非标记表面增强拉曼光谱在dna检测中的应用

激　光　生　物　学　报

ＡＣＴＡ　ＬＡＳＥＲ　ＢＩＯＬＯＧＹ　ＳＩＮＩＣＡ

Ｖｏｌ.２９Ｎｏ.１Ｆｅｂ.２０２０

非标记表面增强拉曼光谱在ＤＮＡ检测中的应用

吴　琼１ꎬ林慧晶１ꎬ徐两蒲２ꎬ孙　艳２ꎬ林　多１ꎬ陈冠楠１∗

(１.医学光电科学与技术教育部重点实验室ꎬ福建省光子技术重点实验室ꎬ福建师范大学光电与信息工程学院ꎬ福州３５０００７ꎻ２.福建省妇幼保健院ꎬ福州３５０００１)

摘　要:表面增强拉曼光谱(ＳＥＲＳ)是一种超灵敏的生化分析技术ꎬ已经被广泛运用于细胞、核酸、蛋白质等生

物分子的检测ꎬ在生物医学领域表现出了巨大的应用潜力ꎮ近年来ꎬ将表面增强拉曼光谱技术应用于遗传物质ＤＮＡ的精准检测ꎬ引起了人们广泛的关注ꎮ本文简要叙述了表面增强拉曼光谱技术的基本原理及其在ＤＮＡ检ＤＮＡ￣ＳＥＲＳ技术有望成为一种快速、准确的临床诊断方式ꎮ

测中的优势ꎬ主要介绍了非标记的ＤＮＡ￣ＳＥＲＳ检测应用进展ꎬ其中包括本项目组的相关工作ꎮ研究表明ꎬ非标记

关键词:表面增强拉曼光谱ꎻ非标记ꎻＤＮＡ检测ꎻ进展中图分类号:Ｑ６３１

文献标志码:Ａ

ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００７￣７１４６.２０２０.０１.００５

ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＬａｂｅｌ￣ｆｒｅｅＳｕｒｆａｃｅＥｎｈａｎｃｅｄＲａｍａｎ

ＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙｉｎＤＮＡＤｅｔｅｃｔｉｏｎ

ＷＵＱｉｏｎｇ１ꎬＬＩＮＨｕｉｊｉｎｇ１ꎬＸＵＬｉａｎｇｐｕ２ꎬＳＵＮＹａｎ２ꎬＬＩＮＤｕｏ１ꎬＣＨＥＮＧｕａｎｎａｎ１∗

(１.ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＯｐｔｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒＭｅｄｉｃｉｎｅｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎꎬＦｕｊｉａｎＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＫｅｙ

ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＰｈｏｔｏｎｉｃｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈｏｔｏｎｉｃａｎｄＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＦｕｊｉａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＦｕｚｈｏｕ３５０００７ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＣｈｉｌｄＨｅａｌｔｈＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＦｕｊｉａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＦｕｚｈｏｕ３５０００１ꎬＣｈｉｎａ)

Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＳｕｒｆａｃｅｅｎｈａｎｃｅｄＲａｍａｎｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ(ＳＥＲＳ)ꎬａｎｕｌｔｒａ￣ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｔｉｃａｌｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬｈａｓｂｅｅｎ

ｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬｓｕｃｈａｓｃｅｌｌꎬｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄꎬｐｒｏｔｅｉｎꎬｓｈｏｗｉｎｇｇｒｅａｔｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｏｆｔｅｎｔｉｏｎｓ.ＴｈｉｓｒｅｖｉｅｗｂｒｉｅｆｌｙｉｎｔｒｏｄｕｃｅｓｔｈｅｂａｓｉｃｐｒｉｎｃｉｐｌｅｏｆＳＥＲＳａｎｄｉｔｓａｄｖａｎｔａｇｅｓｉｎＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎ.Ｉｔｍａｉｎｌｙｉｎｔｒｏ￣ＳＥＲＳｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｓｅｘｐｅｃｔｅｄｔｏｂｅｃｏｍｅａｆａｓｔａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｃｌｉｎｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓａｐｐｒｏａｃｈ.

ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ.ＩｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓꎬｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＳＥＲＳｉｎａｃｃｕｒａｔｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒＤＮＡｈａｓａｔｔｒａｃｔｅｄｅｘｔｅｎｓｉｖｅａｔ￣

ｄｕｃｅｓｌａｂｅｌ￣ｆｒｅｅＤＮＡ￣ＳＥＲＳｄｅｔｅｃｔｉｏｎꎬｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｒｅｌａｔｅｄｗｏｒｋｏｆｏｕｒｇｒｏｕｐ.Ｓｔｕｄｉｅｓｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｌａｂｅｌ￣ｆｒｅｅＤＮＡ￣

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＳＥＲＳꎻｌａｂｅｌ￣ｆｒｅｅꎻＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎꎻａｄｖａｎｃｅｓ

　　ＤＮＡ作为遗传物质的载体ꎬ携带了丰富的人体ＤＮＡ在疾病诊断治疗、刑侦学及法医学等领域都扮

信息ꎬ是一种非常重要的生物分子ꎮ大量研究发现ꎬ

演了十分重要的角色[１￣４]ꎮ医生通过ＤＮＡ的检测ꎬ可获取大量的人体健康状况信息ꎬ为临床诊断(特别是癌症诊断)的治疗方案确定及预后等ꎬ提供有效的

收稿日期:２０１９￣０７￣１３ꎻ修回日期:２０１９￣０９￣１６ꎮ

基金项目:国家自然科学基金项目(８１７４１００８ꎬＵ１６０５２５３)ꎻ福建省自然科学基金项目(２０１７Ｊ０１４９９ꎬ２０１９Ｊ０１２７２)ꎻ福

建省高校杰出青年科研人才培育计划项目(ＪＡ１５２３３)ꎻ中央引导地方科技发展专项项目(２０１７Ｌ３００９)ꎮ

作者简介:吴琼ꎬ博士研究生ꎮ

∗通讯作者:陈冠楠ꎬ教授ꎬ主要研究生物医学信号获取及处理ꎮＥ￣ｍａｉｌ:ｅｄａｄｏ＠ｆｊｎｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎮ

第１期　　　　　　　　　　　　吴　琼等:非标记表面增强拉曼光谱在ＤＮＡ检测中的应用　　　

３５

判断依据ꎮ目前ꎬＤＮＡ检测方法主要包括聚合酶链反应和微阵列技术ꎬ但此类方法通常需要荧光标记、存在成本较高、程序和检测流程复杂、ＤＮＡ分子内在信息极易丢失、样品无法重复利用等缺点[５]ꎮ

