｕｍａｌ　０ｆ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ，２０００，ｌ９（３）：７ｌ　徐桂云，陈汝贤，常理文．分析测试学报，２０００，１９　（３）：７ｌ　理。方法简单、灵敏、准确及易于操作。　ｌ６］Ｅｌ　Ｒａｓｓｉ　Ｚ．Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ　Ａ，１９９６，７２０：９３　ｌ７］Ｌｅｅ　Ｙ　Ｃ．Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ　Ａ，１９９６，７２０：１３７　参考文献：　ｌ　Ｍａｃｃｈｉ　Ｆ　Ｄ，Ｓｈｅｎ　Ｆ　ｊ，Ｋｅｃｋ　Ｒ　Ｇ，Ｈａｒｒｉｓ　Ｒ　ｊ．Ｉｎ：　Ｃｏｏｐｅｒ　Ｃ，Ｐａｃｋｅｒ　Ｎ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ　Ｋ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏ１．１　５９：Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．Ｔｏ—　［８］Ｅｌ　Ｒａｓｓｉ　Ｚ．Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，１９９９，２０：３　１３４　［９］Ｃｌａｒｋｅ　Ａ　Ｐ，Ｊａｎｄｉｋ　Ｐ，Ｒｏｃｋｌｉｎ　Ｒ　Ｄ，Ｌｉｕ　Ｙ，Ａｖｄａｌｏｖｉｃ　Ｎ．Ａｎａｌ　Ｃｈｅｍ，１９９９，７ｌ：２　７７４　ｌ　ｌ０］Ｊａｎｄｉｋ　Ｐ，Ｃｈｅｎｇ　Ｊ，Ｊｅｎｓｅｎ　Ｄ，Ｍａｎｚ　Ｓ，Ａｖｄａｌｏｖｉｃ　Ｎ．Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ　Ｂ，２００ｌ，７５８：ｌ８９　ｔｏｗａ　ＮＪ：Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ　Ｉｎｃ，２００１．９　：２　ＣＨＥＮ　Ｙｏｎｇ—ｂｏ，ＣＨＥＮＧ　Ｑｕｎ，ＲＡＯ　Ｂｉｎ，ＱＩＮ　Ｌａｎ．　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，２００１，１９（６）：５６０　［１１］ＪａｎｄｉｋＰ，Ｃｈｅｎｇ　Ｊ，Ｊｅｎｓｅｎ　Ｄ，Ｍａｎｚ　Ｓ，ＡｖｄａｋＭｃ　Ｎ．　ｎａｌＡ　Ｂｉｃｈｅｍ，２０００，２８７：３８　ｏ陈永波，程　群，饶　斌，覃　兰．色谱，２００１，１９　（６）：５６０　［１２］Ｇｊｅｒｄｅ　Ｄ　Ｔ，Ｓｃｈｍｕｃｋｌｅｒ　Ｇ，Ｆｒｉｔｚ　Ｊ　Ｓ．Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ，　ｌ９８０，１８７：３５　３：ＺＨＡＯ　Ｙｕａｎ—ｙｕａｎ，ＷＡＮＧ　Ｈｏｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｈｕａ—ｓｈａｈ．　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，１６（３）：ｌ８８　［１３］Ｒｏｃｋｌｉｎｅ　Ｒ　Ｄ，Ｐｏｈｌ　Ｃ　Ａ．Ｊ　Ｌｉｑ　Ｃｈｒｏｍａｌｏｇｒ，１９８３，６　（９）：ｌ　５７７　赵媛媛，王　红，张华山．分析科学学报，２０００，１６　（３）：１８８　４　Ｓｍｉｔｈ　Ｊ　Ｔ．Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，１９９９，２０：３　０７８　ｌ　ｌ４］Ｊａｎｄｉｋ　Ｐ，Ｃｌａｒｋｅ　Ａ　Ｐ，Ａｖｄａｌｏｖｉｃ　Ｎ，Ａｎｄｅｒｓｅｎ　Ｄ　Ｃ，　Ｃａｃｉａ　Ｊ．Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ　Ｂ，ｌ９９９，７３２：ｌ９３　０　＇　北京明尼克分析仪器设备中心是从事实验室色谱仪器及配件、化学标准品销售的专业　公司。　本中心主要供应销售的产品有气相色谱仪、液相色谱仪、原子吸收分光光度计、紫外分光光　０　ｃ，　度计、数据处理机及工作站、仪器配件及消耗品。另有气源、稳压电源、国产和进ｉｚｉ水质仪表、环　保仪器、可燃气体报警器、红外线分析器、氢分析器、氧分析器、微量氧分析仪、溶解氧测量仪、露　点仪、试剂标样、气相色谱毛细管柱、填充柱、液相色谱柱、梅特勒电子天平、水分仪、注射器、阀　件、纯气、标准气、炼厂用高温炉传感器、石油产品烃类测定仪、进Ｖ１硅胶（１００～２００目）和ＦＩＡ　荧光指示剂（适合于ＧＢ／Ｔ１１１３２—８９）。可提供汽油中的苯含量测定、汽油中的氧化物含量测定　专用色谱仪及有关配置的咨询，同时提供对不同型号气相色谱仪器进行技术改造的眼务：常年　ｃ，　＝’　●　提供汽油分析用标样及软件。欢迎惠顾垂询。