德国Zeiss激光扫描共聚焦显微镜
快速操作手册
制作：制作：Zeiss光学仪器（光学仪器（上海）上海）国际贸易有限公司 孙 凯
2009年6月
目录：目录： 1 系统的组成 系统组成及光路示意图 实物照片说明实物照片说明
2 系统的使用 2.1 开机顺序
2.2 软件的快速软件的快速使用快速使用说明使用说明 2.3 显微镜的显微镜的触摸屏控制 2.4 关机顺序 3 系统的维护
1 系统的组成
激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、电动荧光显微镜、扫描检测单元、扫描检测单元、激光器、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路系统组成及光路示意图组成及光路示意图：示意图：
电动荧光显微镜 扫描检测单元
激光器
电脑工作站
实物照片说明：实物照片说明：
电动荧光显微镜
扫描检测单元
CO2培养系统控制器
激光器
电脑工作站
2 系统的使用 2.1 开机顺序
（1）打开稳压电源（打开稳压电源（绿色按钮）绿色按钮）
（2）主开关 [ MAIN SWITCH ]“ON” 电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“ON” 扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“ON”
（3）打开 [ 扫描载物台开关 ] 打开 [ 电动显微镜开关 ] 打开 [ 荧光灯开关 ]
（注：具有荧光光强调节旋钮具有荧光光强调节旋钮）旋钮）
（4）Ar离子激光器 “ON” 顺时针旋转钥匙 至 “—” 预热等待约预热等待约15分钟，分钟，
将激光器 [ 扳钮 ] 由“Standby”扳至 “Laser run”状态，状态，即可正常使用
（5）打开 [ 电脑开关 ]，进入操作系统 注：键盘上也具有 [ 电脑开关 ]
2.2 软件的快速使用说明
（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN图标
（2）进入ZEN界面，弹出对话框：
“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、——分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。
（3）软件界面：
1 功能界面切换：、图像处理、维护功能界面切换：扫描取图（扫描取图（Acquisition）、图像处理（图像处理（Processing）、维护（维护（Maintain） （注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）专业工程师使用）
2 动作按钮；；4 工具详细界面；动作按钮；3 工具组（工具组（多维扫描控制）多维扫描控制）工具详细界面；5 状态栏；状态栏；6 视窗切换按钮；视窗切换按钮； 7 图像切换按钮；图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；处理区域；10 视窗中图像处理模块
动作按钮：动作按钮：
Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程（1组图片，如XYZ、XYT等）。 ——
Stop ——暂停——/结束扫描。
New ——建立一个新图像扫描窗口/文档。 ——
激光连接状况检查激光连接状况检查
眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换（： 光路切换（ZEN软件界面右上角）软件界面右上角）
Ocular ——通过观察筒用眼睛观察。（激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。） Camera ——光路切换至相机。 ——LSM ——共聚焦扫描成像光路。 ——
显微镜设置：显微镜设置：
“Ocular”——> “Light Path”——>
点击物镜图标，点击物镜图标，选择物镜——选择物镜——> 样品聚焦。样品聚焦。
透射光控制（透射光控制（Transmitted Light Control） 反射光光闸控制（反射光光闸控制（Reflected Light Shutter） 荧光激发块选择（荧光激发块选择（Reflector）
共聚焦LSM扫描设置
点击“（ZEN软件界面右上角），系统切换至共聚焦扫描光路：点击“LSM”软件界面右上角）系统切换至共聚焦扫描光路：
光路设置：光路设置：
Smart Setup —— 自动预设光路 选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法， 应用“Apply”。
（注：Fastest为最快速扫描，多条激光谱线同时扫描。Best signal为最佳信号扫描，多条激光谱线顺序扫描。Best compromise为兼顾速度与信号的折中式扫描。）
扫描图像参数设置：扫描图像参数设置：
每个通道的精细调节：每个通道的精细调节： 包括：包括：
（1）Pinhole的调节（的调节（一般设为1AU。该值越大，该值越大，则信号越强，则信号越强，但共聚焦图像效果会降低。但共聚焦图像效果会降低。原则上，原则上，在保证图像质量的前提下，； 在保证图像质量的前提下，该值越接近于1AU越好）越好）
（2）Master Gain的调节（的调节（增大则信号和噪音都增强增大则信号和噪音都增强，减小则信号和噪音均减小。减小则信号和噪音均减小。原则上，原则上，在保证图像质量的前提下，； 像质量的前提下，Gain值越小越好）值越小越好）