１９２８年ꎬ印度科学家Ｒａｍａｎ等[６]发现拉曼散射

检测方法ꎮ目前ꎬＤＮＡ￣ＳＥＲＳ检测主要有两种方式ꎬ一种方法是使用标签分子修饰ＤＮＡꎬ来实现检测目标ＤＮＡ的目的ꎮ另一种是无需加入标记分子ꎬ进行非标记的ＤＮＡ快速检测ꎮ本文主要介绍了非标记ＤＮＡ￣ＳＥＲＳ检测技术的发展进程及本课题组的初步研究进展ꎮ

效应ꎬ证明该现象产生的频率变化ꎬ均取决于散射物体自身的特性ꎬ可以产生具有“指纹”特性的拉曼光谱ꎮ在此基础上ꎬ拉曼光谱技术已经能够获得许多生物大分子的结构信息ꎬ例如:脂肪、ＤＮＡ、蛋白质、１　标记ＤＮＡ￣ＳＥＲＳ检测

标记法是将目标分子通过吸附、杂交等作用ꎬ与核糖、脱氧核糖、各种碳水化合物、染色体病毒等[７]拉曼光谱以其精细的分辨能力、所需样品量少等优ꎮ点ꎬ在医学领域得到迅速的发展ꎬ国内外学者更是将该技术运用于检测人体各个部位[８￣１７]光谱技术仍存在一些无法克服的短板ꎮꎮ由于拉曼散但是ꎬ拉曼射的截面仅有１０￣３０信号和极高生物分子的荧光信号~１０￣２５ｃｍ￣１ꎬ造成了极弱拉曼散射ꎮ因此ꎬ拉曼光信号常常淹没在噪声中ꎬ使得拉曼光谱技术在生物医学领域的发展大大受限[１８]ｃｈｍａｎ等[１９]在电化学试验中发现了表面增强拉曼散ꎮ直到１９７４年ꎬＦｌｅｉｓ￣

射现象ꎬ拉曼信号得到了大大的增强ꎬ这种局面才有了转机ꎮ

表面增强拉曼光谱(ｓｕｒｆａｃｅｅｎｈａｎｃｅｄＲａｍａｎｓｃａｔ￣ｔｅｒｉｎｇꎬＳＥＲＳ)金属表面ꎬ拉曼散射信号可以得到极大增强的现象是指分子吸附在具有纳米级粗糙度的ꎮＳＥＲＳ面等离激元共振增强机理主要来自[２０￣２１]、尖端避雷针效应:１)电磁场增强包括表、镜像场增强ꎻ２)化学增强主要包括金属￣分子间电荷转移、表面络合物表面活性位ꎮ研究表明ꎬ电磁场增强的贡献远大于化学增强ꎬ而电磁场增强主要来自于表面等离子体共振(ｓｕｒｆａｃｅｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅꎬＳＰＲ)ꎬ即金属中的自由电子在光电场下集体发生了振荡效应ꎮＳＥＲＳ的出现ꎬ克服了常规拉曼的固有缺陷ꎬ极大拓展了拉曼光谱的应用ꎮ近４０年来ꎬ科学家进一步研究表明吸附在或者非常接近特定粗糙金属(例如:金、银、铜)表面的待测物质的拉曼信号会被大大提高(约为１０１３~１０１５倍)ꎬ并且能够抑制荧光的产生ꎬ使表面拉曼增强光谱技术成为一种十分有潜力的检测方式[２２￣２４]随着光学检测技术的发展ꎮ

ꎬ人们发现ＳＥＲＳ技术有希望克服当前ＤＮＡ检测存在的缺陷[１]究人员致力将表面增强拉曼光谱技术应ꎮ用因此于ＤＮＡ

ꎬ研检测ꎬ力求发展一种快速、无损、简便、检测限度低的

有一定强度且易分辨的拉曼标记物相连ꎬ后通过检测拉曼标记分子ꎬ间接达到检测目标分子的目的ꎮＳＥＲＳ修饰生物分子的一些物质标记分子能够产生强烈的ꎮ这种标记物常以金或银ＳＥＲＳ信号ꎬ并易于纳米颗粒为增强基底ꎬ同时利用可产生ＳＥＲＳ信号的染料分子在纳米粒子表面修饰ꎮ２００９年ꎬＭａｃＡｓｋｉｌｌ等[２５]已经证明了一种新的ＳＥＲＳ检测方法ꎬ该方法是将与目标ＤＮＡ结合力更强、且用染料标记的探针与目标ＤＮＡ杂交后ꎬ致使探针ＳＥＲＳ信号降低ꎬ以此证明待测物中有目标ＤＮＡ的存在ꎮ与未修饰的标记ＤＮＡ探针相比ꎬ该方法实现了精确匹配和错配间的更大区分ꎮＭｈａｉｒｉ等[２６]将ＴａｑＭａｎ检测技术与ＳＥＲＳ并且ꎬ技术相结合为了证明该检测方式可用于临床ꎬ形成一种全新的ＤＮＡꎬ该研究小组检测方式ꎮ利用这项技术检测基因组ＭＲＳＡ株内的ｍｅｃＡ基因ꎬ并将金黄色葡萄球菌株作为对照试验ꎮ试验证明ꎬ这种新的检测方法可用于生物检测ꎮ同时ꎬ该小组通过银纳米颗粒静电相互作用的差异ꎬ证明了几种标记ＤＮＡ染料亲和力的差异ꎮ结果表明ꎬ单链ＤＮＡ、明显差异双链ꎬ并证明表面引力是由于核苷酸的静电电ＤＮＡ和游离染料标签的ＳＥＲＳ强度存在荷引起ꎬ而非来自ＳＥＲＳ染料的亲和力ꎮ该试验进一步证明ꎬ通过对试验条件和序列组成的优化ꎬ可以在较低的ＤＮＡ浓度下实现高精度的ＤＮＡ序列检测[２７]ꎮ２０１４年ꎬＴａｒａ[２８]研究小组首次报道了功能化银纳米粒子和镀银磁性纳米粒子组合成“三明治”模型ꎬ并在稳定夹层中进行ＤＮＡ检测ꎬ能同时识别多种目标分子ꎮ这种方法将目标识别与磁性捕获相结合ꎬ实现了样品低浓度检测ꎬ有极高的灵敏度ꎮ２０１７年Ｓｕ[２９]小组研究出了多色金银纳米蘑菇ꎬ是一种即用型ＳＥＲＳ探针ꎬ可用于超敏感和多路ＤＮＡ/ｍｉＲＮＡ检测ꎮ其特点是制备过程简便ꎬ易于合成ꎬ无需进一步的生物功能化ꎬ为实现多指标同时检测的生化诊

