工艺技术 双歧杆菌在固体培养基上的比较实验 徐清 （上海市酒类产品质量检验中心有限公司上海２０００８１） 摘要：根据双歧杆茵的营养需求，优化培养基中的碳源、氮源和增殖因子，选择市面上常用的双歧杆茵固体培养基，进行筛选 选择最适宜的培养基以提高活菌量。 关键词：双歧杆菌培养基筛选 中图分类号：Ｔｓ２ｏ１．３ 文献标识码：Ａ 支章编号：１６７２—５３３６（２０１５）０８—００２２一Ｏ１ 双歧杆菌对营养要求较高，培养基中必须含有丰富的氨基 恒湿培养ＢＳＣ－１５０，上海博迅实业有限公司；ＤＥＬＴＡ３２０ｐＨ计， 酸、维生素、糖类物质及缓冲盐类『１］，并且除了基本的营养外，还 梅特勒一托利多仪器；ＹＱｘ—ＩＩ型厌氧培养箱，博翎仪器。 需添加增长因子和抑制其他乳酸菌的莫匹罗星锂盐［２１。如何在 ２方法与结论 较短培养时间内选择适当的培养基提高活菌数目，就成为了关 ２．１操作步骤 键技术，这就是本文的目的。 以无菌操作将５０ｇ奶粉质控样品倒入５００ｍＬ无菌水中，使 １材料和器具 之均质化，作为１：１０稀释液。无菌吸取ｌｍＬ １：ｌ０稀释液ｌｍＬ，注 １．１菌种 入９ｍＬ灭菌生理盐水内，振摇混匀，做成ｌ：ｌ００的稀释液，另取 ０倍递增稀释液。根据质控样品菌含 双歧杆菌计数质控样品ＱＣ－ＦＤ一０２５，重量为５０ｇ的乳粉样 １ｍＬ按上述操作顺序，作１品，双歧杆菌含量为７５００００ＣＦＵ／ｇ，中国检验检疫科学研究院测 量，选择３个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取ｌｍＬ样品匀液， 试评价中心。 分别用以上四种培养基进行表面涂布，３６士１℃厌氧培养４８士 １．２培养基 ２ｈ，每个稀释度做２个平行样。计数平板上的双歧杆菌菌落数。 ２．２革兰染色和镜检 （１）培养基１，成分：蛋白胨、牛肉粉、酵母粉、葡萄糖、吐温 挑取典型菌落制片，革兰氏染色后镜检，观察菌体形态。双 ８０、磷酸氢二钾、乙酸钠、柠檬酸三钠、硫酸镁、硫酸锰、琼脂、莫 匹罗星锂盐，ＰＨ６．２。 歧杆菌革兰氏染色阳性，经２ ４—４ ８ｈ培养后多数形成直径为 （２）培养基２，成分：胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母浸粉、葡 ０．５－ｌｍｍ、凸起、边缘整齐、乳白色或灰白色不透明的菌落，有 萄糖、Ｌ一半胱氨酸、刃天青、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、碳酸氢 弯曲和分叉现象，形成双歧杆菌特有的“Ｖ”或“Ｙ”结构。 钠、氯化钠、氯化钙、硫酸镁、琼脂、ｐＨ７．０。 ２．３实验结果 （３）培养基３，成分：蛋白胨、葡萄糖、酵母浸粉、可溶性淀粉、 由表ｌ可以初步判断，培养基成分中添加莫匹罗星锂盐、 氯化钠、Ｌ一半胱氨酸、番茄浸粉、肝浸粉、琼脂、吐温８０，ｐＨ７．０。 ｐＨ６．２时更有利于双歧杆菌的生长。 （４）培养基４，成分：蛋白胨、酵母提取物、磷酸二氢钾、硫酸 参考文献 氢二钾、硫酸铵、硫酸镁七水合、Ｌ一半胱氨酸盐酸盐一水合、丙 ［１］罗珍兰。谢继志，王庆明．双歧杆菌和乳酸菌在不同基质中混合发 酸钠、半乳寡聚糖ＴＯＳ、琼脂、莫匹罗星锂盐，ｐＨ６．２。 酵的情况比较［Ｊ］．食品工业科技。１９９７（４）：５０—５３． １．３器设备 ［２］韩雪，张兰威．双歧杆菌增殖因子的筛选及培养基的优化［Ｊ］．食品 电子天平，梅特勒一托利多仪器；高压灭菌ＧＲ８５ＤＦ４４１，致 与生物技术学报，２００５，２４（４）：６９—７２． 微仪器；超净工作台ｓｗ—ｃＪ—ＩＤ，苏州净化设备有限公司；恒温 表１ 稀释度 １０一 平行１＃ 培养基Ｉ ＞３００ 培养基２ ＞３００ 培养基３ ＞３００ 培养基４ ＞３００ 平行２＃ ＞３００ ＞３００ ＞３００ ● ● ＞３００ ‘ ● 平均值 １０－ 平行１＃ 平行２＃ 平均值 １０ 平行ｌ＃ ＞３００ ８４ ７４ ７９ ４ ＞３ｏｏ ５９ ５ｌ ５５ ３ ＞３ｏｏ ６８ ５９ ６４ ４ ＞３０ｏ ● ３ ● ６ ● ４ ＿ ６ 平行２＃ 平均值 ８ ６ ２ ３ ６ ５ ｌ０ ’ ８ 双歧杆菌计数 ７．９×１０ ＣＦＵ／ｇ ５．５ Ｘ １０ ＣＦＵ／ｇ ６．４ Ｘ １０５ＣＦＵ／ｇ ８．７ Ｘ ＩＯ￣ＣＦＵ／ｇ 收稿日期：２０１５—０４—２６ 作者简介：徐清（１９８３－－），女，汉族，山东人，生物工程专业工程硕士，助理工程师职称，研究方向：微生物检验和酒类感官品评。 ２２ 中外食品工业Ｓｉｎｏ—ｆｏｒｅｉｇｎ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