替米考星Tilmicosin生产工艺

替米考星Tilmicosin生产工艺

1、原材料质量标准

Tylosin base:分子式C46H77NO7,分子量916.13，含量按USP25要求，熔点:128—132oC，白色粉末状固体。

3，5—二甲基哌啶：分子式C7H15N，分子量113.2,密度0.853,顺式83—87%，反式13—17%，顺式+反式≥98%，水份<0.5%，沸点143oC。

甲酸: 分子式HCOOH，分子量46.3, 沸点100—101oC，无色透明液体，密度1.220,化学纯。

醋酸丁酯：分子式C6H17O2，分子量116.16, 沸点124—126oC，密度0.850—0.890, 无色液体，含量≥97%。

氢氧化钠：NaOH，分子量40，颗粒状结晶固体，测定含量≥98%，碳酸钠≤0.5%，二氧化硅≤0.0005%，总氮≤0.0003%，钾含量≤0.02%。

盐酸：HCl，分子量36.46，无色液体，含量36—37%，密度1.18—1.20。

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2、生产操作过程

2.1氨化反应

在反应罐中加入醋酸丁酯，搅拌下加入150Kg的Tylosin base，缓慢升温到规定温度，搅拌20—30分钟使固体全部溶解，然后加入定量的3，5—二甲基哌啶和甲酸。然后保持该温度搅拌反应3小时，取样经HPLC分析。如果分析结果Tylosin base含量≤2%，则把混合液降到20—25 oC。如果Tylosin base含量>2%（峰面积计），则继续保温反应，30分钟后在取样分析，直至达到Tylosin base含量〈2%。氨化结束，加入针用活性炭，脱色30分钟，经钛棒过滤器过滤。

2.2提取

反应完将溶液降温到20—25oC，加入1800L去离子水，保持20—25oC（不超过

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25oC）搅拌下滴加15%的盐酸，将溶液调PH值至合适点，调好PH后继续搅拌40分钟，静置40分钟，分水层至5000L罐中。醋酸丁酯层中再加入1800L去离子水，调整PH值，搅拌40分钟，静置40分钟，分水至5000L罐中（与第一次所分水层合并），溶媒退至回收罐。

2.3水解

水层转移至反应罐中，20—25 oC滴加15%的盐酸调PH值，调好PH后缓慢升温至50oC，保温反应4小时，取样经HPLC分析。如果Tylosin base(未水解物)含量≥3%（峰面积计），则继续保持50oC反应，30分钟后取样经HPLC分析，分析结果Tylosin base含量〈3%，则把混合液降到20—25 oC。

2.4沉淀结晶

保持20—25 oC，搅拌下滴加氢氧化钠溶液，缓慢调节PH值（大约用1小时），用PH计检测，得到白色结晶沉淀，调好PH后保温搅拌40分钟，湿晶体离心分离，然后用25 oC的去离子水2000L洗涤2次，甩干，晶体在搅拌下在60oC真空干燥得到Tilmicosin成品。

3、分析方法

Tilmicosin按干基算C46H80N2O13含量不少于85%，Tilmicosin顺式异构体含量

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在82.0—88.0%之间，反式异构体含量在12.0—18.0%之间.

包装和贮存：存于密封良好避光的容器中，避免过热。

标签：标签适应症为仅作兽药用。

鉴定

A:红外吸收（197K）

B:测试溶液在液相色谱中，Tilmicosin反式异构体和顺式异构体出峰保留时间应与标准溶液色谱保留时间一致。

水分：按方发1（921）不超过5%。20ml甲醇和吡啶（4：1）含10%的咪唑用于代替滴定管中的甲醇。

相关化合物

二丁胺磷酸缓冲液和稀释液在测定时现配制

流动相A:700ml水中加25ml磷酸缓冲液，用水稀释到体积，用前混合脱气。如果有必要对比例进行调整（见色谱《621》下的系统稳定性）。

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流动相B:用脱气的乙腈。

标准溶液：精确称取USPTilmicosinRS溶于乙腈中，所得的溶液浓度大约是0.25mg/ml，如需要用超声波溶解。取5.0ml该溶液到25ml容量瓶中，用稀释液稀释到刻度，混合均匀。

测试溶液：精确称取大约200mg的Tilmicosin到50ml容量瓶中，加入10ml乙腈，超声波溶解，稀释液稀释到刻度，混合均匀。24小时之内用。

色谱系统：（见色谱621）液相色谱安装280—nm检测器和一根4.6mm×25cm的5-μm的C18柱子。通过流动相A和流动相B进行梯度洗脱，最初比例为82：18，在30min按线性慢慢把流动相A与B比例调到60：40。流速约1.1ml/min，用标准溶液按下列方法记录色谱下响应值：反式-异构体（两个不完全分开的峰）、顺式-异构体和顺式-8-差向异构体的保留时间相对值分别为0.8、0.9和1.0。