　３６　　　　　　　　　　　　　激　光　生　物　学　报　　　　　　　　　　　

断和细胞成像创造了极大的可能ꎮ２０１８年ꎬＰａｌａ等[３０]介绍了１２种用于ＳＥＲＳ￣ＤＮＡ检测的新型寡核苷酸功能化纳米粒子ꎬ研究表明１２种染料可以独立表达出特异信号ꎬ为实现多重复路检测奠定了基础ꎮｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ)扩增技术与ＤＮＡ检测技术结合ꎬ研发出了新的检测方法ꎮ在２０１６年ꎬＥｕｇｅｎｅ等[３１]对循环肿瘤ＤＮＡ(ｃｔＤＮＡ)进行研究ꎬ他们利用了标准ＰＣＲ的灵敏度优势与ＳＥＲＳ技术的多路复用特点ꎬ检近年来ꎬ有许多研究学者将ＰＣＲ(ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ

第２９卷

现象ꎬ被用于分子信标杂交的无标记检测ꎮ研究表明ꎬ利用ＤＮＡ碱基中的固有信号ꎬ进行无标记ＳＥＲＳ２０１５年ꎬＭａｒｋｓ等[３６]设计了一个利用功能性纳米粒子检测小型血液生物标记物的ＳＥＲＳ检测平台ꎮ试验中适当调整纳米探针的参数ꎬ则能实现灵敏度、范围、重现性、颗粒稳定性以及与生物识别分析的整体控制ꎮ总的来说ꎬ这是一种可控的ＳＥＲＳ分析平台ꎬ用适配体连接ＳＥＲＳ活性纳米粒子ꎬ组装检测小的毒检测ꎬ在生物诊断中具有巨大的潜在应用价值ꎮ

测出重要的黑色素瘤突变ꎬ并采用该方式测定了血清样品中的基因型细胞系和ｃｔＤＮＡꎬ证实了此法的可行性ꎮ２０１８年ꎬ李小舟[３２]小组将含有目标突变基因的ＤＮＡＤＮＡ直肠癌患者的基因突变率链ꎬ再运用进行扩增ＳＥＲＳꎬ用荧光标签标记互补序列上的技术进行检测分析ꎬ并与临床检测所得的结ꎬ获得了结果一致ꎮ

２　２.１　非标记ＤＮＡ￣ＳＥＲＳ检测

为了获取表面增强拉曼光谱国内外研究进展

ꎬ必须要使分析物

靠近或吸附在贵金属表面ꎮ使用非标记ＳＥＲＳ技术检测ꎬ常需挑选一个适当的增强基底ꎬ获得ＤＮＡ碱基的ＳＥＲＳ信号[３３]性的拉曼标记物ꎬ不会对待测ꎮ其优势在于ＤＮＡ:不需要引入外源的原生信号产生干扰ꎮ

早在２００６年ꎬＢｅｌｌ和Ｎａｒａｙａｎａ[３３]已经尝试利用表面增强拉曼技术对低浓度无标记单核苷酸进行检测ꎬ获取ＤＮＡ分子与不同银胶作用后的光谱ꎬ并对结果进行统计分析ꎮ２００８年ꎬＡｏｕｎｅ等[１]报道了如何成功获得高质量的单链和双链ＤＮＡ￣ＳＥＲＳ光谱ꎮ这种方法是将纳米金壳ＳＥＲＳ基底与ＤＮＡ结合ꎬ使重现性得到了显著的提高ꎮ这是单链ＤＮＡ的热解和双链ＤＮＡ杂交所带来的高规律性和高控制性的电磁增强ꎮ而后ꎬ该小组又提出了一种基于表面增强拉曼光谱的简单、无标记的ＤＮＡ杂交检测方法[３４]人工合成的ꎮ试验证明２￣ＡＰꎬ碱基将探针ꎬ仍然可以检测到腺嘌呤互补ＤＮＡ序列中的腺嘌呤换成

碱基的ＤＮＡꎮＤＮＡ２０１１ＳＥＲＳ序列和金纳米颗粒表面年信号ꎬＰａｐａｄｏｐｏｕｌｏｕꎬ实现定量检测含有腺嘌呤的目标和ꎬＢｅｌｌ[３５]接此时ＤＮＡꎬ通过硫醇连站立在纳米颗粒表面ꎬ使得腺嘌呤的ＳＥＲＳ信号得到优先增强ꎮ之后ꎬ利用碱基的非特异性结合使ＤＮＡ重新定位ꎬ可降低这种效应ꎮ这种重定向导致强度改变的素分子ꎮ同年ꎬＳｕｎ等[３７]构建了一种新型的纳米通道传感平台ꎬ该装置简单易行ꎬ可在受限的三维纳米空间实Ｘｕ等现无标记、超灵敏、高特异性的ＤＮＡ检测ꎮ[４]利用碘化钾修饰Ａｇ纳米基底ꎬ并在接近人体生理条件的环境中ꎬ获取了单链和双链核苷酸的高重现性的ＳＥＲＳ信号ꎮ值得注意的是ꎬ碘化层不仅能够清除Ａｇ纳米粒子表面的杂质ꎬ还能防止Ａｇ纳米粒子表面与ＤＮＡ直接发生相互作用ꎬ确保获得高重现性的信号ꎮ并且ꎬ该工作证明ＭｇＳＯＤＮＡ更有效地吸附ꎬ能够使ＡｇＩＭＮＰｓ４能使带负电荷的产生聚集ꎬ产生较强的ＳＥＲＳ信号ꎮ他们认为可以将磷酸骨架作为内部标记ꎬ从而使得寡核苷酸的ＳＥＲＳ光谱标准化ꎬ以除去外部因素对光谱的影响ꎮ２０１８年ꎬＨａｎ小组[３８]将表面增强拉曼光谱技术与微流控技术结合ꎬ研发了一种基于银纳米颗粒(ＡｇＮＰｓ)和氧化石墨烯(ＧＯ)简便的激光刻划的生物芯片ꎬ该芯片可重复用于ＤＮＡ检测ꎮＡｇＮＰｓ＠ＧＯ复合膜的可编程激光刻划芯片ꎬ通过将复合材料剥离成分层多孔结构ꎬ使由石墨烯支撑的ＡｇＮＰｓ组成的灵敏ＳＥＲＳ通道直接形成所需图案ꎮＤＮＡ和石墨烯之间的非共价相互作用介导了ＤＮＡ序列可控的捕获和释放ꎬ由此ꎬ在该生物芯片上可重复进行ＳＥＲＳ检测ꎬ有望对遗传疾病诊断提供帮助ꎮ２０１９年ꎬＬｉ等[３９]开发了一种新的非标记ＤＮＡ检测方法ꎬ可实现定量检测单链ＤＮＡꎮ他们引入一种新的界面剂二氯甲烷ꎬ并将其作为内标分子ꎬ实现了对不同链长单链ＤＮＡ的高灵敏检测ꎬ并且突破了双链ＤＮＡ的检测局限ꎮ此外ꎬ该方法已被证明能够识别具有单碱基变化的长链ＤＮＡ中的基因突变ꎬ在快速遗传分析方面具有很大的临床诊断潜力２.２　ꎮ

