(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 112076129 A(43)申请公布日 2020.12.15
(21)申请号 202011060488.9(22)申请日 2020.09.30
(71)申请人 苏州农业职业技术学院
地址 215000 江苏省苏州市西园路279号
C11D 9/26(2006.01)
C11D 3/382(2006.01)C11D 3/20(2006.01)A61K 36/87(2006.01)
(72)发明人 高岳 宋京城 司文会 吴晨奇
崔保威 (74)专利代理机构 北京科家知识产权代理事务
所(普通合伙) 11427
代理人 宫建华(51)Int.Cl.
A61K 8/9789(2017.01)A61K 8/9767(2017.01)A61K 8/92(2006.01)A61Q 19/00(2006.01)C11D 9/38(2006.01)
权利要求书2页 说明书8页 附图1页
CN 112076129 A(54)发明名称
一种天然植物材料混合物的提取物以及提取方法(57)摘要
本发明公开了一种天然植物材料混合物的提取物的提取方法，包括：S1、预处理：取松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽混合粉碎，压榨得到原液，滤渣加入水，压榨得混合液；S2、精油提取：超临界CO2萃取得到精油；S3、水提：加水和复合酶，
S4、中性乙醇醇提：加中性得到多酚混合提取液；
乙醇，得原液混合提取液；S5、酸性乙醇醇提：加酸性乙醇，得酸性混合提取液；S6、浓缩干燥得到混合精油、多酚、花青素。本发明提供的一种同时处理多种天然植物材料的混合物的多种提取物的提取方法，按照一定的配比混合四种物料并无差别的一次性混料提取，只使用一套提取工艺路线，提取过程极大简化，成本也极大降低，得到提取物中有效成分高，可用于大规模工业化生产。
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权 利 要 求 书
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1.一种天然植物材料混合物的提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、预处理：取一定质量比的松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽混合，将混合物水洗若干次后，压榨过滤后得到原液，将滤渣经干燥、粉碎、过筛、加水、搅拌、压榨、离心后，取上清液和原液混合得到混合液；
S2、精油提取：将所述S1中离心后的沉淀物，在超临界CO2萃取装置中萃取，并重复若干次后，分离得到迷迭香和葡萄籽中的混合精油富集液；
S3、水提：将所述S2中萃取后的混合渣加入水和一定量的复合酶，调节PH3.0～5.0，在30～50℃温度下酶解2～3h，经搅拌、灭酶、过滤、压榨和离心后，得到多酚原液富集液；重复若干次后，将所有多酚原液富集液和所述S1中混合液混合得到多酚原液混合富集液；
S4、中性乙醇醇提：将所述S3中离心后的沉淀物加入一定体积60％～80％的乙醇，并调节PH为6.6～7.2，控制醇提温度和时间，经搅拌、压榨和过滤后，得到原花青素原液富集液；重复若干次后，将所有原花青素原液富集液混合得到原花青素原液混合富集液；
S5、酸性乙醇醇提：将所述S4中过滤后的滤渣中加入一定体积60％～80％的乙醇，并调节PH为1.0～6.6，控制醇提温度和时间，经搅拌、压榨和过滤后，得到原花青素原液酸性富集液；重复若干次后，将所有原花青素原液酸性富集液混合得到原花青素原液酸性混合富集液；
S6、浓缩干燥：将所述混合精油富集液、所述多酚原液混合富集液、所述原花青素原液混合富集液和所述原花青素原液酸性混合富集液经混合搅拌后，使用三效浓缩器浓缩，并使用低温真空干燥机，干燥得到混合精油、多酚和原花青素的提取物。
2.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于：在所述S3和S4之间还通过连续逆流提取纯化多酚原液混合富集液，包括：浓缩所述S1中混合液和所述S3中多酚原液混合富集液后，使用连续逆流提取机，在温度为20～80℃的条件下提取4～8h，过滤和多次离心后，得到多酚原液提取液。