处理方法：（注：用响应值峰面积计算）分别注射相同体积（约10μl）的标准溶液和测试溶液入色谱仪中，记录色谱分析，测量主要峰的响应，按下式计算，每个相关化合物在tilmicosin中占的百分数；5（CP/W(rc/rs)）。

其中C-USPTilmicosinRS标准溶液浓度（mg/ml）；P-标准品USPTilmicosinRS中反式异构体、顺式异构体和8-差向异构体效价，以μg/mg计；W是用来制备测试溶液的重量，以mg计；r-单个相关化合物响应峰值，而非Tilmicosin所有异构体的响应峰值；

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rs-是从标准溶液得到的Tilmicosin反式-异构体、顺式-异构体和顺式-8-差向异构体的响应峰值的总和。单个相关化合物按干基计不高于3.0%，所有相关化合物的响应峰值的总和按干基计不高于10.0%。

含量测定

二丁胺磷酸缓冲液：搅拌下70ml稀磷酸（1体积稀释到10体积）加入到16.8ml二丁胺（90：10）中。允许冷却，用磷酸调节PH2.5±0.1，用水稀释到100ml混合均匀。

流动相：700ml的水，加115ml的乙腈，55ml四氯呋喃和25ml二丁胺磷酸缓冲液，用水稀释到1000ml混合均匀。每组分在使用前必须先脱气，或者流动相在用前用氦气鼓泡2min。流动相不用时密封保存，如有必要可调整比例（参见色谱《621》，注：乙腈或THF比例下调能加快分离）。

稀释液：900ml水加5.71g磷酸，用12.5N的氢氧化钠调节PH2.5±0.1，用水稀释到1000ml混合均匀。

标准样品制备：精确称取大约25mg左右的USPTilmicosin RS到50ml的容量瓶中，加10ml的乙腈，声波溶解，用稀释液稀释到体积，混合均匀，溶液当天配置当天使用。

测试液制备：精确称取大约25mg左右的Tilmicosin加到50ml的容量瓶中，加10ml的乙腈，声波溶解，用稀释液稀释到体积，混合均匀，溶液当天配置当天使用。

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色谱系统（参见色谱《621》）：液相色谱装有280nm检测器和4.6mm×25cm的5μm的C18柱子，流速约1ml/min。标准溶液进色谱，直接按下列方法处理记录响应值，顺式和反式Tilmicosin相对保留时间大约分别为0.8和1.0,反式Tilmicosin峰和顺式Tilmicosin峰之间分离度不小于1.25。峰的拖尾固子不低于0.7，不高于2.0。重复进样相对标准误差不大于2.0%。

处理过程（注：用显示响应的峰面积计算）：分别注谢相同体积（大于10μl）的标准溶液和测试溶液到色谱仪中，记录色谱，测出主峰的响应值，以μg计。Tilmicosin反式和顺式异构体比例按下式计算：50（CP/W）(ri/rs)。

其中C-USPTilmicosinRS标准溶液浓度（mg/ml）；P是标准品USPTilmicosinRS中的相关Tilmicosin异构体（顺式和反式）的效价，以μg/mg计；W是制备测试溶液时称取得的Tilmicosin用量，以mg计；ri-是测试溶液获得的Tilmicosin相关异构体的峰响应值；rs-是标准溶液或得的Tilmicosin关异构体的峰响应值。

按下式计算Tilmicosin（C46H80N2O13）占样品Tilmicosin的百分含量：

0. 1(反式和顺式),其中“反式” 和 “顺式” 分别为在Tilmicosin样品中检测到的反式-异构体和顺式-异构体量，以μg/ml计。

按下式计算Tilmicosin反式异构体和顺式异构体的占两种异构体的百分数：

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100异构体/（反式+顺式），其中“异构体”是指测单个的反式-异构体或顺式-异构体在Tilmicosin的量，以μg/mg计。

4、先进性

替米考星车间按GMP要求设计，30万级精烘包洁净厂房，采用了符合GMP要求的双锥回转真空干燥机、二维运动混合机、钛棒过器等先进设备。主要原材料泰乐菌素，由公司通过农业部GMP认证车间自己生产，哌啶全部从印度尼西亚进口，确保原料质量及稳定性。生产过程采用高液相色谱仪监控，对中间体质量进行控制。

许鹏飞

2006.4.25

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