福建师范大学项目组将本课题组研究进展

ＤＮＡ￣ＳＥＲＳ检测用于鼻

咽癌的早期诊断ꎬ并对采集的数据进行多元统计分析ꎬ早期鼻咽癌、晚期鼻咽癌、正常鼻咽组织ＤＮＡ的

第１期　　　　　　　　　　　　吴　琼等:非标记表面增强拉曼光谱在ＤＮＡ检测中的应用　　　

３７

诊断准确率分别为８７.９％ꎬ８６.８％和９２.３％ꎮ该项探索性研究证明了可将ＳＥＲＳ测试利用于组织中提取的ＤＮＡꎬ此方法有潜力成为鼻咽癌早期筛查的一种新的方式[４０]ꎮ本课题组的刘秀杰等[４１]发明了一种ＤＮＡ链作为信号开关检测重金属离子的方法:利用银镜反应制作的玻片作为表面增强拉曼散射(ＳＥＲＳ)检测的基底ꎬ再通过硫醇键将用Ｃｙ５标记的ＤＮＡ链连接在还原有银膜的基底上ꎬ用ＤＮＡ链作为拉曼信号的开关ꎬ以此来间接表明待测介质中是否金属检测的基底ꎬ使得ＳＥＲＳ增强效果和检测的灵敏度得到了大大的提升ꎬ并且具有极好的重复性ꎮ林多等[４２]利用金属羰基化合物的光谱特性ꎬ设计了一种基于表面增强拉曼光谱技术的比率检测试验对鼻咽癌患者血液中游离态的ＥＢ病毒ＤＮＡ进行检测ꎮ试验中主要利用铼羰基化合物(Ｒｅ￣ＣＯ)作为ＤＮＡ探针ꎬ另外一种锇羰基化合物(Ｏｓ￣ＣＯ)则被镶嵌于存在重金属离子汞(Ｈｇ２＋)ꎮ通过镀银的玻片做为重

ＳＥＲＳ基底中作为ＤＮＡ检测内标ꎬ最后在基底表面修饰上链霉亲和素ꎬ用来捕获带有生物素的游离态目标ＤＮＡꎮ由于这两种羰基化合物的拉曼信号都处于生物分子的指纹区外(静默区)ꎬ不会受其他生物分子影响ꎬ因此该文章提出的方法有望对血液中的游离ＤＮＡ进行准确的定量检测ꎮ之后ꎬ他们利用光谱信号处于１８００~２２００ｃｍ￣１的羰基化合物(Ｏｓ￣ＳＣＯ此外ꎬ还将ＳＥＲＳ探针(Ｒｅ￣ＳＣＯ)装备在包裹有介孔硅的纳米棒材料中ꎬ在光的刺激下可将该探针大量释放到ＳＥＲＳ基底上获得其拉曼信号ꎬ由此实现ＳＥＲＳ信号的二次放大ꎮ研究表明ꎬ利用该技术能对ＤＮＡ实现可靠以及超灵敏的检测ꎬ这对于发展基于ＳＥＲＳ的液体活检技术具有重要意义[４３]ꎮ

基于以上的文献探索ꎬ本课题组也对单链ＤＮＡ

和Ｒｅ￣ＳＣＯ)作为ＳＥＲＳ探针ꎬ实现低浓度ＤＮＡ检测ꎮ

检测展开了试验研究ꎬ试验流程如图１所示ꎮ

图１　单链ＤＮＡ检测流程图

Ｆｉｇ.１　Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｆｏｒｓｉｎｇｌｅ￣ｓｔｒａｎｄＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎ

表１　ＤＮＡ表面增强拉曼光谱峰位归属[１ꎬ４ꎬ３１￣３３ꎬ３８]Ｔａｂ.１Ｔｈｅｐｅａｋｐｏｓｉｔｉｏｎｓａｎｄｔｅｎｔａｔｉｖｅａｓｓｉｇｎｍｅｎｔｏｆ

ｍａｊｏｒｖｉｂｒａｔｉｏｎａｌｂａｎｄｓｉｎＤＮＡ

６８３７３５７９２

Ｒａｍａｎｂａｎｄｓ(ｃｍ￣１)ＡｓｓｉｇｎｍｅｎｔｓａＧ

Ａꎬｒｉｎｇｂｒｅａｔｈｉｎｇ

１０９２１２２２

图２　ＳＥＲＳ光谱图Ｆｉｇ.２　ＳＥＲＳｓｐｅｃｔｒａ

(ａ)纯银胶的拉曼背景信号ꎻ(ｂ)单链ＤＮＡ的ＳＥＲＳ光谱

(ａ)Ｔｈｅｂａｃｋｇｒｏｕｎｄｓｉｇｎａｌｏｆｐｕｒｅｓｉｌｖｅｒｃｏｌｌｏｉｄꎻ

(ｂ)ＳＥＲＳｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｓｉｎｇｌｅ￣ｓｔｒａｎｄＤＮＡ

ＣꎬＴꎬＰＯ２￣ꎬｓｋｅｌｅｔｏｎｓｔｒｅｔｃｈｉｎｇＰＯ２￣ꎬｓｙｍｍｅｔｒｉｃｓｔｒｅｔｃｈｉｎｇＡ

ＣＨ２ꎬｄｅｆｏｒｍａｔｉｏｎＡꎬＧＴꎬＣ

ＡꎬＣꎬｏｒＴꎬｒｉｎｇｓｔｒｅｔｃｈｉｎｇ

１３２６１４５９１５５５１６２９

注:Ａ:腺嘌呤ꎻＴ:胸腺嘧啶ꎻＧ:鸟嘌呤ꎻＣ:胞嘧啶Ｎｏｔｅ:Ａ:ＡｅｎｉｎｅꎻＴ:ＴｙｍｉｎｅꎻＧ:ＧａｎｉｎｅꎻＣ:Ｃｔｏｓｉｎｅ

　３８　　　　　　　　　　　　　激　光　生　物　学　报　　　　　　　　　　　

　　本试验获得了单链ＤＮＡ的表面增强拉曼光谱ꎬ图２中ｂ曲线为单链ＤＮＡ的ＳＥＲＳ光谱ꎬ图２中ａ曲线为银胶的背景信号ꎮ值得注意的是ꎬ在单链ＤＮＡ１２２２、１３２６、１４５９、１５５５以及１６２９ｃｍ￣１拉曼谱峰(图２中ｂ曲线)ꎮ如表１所示ꎬ有很多试验证明这些谱峰可以归属于磷酸骨架(ＰＯ)、腺嘌呤、鸟嘌