3.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于：在所述S5和所述S6之间还通过解吸纯化得到原花青素原液提取液，包括：将所述S4和S5中原花青素原液混合富集液和原花青素原液酸性混合富集液混合后恒温静置，用大孔树脂吸附，用流量2～3BV的水去杂质，并用60％～70％的乙醇解吸，解吸液流速为1～2BV/h，解吸时间为3～4h，抽解吸液，得到原花青素原液提取液。
4.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于：在所述S1中，松树皮：蔓越莓：迷迭香：葡萄籽的质量比为3～5：2～3：2～3：3～5。
5.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于：在所述S3中，所述复合酶的酶活力不小于500U/mg,其中所述复合酶的酶活力比值为纤维素酶：果胶酶：蛋白酶＝3～5：4～5：2～3。
6.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于：在所述S4和所述S5中，分别加入的沉淀物和滤渣与所述乙醇的体积比值均为1：12～16。
7.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于：在所述S2中所述超临界萃取装置中，CO2的流量为1.0～1.5ml/mg，萃取压强为10～30MPa，萃取温度为40～60℃。
8.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于：在所述S6中，所述三效浓缩器中各效的真空度和蒸发温度分别为一效：0.04MPa，65℃；二效：0.06MPa，55℃；三效：0.08MPa，45℃。
9.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于：在所述S6中，所述低温干燥的条件为：在
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真空环境下连续干燥30～90min，干燥温度在25℃～60℃内调节，干燥压强为0.04～0.06MPa。
10.基于权利要求1中所述提取方法制备的提取物，所述提取物中至少包括：原花青素、多酚、葡萄籽精油和迷迭香精油。
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说 明 书
一种天然植物材料混合物的提取物以及提取方法
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技术领域
[0001]本发明涉及天然植物材料提取物的技术领域，尤其涉及一种天然植物材料混合物的提取物以及提取方法。
背景技术
[0002]松树皮的提取物含有原花青素(原花青素低聚体)、多酚作为主要的有效成分；蔓越莓的提取物中也含有大量的原花青素，葡萄籽的提取物主要由原花青素,儿茶素,表儿茶素,没食子酸,表儿茶素没食子酸酯等多酚类物质组成体内和体外试验表明，葡萄籽的提取物中原花青素和多酚是迄今发现的植物来源的最高效的抗氧化剂之一；迷迭香的提取物中的主要成分迷迭香酚、鼠尾草酚和鼠尾草酸，也都具有较强的抗氧化活性，而迷迭香精油则是一种由30多种挥发性成分组成的液态油状物。迷迭香精油提取物具有高效、安全等特性。[0003]原花青素(Proanthocyanidins，PACs)是植物王国中广泛存在的一大类多酚化合物的总称。原花青素是其他水果和蔬菜中的成分很少，使得细菌无法附着在人体的生长，从而减少人体获得性感染的概率，改善动脉粥样硬化，恢复弹性，预防心血管疾病的多动脉血流，并显着改善的结果。原花青素能防止细胞损伤，维持细胞的健康和活力，使皮肤柔软，红润，避免细胞受破坏并维持细胞的健康与活力。原花青素(PAs)已被证实具有多种生物学功能，如抗细菌黏附性、抗氧化性、抗肿瘤性等，具有广阔的应用前景。[0004]原花青素、多酚混合制品在乳液、美容液等化妆品中承担防止化妆品本身的氧化的作用、在涂抹有化妆品的皮肤上防止皮脂的过氧化的作用的物质，已知有各种物质，具有较强的抗细菌黏附性、抗氧化性和抗肿瘤性等，在消除自由基，提高免疫力和延缓衰老等方面有着广阔的应用前景。而迷迭香、葡萄籽精油也可以作为原花青素、多酚的配合，促进细胞新陈代谢以及细胞的再生功能，对于原花青素、多酚的抗氧化性具有互补的功能，所以被广泛应用于保健品、化妆品、香水、香皂、空气清新剂驱虫剂、医药各种动植物油脂、天然色素、香精、生物农药、烟草等领域。