（3）Digital Offset的调节（的调节（可扣除背景噪音，可扣除背景噪音，但标本信号也但标本信号也有一定程度的扣除。有一定程度的扣除。原则上，原则上，在保证图像质量的前提下，； 像质量的前提下，Digital Offset值越接近于0越好）越好）
（4）Digital Gain的调节（的调节（增大则信号和噪音都增强，增大则信号和噪音都增强，减小则信号和噪音均减小。减小则信号和噪音均减小。原则上，原则上，在保证图像质量的前提下，像质量的前提下，Gain值越接近于1.0~1.2越好）越好）；
（5）另外，另外，对于每个通道，对于每个通道，需要灵活调节激光的强度（需要灵活调节激光的强度（激光强度越高，激光强度越高，则信号越强，则信号越强，但噪音也相应增强，同时标本更容易被漂白或淬灭。） 同时标本更容易被漂白或淬灭。原则上，原则上，在保证图像质量的前提下，在保证图像质量的前提下，激光强度越低越好。激光强度越低越好。
选择
如果预览图像的效果可以，如果预览图像的效果可以，则先“则先“Stop”即可完成图像的扫描。即可完成图像的扫描。
，再点击“再点击“Single”
或“Start”
可连续扫描、 可连续扫描、一边预览图像效果、一边预览图像效果、一边精细调节一边精细调节各个通道的扫描参数精细调节各个通道的扫描参数。各个通道的扫描参数。
图像的保存：图像的保存：
三种方法：三种方法：
（1）“File”菜单下，“Save”菜单下，或者“。 或者“Save AS”（2）点击右下角按钮（3）点击工具栏按钮
（如图所示）如图所示）
另外，，也可将图像以其它格式输出。另外，通过“通过“File”菜单下的“菜单下的“Export”也可将图像以其它格式输出。
。 。
2.3 显微镜的触摸屏控制显微镜的触摸屏控制
显微镜可由TFT液晶触摸屏进行控制：
由触摸屏“Home/主页”进入“Control/显微镜控制”界面，
TFT触摸屏控制 直观、直观、便捷。便捷。
触摸屏常用控制界面：触摸屏常用控制界面：
触摸控制，触摸控制，可将光路切换至“可将光路切换至“Eyepiece”
目镜观察筒，目镜观察筒，或者将光路切换至左侧共聚或者将光路切换至左侧共聚焦光路“，或者将光路切换至焦光路“Sideport L”前侧“前侧“Frontport”相机。相机。 Light path光路设置 Reflector荧光激发块控制荧光激发块控制 荧光观察时，荧光观察时，需要选择相应的荧光激发块
（或者激发波长、或者激发波长、发射波长相近的荧光激发块）近的荧光激发块） Objectives物镜控制
TL透射光光闸 RL反射光光闸
2.4 关机顺序：关机顺序：
（1）关闭软件：，退出共聚焦软件ZEN。 关闭软件：主菜单“主菜单“File”——>“Exit”（2）关闭主电脑关闭主电脑操作系统主电脑操作系统、操作系统、显示器电源。显示器电源。 （3）关闭 [荧光灯电源荧光灯电源 ]。
（4）关闭 [扫描载物台电源] 、[显微镜系统电源]。 （5）关闭Ar激光器：激光器：
先将 [扳钮] 从 “Laser run” 扳到 “Standby” 状态；状态； 再将 [钥匙] 逆时针从逆时针从“—”旋转到“O”状态；状态； 等待约8-10分钟、）， 分钟、激光器风扇停止转动激光器风扇停止转动后风扇停止转动后（切记！切记！将 主开关 按钮按到。 按钮按到“按到“OFF”
（6）如果使用了 [CO2培养系统] ，则关闭其电源。则关闭其电源。 （7）扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“OFF”
电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“OFF” 主开关 [ MAIN SWITCH ]“OFF”
（8）等 [灯箱] 充分冷却后，充分冷却后，再放防尘罩。再放防尘罩。
（9）如果长时间（如果长时间（>1 day）不使用，不使用，则关闭稳压电源、则关闭稳压电源、墙上总电源。墙上总电源。
3 系统的维护 主要注意事项如下：
（1）打开稳压电源时，应等待2分钟（电压稳定）后，再开其它开关。 （2）严格遵守[激光器]的开、关流程（详见“2.1 开机顺序”）。
（3）如果使用过[油镜]，或者物镜表面较脏，则需用[擦镜纸]擦干净物镜的前表
面（清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液，混合比例：无水乙醇30%、无水乙醚70%）。
（4）不使用荧光时，不打开[荧光灯]。避免频繁开/关荧光灯。 （5）必须等灯箱充分冷却后，再小心地盖上[防尘罩]。 （6）显微镜可由[TFT触摸屏]控制，使用触摸屏时注意：
①手指保持清洁、干燥状态，并且为了保证他人使用安全，触摸时严禁配戴有可能接触污染物或危险样品的手套； ②触摸屏已足够灵敏，不要大力按压触摸屏； ③不要旋转、插拔触摸屏。
（7）刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录，实验前应准备好刻录光盘。
切记：切记：为了防止计算机病毒，为了防止计算机病毒，严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或硬动硬盘或者上网！！！ 者上网！
（8）未经授权，严禁自行安装任何软件！！！
（9）实验室温度应保持在22℃±2℃，湿度40%-60%。 （10）避免空调直接对着显微镜吹风。
（11）整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁。
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