２￣

第２９卷

的ＳＥＲＳ光谱图中可以观察到６８３、７３５、７９２、１０９２、

[５]　ＮＩＥＭＥＹＥＲＣＨＲＩＳＴＯＦＭꎬＢＩＯＨＭＤＩＥＴＭＡＲ.ＤＮＡｍｉｃｒｏａｒ￣

ｒａｙｓ[Ｊ].ＡｎｇｅｗａｎｄｔｅＣｈｅｍｉｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＥｄｉｔｉｏｎꎬ１９９９ꎬ３８(１９):２８６５￣２８６９.[６]　ＲＡＭＡＮＣＶꎬＫＲＩＳＨＮＡＮＫＳ.Ａｎｅｗｔｙｐｅｏｆｓｅｃｏｎｄａｒｙｒａｄｉａ￣

ｔｉｏｎ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ１９２８ꎬ１２１(３０４８):５０１￣５０２.[７]　ＤＡＳＲＳꎬＡＧＲＡＷＡＬＹＫ.Ｒａｍａｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ:ｒｅｃｅｎｔａｄ￣

ｖａｎｃｅｍｅｎｔｓꎬｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＶｉｂｒａｔｉｏｎａｌＳｐｅｃ￣ｔｒｏｓｃｏｐｙꎬ２０１１ꎬ５７(２):１６３￣１７６.

[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙꎬ２０１５ꎬ１３７(１５):５１４９￣５１５４.

呤、胞嘧啶及胸腺嘧啶[１ꎬ４ꎬ３３￣３５ꎬ４０]ꎮ在今后的研究里ꎬ我们希望可以利用ＳＥＲＳ技术对ＤＮＡ分子中的生化[８]　ＤＩＮＧＨꎬＤＵＰＯＮＴＡＷꎬＳＩＮＧＨＡＬＳꎬｅｔａｌ.Ｅｆｆｅｃｔｏｆｐｈｙｓｉｏ￣

ｌｏｇｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓｏｎｔｈｅｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｃｏｌｏｎｔｉｓｓｕｅ￣ａｎｉｎｖｉｖｏＲａｍａｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙｓｔｕｄｙ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＲａｍａｎＳｐｅｃｔｒｏｓ￣成分组成及数量差异进行进一步的探索ꎮ

３　总结与展望

本文简单介绍了国内外研究者对ＤＮＡ检测的研究ꎬ特别是非标记ＤＮＡ检测ꎮＳＥＲＳ的主要优点:一是能够用最少生物样品进行检测ꎬ其灵敏度甚至可以达到１０￣１５重复路检测ꎬｍｏｌ同时对多个目标物进行分析/Ｌꎻ二是利用ＳＥＲＳ技术可以实现多ꎬ有利于疾病的诊断和预后ꎮＳＥＲＳ技术的优势恰恰克服了当下临床诊断方法的一些不足ꎬ目前ꎬ该技术已被应用于真实的临床样本ꎮ大量的科研人员致力于发展一种简单、快速的ＤＮＡ检测技术ꎬ希望能够通过ＳＥＲＳ技术获得ＤＮＡ中的碱基排列顺序、碱基突变序列等ꎬ从而探索更丰富、更深层的遗传信息ꎮ

综上所述ꎬＳＥＲＳ技术在ＤＮＡ检测方面表现出了巨大的应用潜力ꎮ虽然ꎬ在目前的技术水平和试验条件下ꎬＳＥＲＳ光谱无法确切表达出ＤＮＡ序列中碱基的特定顺序ꎬ但采用标记的ＳＥＲＳ检测技术ꎬ已经实现了对ＤＮＡ高灵敏度、高特异性的定性甚至定量检测ꎮ而非标记ＤＮＡ￣ＳＥＲＳ检测技术ꎬ也以其简便、快捷、无损等优势ꎬ成为时下的研究热点ꎬ有很大的发展潜力ꎮ相信在不久的将来ꎬ非标记ＤＮＡ￣ＳＥＲＳ检测技术能够发展为一种快速、准确的疾病基因诊断新方法ꎮ

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Ｒａ￣

[９]　ｃｏｐｙꎬＤＲＡＧＡ２０１７ꎬｅｔｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｌ.ＩｎＲｖｉｖｏＯ４８(７)[ＰꎬｂｌａｄｄｅｒＪ].ＧＲＩＭＢＥＲＧＥＮ:９０２￣９０９.

ＡｎａｌｙｔｉｃａｌｃａｎｃｅｒＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬｄｉａｇｎｏｓｉｓＭＣＭꎬｂｙ２０１０ꎬＶＩＪＶＥＲＢＥＲＧｈｉｇｈ￣ｖｏｌｕｍｅ８２(１４):ＰＲａｍａｎ５９９３￣ＬＭꎬ

[１０]　５９９９.ＴＥＨｓｉｓｃｏｐｙｏｆＳＫꎬＺＨＥＮＧＷꎬＬＡＵＤＰꎬｅｔａｌ.Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃｄｉａｇｎｏ￣

[１１]　[ａｎｄｌａｒｙｎｇｅａｌｒａｎｄｏｍｃａｒｃｉｎｏｍａｒｅｃｕｒｓｉｖｅｕｓｉｎｇｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇｎｅａｒ￣ｉｎｆｒａｒｅｄｅｎｓｅｍｂｌｅＲａｍａｎｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｓｐｅｃｔｒｏｓ￣ＷＡＣＨＳＭＡＮＮＪ].Ａｎａｌｙｓｔꎬ２００９ꎬｎａｌｙｓｉｓｃｅｌｌｓｔｏｉｎｈｕｍａｎｓｖｉｖｏａｎｄＨＯＧＩＵ１３４(６)[Ｊ].ｉｎＣｕｒｒｅｎｔｖｉｔｒｏＳꎬＷＥＥＫＳ:１２３２￣１２３９.ｂｙＯｐｉｎｉｏｎＲａｍａｎＴꎬｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ￣￣ｆｒｏｍｉｎＨＵＳＥＲＴ.Ｃｈｅｍｉｃａｌｓｉｎｇｌｅａ￣

[１２]　２０(１)ＺＨＡＮＧ:６３￣７３.Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２００９ꎬＲａｍａｎｃａｌｉｚａｔｉｏｎ[１３]　ＣｈｅｍｉｃａｌｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙＣꎬｏｆＷＩＮＮＡＲＤｂｒｅａｓｔｐｒｏｖｉｄｅｓｃａｎｃｅｒ￣ｃｏｌｏｎｉｚｅｄＪＲＰｅａｒｌｙＴꎬＤＡＳＡＲＩｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｂｏｎｅＳꎬａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｅｔａｎｄａｌ.ｐｒｅｃｉｓｅＬａｂｅｌ￣ｆｒｅｅ