[0005]目前对于天然植物材料的提取物的提取都是分别处理，这无疑增加了其中的繁琐，需要提出一种同时处理多种天然植物材料的混合物的多种提取物的提取方法。因为松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽中分别富含原花青素、多酚，原花青素，迷迭香精油，葡萄籽精油、多酚、原花青素,如果针对松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽四种物料分别提起各自富含物，传统过程提取过程异常繁琐，要实现四种不同的提取工艺，也极大的增加了提取成本。但只要按照一定的配比混合四种物料即可无差别的一次性混料提取，则只要一套提取工艺路线，提取过程极大简化，成本也会极大降低。发明内容
[0006]本发明克服了现有技术的不足，提供一种天然植物材料混合物的提取物的提取方法。
[0007]为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一种天然植物材料混合物的提取物
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说 明 书
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的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：[0008]S1、预处理：取一定质量比的松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽混合，将混合物水洗若干次后，压榨过滤后得到原液，将滤渣经干燥、粉碎、过筛、加水、搅拌、压榨、离心后，取上清液和原液混合得到混合液；[0009]S2、精油提取：将所述S1中离心后的沉淀物，在超临界CO2萃取装置中萃取，并重复若干次后，分离得到迷迭香和葡萄籽中的混合精油富集液；[0010]S3、水提：将所述S2中萃取后的混合渣加入水和一定量的复合酶，调节PH3.0～5.0，在30～50℃温度下酶解2～3h，经搅拌、灭酶、过滤、压榨和离心后，得到多酚原液富集液；重复若干次后，将所有多酚原液富集液和所述S1中混合液混合得到多酚原液混合富集液；
[0011]S4、中性乙醇醇提：将所述S3中离心后的沉淀物加入一定体积60％～80％的乙醇，并调节PH为6.6～7.2，控制醇提温度和时间，经搅拌、压榨和过滤后，得到原花青素原液富集液；重复若干次后，将所有原花青素原液富集液混合得到原花青素原液混合富集液；[0012]S5、酸性乙醇醇提：将所述S4中过滤后的滤渣中加入一定体积60％～80％的乙醇，并调节PH为1.0～6.6，控制醇提温度和时间，经搅拌、压榨和过滤后，得到原花青素原液酸性富集液；重复若干次后，将所有原花青素原液酸性富集液混合得到原花青素原液酸性混合富集液；[0013]S6、浓缩干燥：将所述混合精油富集液、所述多酚原液混合富集液、所述原花青素原液混合富集液和所述原花青素原液酸性混合富集液经混合搅拌后，使用三效浓缩器浓缩，并使用低温真空干燥机，干燥得到混合精油、多酚和原花青素的提取物。[0014]本发明一个较佳实施例中，在所述S3和S4之间还通过连续逆流提取纯化多酚原液混合富集液，包括：浓缩所述S1中混合液和所述S3中多酚原液混合富集液后，使用连续逆流提取机，在温度为20～80℃的条件下提取4～8h，过滤和多次离心后，得到多酚原液提取液。[0015]本发明一个较佳实施例中，在所述S5和S6之间还通过解吸纯化得到原花青素原液提取液，包括：将所述S4和S5中原花青素原液混合富集液和原花青素原液酸性混合富集液混合后恒温静置，用大孔树脂吸附，并用流量2～3BV的水去杂质，用60％～70％的乙醇解吸，解吸液流速为1～2BV/h，解吸时间为3～4h，抽解吸液，得到原花青素原液提取液。[0016]本发明一个较佳实施例中，在所述S1中，松树皮：蔓越莓：迷迭香：葡萄籽的质量比为3～5：2～3：2～3：3～5。
