3,5—二硝基水杨酸比色定糖法

一 实验内容

利用3，5—二硝基水杨酸试剂测定饮料中的还原糖和总糖含量。 二 实验目的

1 领会微量糖分的测定方法。

2 熟悉分光光度仪操作原理和掌握操作技术。 三 实验原理

3，5—二硝基水杨酸试剂与还原糖溶液共热后被还原成棕红色氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，于520nm比色测定。 四 仪器与试剂 1仪器

⑴ 25mL比色管； ⑵ 恒温水浴； ⑶ 72型分光光度计； ⑷ 各规格移液管。 2试剂

⑴ 3，5——二硝基水杨酸试剂：

甲液：溶解6.9g结晶酚于15.2毫升10% 氢氧化钠溶液中，并用水稀释至69毫升，在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。

乙液：称取255g酒石酸钾钠加到300毫升10％ 氢氧化钠溶液中，再加入880毫升1% 3，5——二硝基水杨酸溶液。

将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中备用。在室温放置7～10天以后使用。 ⑵ 6mol/L盐酸； ⑶ 20% 氢氧化钠溶液； ⑷ 1.0g/L葡萄糖标准液。

葡萄糖标准液的配制：准确称取0.1g分析纯的无水葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重)，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100mL容量瓶中，再定容到刻度，摇匀。浓度为1mg/mL。 五 操作方法

1 葡萄糖栋准曲线的制定

取7支25mL的试管，分别加入0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液，再分别加入2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0、0.8mL蒸馏水（注意：各管为2mL溶液），然后依次加入3，5——二硝基水杨酸试剂1.5mL。

将各管溶液混合均匀，在沸水浴中加热5分钟，取出后立即用冷水冷却至室温，再加蒸馏水定容到25毫升，摇匀。于520nm；波长处测OD值。以葡萄糖毫克数为横坐标光密度值为纵坐标，绘制标准曲线 2 样品蔗糖含量测定

量取适量（1.0~2.0mL）饮料样品，转移到100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀。

⑴样品中还原糖的测定：准确量取1mL样品稀释液移入比色管中，其余操作均与制作标准曲线时相同。