[Ｊ].ｌｏ￣ＤＥＶＰＵＲＡＳｃｉｅｎｃｅꎬｏｆｃａｎｃｅｒｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙｂｅｎｉｇｎｒｅｇｉｏｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａꎬＳꎬＴＨＡＫＵＲ２０１８ꎬ[Ｊ].ｉｎｒａｄｉｃａｌＶｉｂｒａｔｉｏｎａｌｐｒｏｓｔａｔｉｃＪ９(３)ｐｒｏｓｔａｔｅｃｔｏｍｙＳꎬＳＡＲＫＡＲ:７４３￣７５３.ＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙꎬｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌＦｔｉｓｓｕｅｓＨꎬｅｔ２０１０ꎬｎｅｏｐｌａｓｉａꎬａｌｕｓｉｎｇ.Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ

５３Ｒａｍａｎ(２ａｎｄ[１４]　２２７￣２３２.

):ＥＲＧＨＯＬＴｉｎｆｒａｒｅｄ￣ｅｘｃｉｔｅｄｐｒｏｖｅｓｉｎｖｉｖｏＭＳꎬｄｉａｇｎｏｓｉｓａｕｔｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＺＨＥＮＧｏｆＷꎬＬＩＮａｎｄＫꎬＲａｍａｎｅｔａｌ.ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙＣｏｍｂｉｎｉｎｇｎｅａｒ￣

ｉｍ￣[１５]　Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓꎬｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ[Ｊ].ＢｉｏｓｅｎｓｏｒｓａｎｄＬＩＮｇｅａｌＫꎬ２０１１ꎬ２６(１０):４１０４￣４１１０.ｃａｎｃｅｒＣＨＥＮＧｕｓｉｎｇＤｈｉｇｈＬＰꎬＨＵＡＮＧＺ.Ｏｐｔｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｌａｒｙｎ￣

[１６]　ＢｉｏｓｅｎｓｏｒｓＢＲＯＺＥＫ￣ＰＬＵＳＫＡａｎｄＢｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓꎬｗａｖｅｎｕｍｂｅｒ２０１２ꎬＲａｍａｎ３５(１)ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ:２１３￣２１７.

[Ｊ].ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｎｄｉｍａｇｉｎｇ:ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓＢꎬＭＵＳＩＡＬＪꎬＫＯＲＤＥＫｉｎＲꎬｅｔａｌ.Ｒａｍａｎ

[１７]　ｄｉａｇｎｏｓｉｓＬＵＩｔｒｏｓｃｏｐｙＨꎬＺＨＡＯ[Ｊ].Ａｎａｌｙｓｔꎬ２０１２ꎬ１３７(１６):ｈｕｍａｎ３７７３￣３７８０.ｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｆｏｒｉｎＪꎬｖｉｖｏＭＣＬＥＡＮｓｋｉｎｃａｎｃｅｒＤꎬｅｔｄｉａｇｎｏｓｉｓａｌ.Ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ[Ｊ].ＲａｍａｎＣａｎｃｅｒｓｐｅｃ￣

Ｒｅ￣[１８]　ｓｅａｒｃｈꎬＬＡＤＥＭＡＮＮ２０１２ꎬ７２(１０):２４９１￣２５００.

ｍａｎｔｅｎｔｉａｌｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙｗｉｔｈｔｏｐｉｃａｌｌｙＪꎬＣＡＳＰＥＲＳｄｅｔｅｃｔｓａｐｐｌｉｅｄｉｎｃｒｅａｓｅｄＰＪꎬｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓＰＯＬｅｐｉｄｅｒｍａｌＡＶꎬ[Ｊ].ｅｔａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅａｌ.ＬａｓｅｒＩｎｖｉｖｏＰｈｙｓｉｃｓＲａ￣

ｐｏ￣[１９]　ＬｅｔｔｅｒｓꎬＦＬＥＩＳＣＨＭＡＮＮ２００９ꎬ６(１)ｓｐｅｃｔｒａ[２０]　ＰｈｙｓｉｃｓｏｆｐｙｒｉｄｉｎｅＭꎬａｄｓｏｒｂｅｄＨＥＮＤＲＡ:７６￣７９.ａｔａＰｓｉｌｖｅｒＪꎬＭＣＱＵＩＬＬＡＮｅｌｅｃｔｒｏｄｅ[Ｊ].ＡＪ.ＣｈｅｍｉｃａｌＲａｍａｎ

ＤＩＮＧｒｉｅｓｏｆＳＬｅｔｔｅｒｓꎬｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄＹꎬＹＯＵ１９７４ꎬＥＭꎬ２６(２)ＴＩＡＮ:１６３￣１６６.ＲａｍａｎＺＱꎬｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙｅｔａｌ.Ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ[Ｊ].Ｃｈｅｍｉｃａｌｔｈｅｏ￣

[２１]　ＳｏｃｉｅｔｙＧＥＲＳＴＥＮＲｅｖｉｅｗｓꎬＲａｍａｎ[２２]　ＪｏｕｒｎａｌｓｃａｔｔｅｒｉｎｇＦＥＮＧｏｆＪꎬＮＩＴＺＡＮ２０１７ꎬｂｙｍｏｌｅｃｕｌｅｓＡ.４６(１３)Ｅｌｅｃｔｒｏｍａｇｎｅｔｉｃ:４０４２￣４０７６.ａｄｓｏｒｂｅｄｏｎｒｏｕｇｈｔｈｅｏｒｙｓｕｒｆａｃｅｓｏｆｅｎｈａｎｃｅｄ

[Ｊ].ｄｅｔｅｃｔｉｏｎＳＹꎬＣｈｅｍｉｃａｌｂａｓｅｄＣＨＥＮｏｎｂｌｏｏｄＲꎬＰｈｙｓｉｃｓꎬＬＩＮ１９８０ꎬ７３(７):３０２３￣３０３７.

ｐｌａｓｍａＪＱꎬｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄｅｔａｌ.ＮａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌＲａｍａｎｃａｎｃｅｒ

ｓｐｅｃ￣

第１期　　　　　　　　　　　　吴　琼等:非标记表面增强拉曼光谱在ＤＮＡ检测中的应用　　　

ｔｒｏｓｃｏｐｙａｎｄｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅａｎａｌｙｓｉｓ[Ｊ].ＢｉｏｓｅｎｓｏｒｓａｎｄＢｉｏｅｌｅｃ￣ｔｒｏｎｉｃｓꎬ２０１０ꎬ２５(１１):２４１４￣２４１９.