[0017]本发明一个较佳实施例中，在所述S3中，所述复合酶的酶活力不小于500U/mg,其中所述复合酶的酶活力比值为纤维素酶：果胶酶：蛋白酶＝3～5：4～5：2～3。[0018]本发明一个较佳实施例中，在所述S4和所述S5中，分别加入的沉淀物和滤渣与所述乙醇的体积比值均为1：12～16。[0019]本发明一个较佳实施例中，在所述S2中所述超临界萃取装置中，CO2的流量为1.0～1.5ml/mg，萃取压强为10～30MPa，萃取温度为40～60℃。[0020]本发明一个较佳实施例中，在所述S6中，所述三效浓缩器中各效的真空度和蒸发温度分别为一效：0.04MPa，65℃；二效：0.06MPa，55℃；三效：0.08MPa，45℃。[0021]本发明一个较佳实施例中，在所述S6中，所述低温干燥在真空环境下连续干燥30～90min，干燥温度在25℃～60℃内调节，干燥压强为0.04～0.06MPa。
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本发明还提供了一种通过所述提取方法制备的提取物，所述提取物中至少包括：
原花青素、多酚、葡萄籽精油和迷迭香精油。[0023]本发明一个较佳实施例中，在所述S1、所述S3、所述S4、所述S5和所述S6中搅拌处理为搅拌速度200～300r/min，搅拌时间20～30min。[0024]本发明一个较佳实施例中，在所述S1和所述S3中的所述离心处理为离心转速3000～5000r/min，离心时间10～20min。[0025]本发明一个较佳实施例中，在所述S1中，过筛为20～40目。[0026]本发明一个较佳实施例中，在所述S4和S5中，控制醇提的温度为40～50℃，时间为4～5h。
[0027]本发明一个较佳实施例中，在所述S2中，在超临界CO2萃取装置中萃取，精油所得含量占滤渣饼总质量不小于3％。[0028]本发明一个较佳实施例中，在所述S4和所述S5中所述中性乙醇溶液、酸性乙醇溶液与沉淀物的体积比例为14：1。
[0029]本发明一个较佳实施例中，所述多次离心的处理方式为：分别在1000r/min、5000r/min、20000r/min的转速下离心三次。[0030]本发明一个较佳实施例中，在所述S6中，所述浓缩处理方式包括：常压浓缩、减压浓缩、薄膜浓缩中的任一一种或者多种方式。[0031]本发明一个较佳实施例中，所述迷迭香和葡萄籽混合精油、多酚和花青素提取物的混合物配合制备使用在化妆品、肥皂、外敷用药物上。[0032]本发明解决了背景技术中存在的缺陷，本发明具备以下有益效果：[0033](1)本发明中提供的一种同时处理多种天然植物材料的混合物的多种提取物的提取方法。因为松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽中分别富含原花青素、多酚，原花青素，迷迭香精油，葡萄籽精油、多酚、原花青素,如果针对松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽四种物料分别提起各自富含物，传统过程提取过程异常繁琐，要实现四种不同的提取工艺，也极大的增加了提取成本。摒弃了传统逐个材料逐个成分的提取方式，本发明按照一定的配比混合四种物料即可无差别的一次性混料提取，实现了一套提取工艺路线，提取过程极大简化，成本也极大降低，提取方法所得到的混合精油、多酚和花青素提取物的混合物中有效活性成分较高，工艺简单、无复杂的设备，可用于大规模工业化生产。[0034](2)本发明中对于松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽混合质量的配比是按照成分制备目标制剂时的互补原则选择，通过松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽中原花青素、多酚和精油的成分比例确定所需的用量，这种机制互补大大减少了天然植物的浪费，降低成本，同时保证了提纯要求。[0035](3)本发明中提供的一种从多种天然植物材料的混合物的提取方法中制备的提取物，包括原花青素、多酚、迷迭香和葡萄籽混合精油的混合物，具有较强的抗细菌黏附性、抗氧化性和抗肿瘤性等，在消除自由基，提高免疫力和延缓衰老等方面有着广阔的应用前景；此外，混合精油、多酚和花青素提取物的混合物配合制备使用在化妆品、肥皂、外敷用药物、保健品等抗氧化性的制品上。[0036](4)本发明中提供一种物理、化学和生物手段相结合的提取方法，物理手段包括：粉碎、搅拌、压榨、制饼、连续逆流提取、解吸纯化、三效浓缩器浓缩、沸腾干燥和超临界CO2
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萃取；化学手段包括：中性乙醇醇提、酸性乙醇醇提；生物手段包括：复合酶酶解；不同手段之间相互配合辅助，并同时控制时间、温度、压强、浓度、流量和流速等因素，能最大限度提取到天然植物混合物的混合提取物，并且实现了对提取物活性成分的高效提取。[0037](5)本发明中采用的生物酶解松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽的植物细胞壁，有效地促进了活性物质的释放，同时配合低PH和较低温度的提取，减少了活性物质的降解；使用复合酶的效果要好于使用单一的纤维素酶或者两种酶联合使用的效果，纤维素酶、果胶酶、蛋白酶的协同酶解作用，提高多酚提取的效率。[0038](6)本发明中使用低温真空干燥机用于提取物的干燥，这是一种人工可控制的热源和机械通风除湿的方法。因为原青花素对于温度比较敏感，而这种方法能在真空状态下自由设定温度，能在低温下使得物料中的水分气化。如果采用沸腾干燥法、喷雾干燥法，高温干燥会破坏原花青素的细胞结构和活性，保证提取物的营养价值。附图说明
[0039]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图；
[0040]图1是本发明的优选实施例的流程图。
具体实施方式
[0041]需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0042]在本申请的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本申请和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本申请保护范围的限制。此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或隐含指明所指示的技术特征的数量。因此，限定有“第一”、“第二”等的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明创造的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。[0043]在本申请的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以通过具体情况理解上述术语在本申请中的具体含义。
[0044]为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施方式。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明的公开内容理解的更加透彻全面。
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现在结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明，这些附图均为简化的示意
图，仅以示意方式说明本发明的基本结构，因此其仅显示与本发明有关的构成。[0046]实施例1
[0047]如图1所示，一种天然植物材料混合物的提取物的提取方法，包括：[0048]S1、预处理：取松树皮4kg、蔓越莓2kg、迷迭香2.5kg和葡萄籽3.5kg混合，将混合物水洗3次后，将其压榨过滤后得到原液，将滤渣置于烘箱中60℃干燥10min，使用粉碎机粉碎，并过筛30目，在滤渣中加入水，经过300r/min搅拌20min，再压榨、过滤、4000r/min离心15min后，取上清液和原液混合得到混合液；[0049]需要说明的是，本发明中针对松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽四种物料分别提起各自富含物，对于松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽混合质量的配比是按照成分制备目标制剂时的互补原则选择，通过松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽中原花青素、多酚和精油的成分比例确定所需的用量，这种机制互补大大减少了天然植物的浪费，摒弃了传统过程提取过程异常繁琐，降低成本，同时保证了提纯要求，实现了一套提取工艺路线，完成混合四种物料的可无差别一次性混料提取。