３９

[２３]　ＫＮＥＩＰＰＫꎬＭＯＳＫＯＶＩＴＳＭꎬＫＮＥＩＰＰＨ.Ｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄ

Ｒａｍａｎｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ[Ｊ].ＰｈｙｓｉｃｓＴｏｄａｙꎬ２００７ꎬ６０(１１):４０￣４６.[２４]　ＬＩＮＤꎬＦＥＮＧＳＹꎬＰＡＮＪＪꎬｅｔａｌ.Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎ

ｂｙｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｂａｓｅｄｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄＲａｍａｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏ￣ｐｙｏｆｂｌｏｏｄｓｅｒｕｍａｎｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ[Ｊ].ＯｐｔｉｃｓＥｘｐｒｅｓｓꎬ２０１１ꎬ１９(１４):１３５６５￣１３５７７.

[３４]　ＢＡＲＨＯＵＭＩＡꎬＨＡＬＡＳＮＪ.Ｌａｂｅｌ￣ｆｒｅｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｈｙ￣

ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｕｓｉｎｇｓｕｒｆａｃｅｅｎｈａｎｃｅｄＲａｍａｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙꎬ２０１０ꎬ１３２(３７):１２７９２￣１２７９３.

[３５]　ＰＡＰＡＤＯＰＯＵＬＯＵＥꎬＢＥＬＬＳＥ.ＤＮＡｒｅｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎｏｎＡｕ

ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ:ｌａｂｅｌ￣ｆｒｅｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｂｙｓｕｒｆａｃｅｅｎｈａｎｃｅｄＲａｍａｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ[Ｊ].ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｍｕｎｉｃａ￣ｔｉｏｎｓꎬ２０１１ꎬ４７(３９):１０９６６￣１０９６８.

[２５]　ＭＡＣＡＳＫＩＬＬＡꎬＣＲＡＷＦＯＲＤＤꎬＧＲＡＨＡＭＤꎬｅｔａｌ.ＤＮＡ

ｓｅｑｕｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｕｓｉｎｇｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄｒｅｓｏｎａｎｃｅｒａｍａｎｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙｉｎａｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄａｓｓａｙ[Ｊ].Ａｎａｌｙｔｉ￣ｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２００９ꎬ８１(１９):８１３４￣８１４０.

[３６]　ＭＡＲＫＳＨꎬＧＲＡＨＡＭＤꎬＣＯＴＥＧＬ.ＳＥＲＳａｃｔｉｖｅｃｏｌｌｏｉｄａｌ

ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌｂｌｏｏｄｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｕｓｉｎｇａｐｔａｍｅｒｓ[Ｃ].ＣｏｌｌｏｉｄａｌＮａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｒＢｉｏｍｅｄｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａ￣ｔｉｏｎｓＸꎬ２０１５ꎬ９３３８１.

[２６]　ＨＡＲＰＥＲＭＭꎬＲＯＢＥＲＴＳＯＮＢꎬＲＩＣＫＥＴＴＳＡꎬｅｔａｌ.Ｓｐｅ￣

ｃｉｆｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤＮＡｔｈｒｏｕｇｈｃｏｕｐｌｉｎｇｏｆａＴａｑＭａｎａｓｓａｙｗｉｔｈ[３７]　ＳＵＮＺꎬＬＩＡＯＴꎬＺＨＡＮＧＹꎬｅｔａｌ.Ｂｉｏｍｉｍｅｔｉｃｎａｎｏｃｈａｎｎｅｌｓ

ｂａｓｅｄｂｉｏｓｅｎｓｏｒｆｏｒｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｌａｂｅｌ￣ｆｒｅｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｕ￣ｓｕｒｆａｃｅｅｎｈａｎｃｅｄＲａｍａｎｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ(ＳＥＲＳ)[　ＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎬＨＡＥＰＥＲ２０１２ꎬ４８(７５):９４１２￣９４１４.

Ｊ].ＣｈｅｍｉｃａｌｏｆＳＥＲＳａｃｔｉｖｅＭＭꎬｌａｂｅｌｌｅｄＤＯＵＧＡＮＪＡꎬＳＨＡＮＤＮＣꎬｅｔａｌ.Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ

　ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓＤＮＡｂａｓｅｄｏｎｓｕｒｆａｃｅａｆｆｉｎｉｔｙｔｏｓｉｌｖｅｒＤＯＮＮＥＬＬＹ[Ｊ].Ａｎａｌｙｓｔꎬ２０１２ꎬ１３７(９):２０６３￣２０６８.

ｍａｇｎｅｔｉｃ[Ｊ].ＣｈｅｍｉｃａｌｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓＴꎬＳＭＩＴＨＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎬｆｏｒＷｓｅｎｓｉｔｉｖｅＥꎬＦＡＵＬＤＳ２０１４ꎬＤＮＡＫꎬｄｅｔｅｃｔｉｏｎ５０ｅｔ(ａｌ８５.)Ｓｉｌｖｅｒ:ｂｙＳＥＲＳａｎｄ

　１２９１０.１２９０７￣ＪＩＮＧｎａｎｏ￣ｍｕｓｈｒｏｏｍｓａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｘＳꎬＷＡＮＧＤＮＡＤａｓＦꎬ/ｒｅａｄｙ￣ｔｏ￣ｕｓｅｍｉＲＮＡＮÖＲＢＥＬｄｅｔｅｃｔｉｏｎＬꎬＳＥＲＳｅｔａｌ[ｐｒｏｂｅｓＪ]..Ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒｆｏｒｕｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅｇｏｌｄ￣ｓｉｌｖｅｒ

　ｔｒｙꎬＰＡＬＡ２０１７ꎬ８９(４):２５３１￣２５３８.ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓ￣ｄｙｅｓｃｌｅｓｆｏｒＬꎬｕｓｅＭＡＢＢＯＴＴｗｉｔｈｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳꎬＦＡＵＩＤＳｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｓｅｄＫꎬｅｔａｌ.Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ１２ｎｅｗ

　８(３２)ｆｏｒＷＥＥ:ＤＮＡ１７６８５￣１７６９３.

ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈＳＥＲＳ[Ｊ].ＲＳＣＡｄｖａｎｃｅｓꎬｓｉｌｖｅｒｎａｎｏｐａｒｔｉ￣２０１８ꎬｓｅｎｓｉｔｉｖｅｍｅｌａｎｏｍａＪＨꎬＳＥＲＳｎａｎｏｔａｇｓａｎｄＤＮＡＷＡＮＧａｃｃｕｒａｔｅＹＬꎬＣＨＡＮＧ￣ＨＡＯＨＴＳꎬｅｔａｌ.Ｓｉｍｐｌｅꎬ

[ｍｕｔａｔｉｏｎｓＪ].ｍｕｌｔｉｐｌｅｘＴｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓꎬｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ２０１６ꎬｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｌｙｔｕｍｏｕｒ６(１０ＤＮＡ)ｉｍｐｏｒｔａｎｔ:ｗｉｔｈ　１５１３.１５０６￣ＬＩｔｒｏｓｃｏｐｙｐｉｋ３ｃａＸꎬＹＡＮＧＴꎬＬＩＣ　Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓꎬｍｕｔａｔｉｏｎｓ(ＳＥＲＳ)ＢＥＬＬ２０１８ꎬｉｎｆｏｒｐｌａｓｍａ８(６)ｔｈｅＳꎬｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｔａｌ.Ｓｕｒｆａｃｅ:ｏｆ１６７８￣１６８９.

ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎｅｎｈａｎｃｅｄｃａｎｃｅｒｏｆｂｒａｆꎬｐａｔｉｅｎｔｓｒａｍａｎｋｒａｓꎬｓｐｅｃ￣

[ａｎｄＪ].ｔｒｏｓｃｏｐｙｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓＳＥꎬｔｙꎬ２００６ꎬ(ＳＥＲＳ)ＳＩＲＩＭＵＴＨＵ１２８(４９)[Ｊ].ｆｏｒ:１５５８０￣１５５８１.

ｓｕｂ￣ｍｉｃｒｏｍｏｌａｒＪｏｕｒｎａｌＮＭ.ｏｆＳｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎＣｈｅｍｉｃａｌｏｆＲａｍａｎＤＮＡＳｏｃｉｅ￣/ｓｐｅｃ￣

ＲＮＡｃｌｅｉｃａｃｉｄｓ[Ｊ].ＢｉｏｓｅｎｓｏｒｓａｎｄＢｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓꎬ２０１６ꎬ[３８]　１９４￣２０１.

(８６):ＨＡＮａｇｎｐｓ＠[Ｊ].ＢꎬＳｅｎｓｏｒｓｒｇｏＺＨＡＮＧｂｉｏｃｈｉｐａｎｄＹＡｃｔｕａｔｏｒｓａｓＬꎬａＺＨＵｒｅｕｓａｂｌｅＢ:ＣｈｅｍｉｃａｌꎬＬꎬｅｔｓｅｒｓａｌ.ｓｅｎｓｏｒＤｉｒｅｃｔ２０１８ꎬｆｏｒｌａｓｅｒＤＮＡ(２７０)ｓｃｒｉｂｉｎｇｄｅｔｅｃｔｉｏｎ:５００￣ｏｆ

[３９]　５０７.

ＬＩｆｒｅｅｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎＹꎬＧＡＯＴＹꎬＸＵＧＴꎬｅｔａｌ.Ｄｉｒｅｃｔａｐｐｒｏａｃｈｔｏｗａｒｄｌａｂｅｌ￣

ｌｅｈｅｌｉｘｅｓＤＮＡ[ｄｅｔｅｃｔｉｏｎＪ].ｏｆＡｎａｌｙｔｉｃａｌａｓｉｎｇｌｅ￣ｂａｓｅｂｙｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬｍｕｔａｔｉｏｎ２０１９ꎬｉｎＲａｍａｎ５０ｂａｓｅ￣ｐａｉｒｅｄ９１(１３ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ:):７９８０￣ｄｏｕｂ￣[４０]　７９８４.ＱＩＵｇｅａｌｅｎｈａｎｃｅｄＳꎬ[４１]　ｉｃａｌＬＵＯｐｔｉｃｓꎬｃａｒｃｉｎｏｍａＬＩＲａｍａｎＣꎬＬＩＮ２０１６ꎬｂａｓｅｄｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙＪꎬ２１(１２)ｏｎｅｔａｌｔｉｓｓｕｅ.Ｅａｒｌｙ:ａｎａｌｙｓｉｓｄｅｏｘｙｒｉｂｏｓｅｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ[Ｊ].ｎｕｃｌｅｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆａｃｉｄｎａｓｏｐｈａｒｙｎ￣

ｏｆＢｉｏｍｅｄ￣ｓｕｒｆａｃｅ￣ｔｏＤＮＡ[Ｊ].ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＹＬꎬＳｅｎｓｏｒｓａｐｔａｍｅｒ￣ｍｏｄｉｆｉｅｄＪＩＥＺꎬ＆ａｎｄＹＡＯＧＡｃｔｕａｔｏｒｓｓｅｌｅｃｔｉｖｅＨꎬＳｉＯＢｄｅｔｅｃｔｉｏｎｅｔ１２５００３￣１２５００６.ａｌ.Ａｌａｂｅｌ￣ｆｒｅｅＳＥＲＳ２Ｃｈｅｍｉｃａｌꎬ＠Ａｕｏｆｃｏｒｅｍｅｒｃｕｒｙ２０１８ꎬ/ｓｈｅｌｌ((ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓＩＩ)ａｐｐｒｏａｃｈ

２５８ｂａｓｅｄ):３６５￣ｏｎ[４２]　３７２.ＬＩＮｂｉｏｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ￣ｆｒｅｅｔｒｏｓｃｏｐｙ￣ｂａｓｅｄＤꎬＧＯＮＧＴＸꎬＨＯＮＧＺＹꎬｅｔａｌ.Ｍｅｔａｌｂａｒｒｖｉｒｕｓｉｎｂｌｏｏｄａｓｓａｙｒａｔｉｏｍｅｔｒｉｃｆｏｒ[Ｊ].ｃｅｌｌ￣ｆｒｅｅＡｎａｌｙｔｉｃａｌｓｕｒｆａｃｅ￣ｅｎｈａｎｃｅｄｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇＣｈｅｍｉｓｔｒｙꎬＤＮＡｃａｒｂｏｎｙｌｓＲａｍａｎｏｆｅｐｓｔｅｉｎ￣ｆｏｒｓｐｅｃ￣ｔｈｅ

[４３]　(１２)ＬＩＮｎａｎｏｓｅｎｓｏｒｌａｔｅｄＤꎬ:７１３９￣７１４７.２０１８ꎬ９０ＧＯＮＧ１５４８￣１５５１.

ＤＮＡ[ｂａｓｅｄＪ].ＴＣｈｅｍｉｃａｌＸꎬｏｎＳＥＲＳＱＩＵＳｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎬＦꎬｅｔａｌ.Ｄｕａｌｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｉｇｎａｌ２０１８ꎬａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ｏｆ５５ｔｕｍｏｒ￣ｒｅ￣(１１):[２７][２８][２９][３０][３１][３２][３３]