[0050]S2、精油提取：将步骤S1中的离心沉淀物干燥后，放入超临界CO2萃取装置中萃取，控制CO2流量为1.0～1.5ml/mg、萃取温度40～60℃、压强20MPa和萃取时间2h，并重复2次后，直到精油含量占滤渣饼总质量不小于3％后，停止萃取，并分离得到迷迭香和葡萄籽中的混合精油和混合渣；[0051]S3、水提：将步骤S2中的混合渣加入水和不小于500U/mg复合酶，其中复合酶的酶活力比值为纤维素酶：果胶酶：蛋白酶＝5：4：2，调节PH4.0，在45℃温度下酶解3h，经300r/min搅拌20min后，高温95℃灭酶10min、过滤、再压榨、4000r/min离心15min后，得到多酚原液提取液；重复2次后，将所有的提取液混合得到多酚原液混合提取液；[0052]S4、连续逆流提取：浓缩所述混合液和所述多酚混合提取液后，使用连续逆流提取机，在温度为60℃的条件下提取5h，过滤和三次离心，其中三次离心的转速分别为1000r/min、5000r/min、20000r/min，得到多酚提取液；[0053]需要说明的是，三次离心的主要目的主要是为了在细胞破碎后，除去溶液中的固体杂质并分离。[0054]S5、中性乙醇醇提：将S3中的离心后的沉淀物和固液比1：14的70％的乙醇混合，并调节PH为7.0，控制醇提的温度为45℃，时间为4h，经300r/min搅拌20min、压榨和过滤后，得到花青素原液提取液；重复2次后，将所有的提取液混合得到花青素原液混合提取液；[0055]S6、酸性乙醇醇提：将S5中过滤的滤渣和固液比1：14的70％的乙醇混合，并调节PH为4.0，控制醇提温度为45℃，时间为4h，经300r/min搅拌20min、压榨和过滤后，得到花青素酸性提取液；重复2次后，将所有的提取液混合得到花青素酸性混合提取液；[0056]S7、解吸纯化：将花青素原液混合提取液和所述花青素酸性混合提取液混合恒温静置，用大孔树脂吸附，并用流量3BV的纯净水去杂质，用固液比1：14的70％的乙醇解吸，解吸液流速为2BV/h，解吸时间为4h；抽解吸液，得到花青素提取液；[0057]S8、浓缩干燥：将S2中混合精油、S4中多酚提取液、S7中花青素提取液搅拌混合后，使用三效浓缩器浓缩提取液，其中三效浓缩器中各效的真空度和蒸发温度分别为一效：0.04MPa，65℃；二效：0.06MPa，55℃；三效：0.08MPa，45℃，并使用低温真空干燥机，干燥得
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到混合精油、多酚和原花青素的提取物，所述低温干燥在真空环境下连续干燥60min，干燥温度40℃，干燥压强0.04MPa。[0058]需要说明的是，步骤S8中浓缩处理方式包括：常压浓缩、减压浓缩、薄膜浓缩中的任一一种或者多种方式。干燥处理方式采取低温真空干燥，主要是考虑到原青花素对于温度比较敏感，若是采用温度较高的沸腾干燥法，将会影响原花青素的活性。[0059]本发明的最终提取物混合精油、多酚和花青素提取物的混合物配合制备可以配合使用在化妆品、肥皂、食品、外敷用药物、保健品等抗氧化性的制品上。[0060]实施例2
[0061]本实施例是在实施例1的基础上做出的改进和验证，具体方式为，通过几组对比实验，验证使用复合酶的效果要好于使用单一的纤维素酶或者两种酶联合使用的效果，即纤维素酶、果胶酶、蛋白酶的协同酶解作用对于多酚物质的提取效率的影响。取实施例1中步骤S1中相同批次的松树皮40g、蔓越莓20g、迷迭香25g和葡萄籽35g混合,并将混合物均分为6组，分别编号为10号、20，号、30号、11号、21号和31号，除步骤S3其他步骤与实施例1中相同，分别往10号和11号中加入500U/mg单一纤维素酶，往20号和21号中加入于500U/mg纤维素酶和果胶酶的混合酶，往30号和31号中加入500U/mg纤维素酶、果胶酶和蛋白酶的复合酶，具体实验数据见表1。[0062]表1单一纤维素酶、两种复合酶、三种复合酶对多酚提取的影响
[0063]
由表1可知，6组实验分别对于多酚的提取率，按照由低到高排序为：10号＜11号＜20号＜21号＜30号＜31号。分别对比10号、20号、30号和11号、21号、31号可知，单一纤维素酶提取多酚含量＜纤维素酶和果胶酶混合提取多酚含量＜三种复合酶提取多酚含量。因此三种纤维素酶、果胶酶和蛋白酶的复合酶的使用效果，要好于使用单一的纤维素酶或者两种酶联合使用的效果。所以，三种纤维素酶、果胶酶、蛋白酶的协同酶解作用，可以提高多酚提取的效率。[0065]实施例3
[0066]本实施例是在实施例1和实施例2的基础上做出的改进和验证，具体方式为，通过几组对比实验，验证不同温度对多酚物质提取量的影响并确定提取多酚物质的最适温度。取实施例1中步骤S1中相同批次的松树皮40g、蔓越莓20g、迷迭香25g和葡萄籽35g混合,并将混合物均分为6组，分别编号为40号、41号，42号、43号、44号、45号和46号，除步骤S3以外，其他步骤与实施例1中的步骤相同，编号为40号、41号，42号、43号、44号、45号和46号分别控制其提取温度为35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，具体实验数据见表2。[0067]表2不同温度对多酚物质提取量的影响
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由表2可知，6组实验分别对于多酚的提取率，按照由低到高排序为：46号＜45号＜
44号＜41号＜42号＜43号。因此，在45℃以下，随着温度的升高，多酚的提取率也增加，当温度为45℃时，提取多酚物质达到最适温度，也是最适合的酶解温度；当温度再升高后，多酚物质的提取率降低，因为此时的复合酶的活性下降，酶促反应受到了抑制。所以，确定了本发明中选用的酶解反应的最适温度为45℃。[0070]实施例4
[0071]本实施例是在实施例1的基础上做出的改进和验证，具体方式为，通过几组对比实验，验证中性乙醇溶液、酸性乙醇溶液与沉淀物的体积比例以及PH值对原花青素提取的影响。取实施例1中步骤S1中相同批次的松树皮40g、蔓越莓20g、迷迭香25g和葡萄籽35g混合,并将混合物均分为6组，分别编号为50号、60，号、70号、51号、61号和71号，除步骤S5和S6其他步骤与实施例1中相同，编号50号、60号、70号分别加入12倍、14倍、16倍PH为7.0的70％的乙醇，编号51号、61号、71号分别加入12倍、14倍、16倍PH为4.0的70％的乙醇，具体实验数据见表3。
[0072]表3添加乙醇溶液与沉淀物的体积比例以及PH值对原花青素提取的影响
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由表3可知，6组实验分别对于原花青素的提取率，按照由低到高排序为：50号＜70
号＜60号＜51号＜71号＜61号。分别对比50号、60号、70号和51号、61、71号，原花青素提取量按照由低到高排序为：添加12倍乙醇溶液＜添加16倍乙醇溶液＜添加14倍乙醇溶液；对比分析50号、51号和60号、61号和70号、71号，原花青素提取量按照由低到高排序为：乙醇溶液PH为7.0＜乙醇溶液PH为4.0。因此，原花青素在乙醇溶液与沉淀物的体积比例为14：1时提取量最大，乙醇溶液与沉淀物的体积比小于14或者大于14时，原花青素的提取量较小；当PH为4.0时，原花青素的提取率较高。[0075]本发明使用时，包括以下步骤：S1、预处理：取松树皮、蔓越莓、迷迭香和葡萄籽混合粉碎，压榨得到原液，滤渣加入水，压榨得混合液；S2、精油提取：超临界CO2萃取得到精油；S3、水提：加水和复合酶，经搅拌、灭酶、过滤、再压榨、离心后，重复若干次后，将所有的
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提取液混合得到多酚原液混合提取液；S4、中性乙醇醇提：加中性乙醇，经搅拌、压榨和过滤后，重复若干次后，得原花青素原液混合提取液；S5、酸性乙醇醇提：加酸性乙醇，经搅拌、压榨和过滤后，重复若干次后，得原花青素酸性混合提取液；S6、浓缩干燥得到混合精油、多酚、原花青素。
[0076]本发明使用中，S3和S4之间还可以通过连续逆流提取纯化多酚原液混合富集液，包括：浓缩S1中混合液和S3中多酚原液混合富集液后，使用连续逆流提取机，在温度为20～80℃的条件下提取4～8h，过滤和三次离心后，得到多酚原液提取液。[0077]本发明使用中，在S5和S6之间还可以通过解吸纯化得到原花青素原液提取液，包括：将所述S4和S5中原花青素原液混合富集液和原花青素原液酸性混合富集液混合后恒温静置，用大孔树脂吸附，并用流量2～3BV的水去杂质，用60％～70％的乙醇解吸，解吸液流速为1～2BV/h，解吸时间为3～4h，抽解吸液，得到原花青素原液提取液。[0078]以上依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定技术性范围。
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