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酶联免疫吸附法检测梅毒抗体假阳性原因分析

来源:个人技术集锦
中国中医药咨讯 ・2010年7月上第2卷第13期 July 2010 Vo1.2 No.13 88・ Journal of China Traditional Chinese Medicine Information 酶联免疫吸附法检测梅毒抗体假阳性原因分析 王秀华 (尚志市疾病预防控制中心,黑龙江【关键词】酶联免疫吸附测定;梅毒血清诊断;假阳性反应 尚志,150600) 梅毒是苍白螺旋体引起的一种性传播疾病.梅毒血清 学检测一直是梅毒实验诊断的主要方法,但也存在假阳性 假阳性。 3操作因素 的问题。近年来在我国的发病率呈逐年上升的趋势,对梅 毒作出快速、准确的诊断是非常重要的。目前临床上梅毒 的诊断主要是根据临床症状和血清学检查,酶联免疫吸附 法fEHSA)对IgG、IgM都有很好的检测能力[1],因其灵敏 度高、价格低廉、操作方便、结果客观在国内广泛使用。但 在工作中遇到的最大问题是出现假阳性的问题,为避免假 阳性结果的出现,现将产生假阳性的原因作以总结如下: 1机体的内在因素 1.1年龄因素有些老年人梅毒检测结果阳性,而无临床 症状,也无发病史和疾病接触 。ELISA试剂盒主要是选 自梅毒螺旋体外膜的脂蛋白47 KD、17 KD、15 KD为分子 抗原,用基因重组表达和BOC氨基固相法得到多肽抗 原,为使小分子多肽有较好的吸附性,再用人血清白蛋白 与之连接,而且合成后的多肽一般不做提纯,直接作为试 剂抗原使用。由于抗原不纯和使用了人血清白蛋白,增加 了意外假阳性抗原位点的可能。老年人容易出现免疫功能 的异常,易产生一些针对连接用的白蛋白的抗体或一些异 常蛋白质而干扰了检测的结果出现假阳性。 1.2 疾病因素某些疾病例如系统性红斑狼疮、丙型肝 炎、艾滋病、麻风、Lyme病、肝硬化、淋巴肉瘤、结肠癌、生殖 器疱疹、糖尿病、海洛因成瘾及妊娠等可出现检测结果假 阳性。本文发现白血病、冠心病、脑供血不足等内科慢性病 亦引起出现假阳性,提示患有难以治愈的慢性疾病患者长 期用药可使机体免疫机能发生改变,出现抗原一抗体交叉 反应,干扰试验结果,导致出现假阳性。 2标本因素 2.1标本处理不完全血液抽取后未完全凝固即离心分 离血清,纤维蛋白未完全析出,容易在板孔中形成纤维蛋 白薄膜或絮状物,造成洗板时清洗不干净,酶残留在相应 的板孑L中,使吸光度值偏高,造成假的阳性结果。 2.2标本溶血标本溶血时细胞内液的各种活性酶及具 有酶样活性的物质可与底物非特异性结合;Hb具有类过 氧化物酶的活性,其效应与辣根过氧化物酶类似,溶血后 反应孔非特异性吸附Hb,洗涤时不易洗去,催化底物产生 一定程度的显色,使本底吸光度值升高而造成假阳性[3]。 2.3标本被细菌污染标本采集后及分离血清时应避免 细菌污染,因一些细菌体内可能含有内源性辣根过氧化物 酶,会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰, 造成弱的假阳性结果。 2.4标本保存不当 标本在冰箱存放过久,易使细菌繁 殖,会影响结果的测定;存放过久的标本,血清中IgG可聚 合成多聚体,AFP可形成二聚体,导致本底过深,造成弱的 洗涤过程中有溢出现象,使强阳性标本的反应液污 染临近的阴性孑L而出现假阳性;洗涤时间短或洗涤次数 少,使洗涤不充分,板孔中酶试剂残留而出现假阳性;底物 液反复使用被污染或受到强光照射时间过长也会出现假 阳性;判读结果或登记、发报告时错位,出现错报的假阳性 结果。 4仪器因素 4.1 酶标仪使用的影响酶标仪是ELISA试验所必须的 仪器,它是对反应孔进行垂直比色,当反应板底部有污染 时,容易出现吸光度值升高,导致假阳性的结果。 4.2拖带阳性全自动加样仪加样时不是一份标本一个 加样头,虽然仪器能对加样针内壁和外壁自动清洗,但遇 到高浓度抗体标本时,由于加样针清洗程度不够,同一加 样针拖带污染导致其后一孔甚至多孔出现假阳性的现象。 5方法学因素 5.1 灰带区现象梅毒ELISA测定是一种定性试验,须 在阳性与阴性之间有一条明确的分界线,即阳性判定值 (Cut off),通常将以Cut off值左右的一定范围定为灰带 区。测定结果在灰带区的标本易出现假阳性,应通过确认 试验或跟踪检测来确定是阳性还是阴性。 5.2空白对照的影响用单波长法测定ELISA结果时,设 置空白对照对测定结果的准确性有很大的影响。由于反应 孔有划痕,可使测定A值升高,如果不设空白对照,判读结 果时可引起假阳性。 综上所述,在工作中出现可疑的阳性标本时,应仔细 查找干扰因素,并重抽血复查,如果还不能确定的标本应 建议其定期随访,用PCR检测梅毒DNA,必要时做确证试 验来确定结果,避免假阳性报告的发出。 参考文献 [1]傅均星,周潇,曾铁兵.基因重组抗原ELISA法在梅毒螺旋体 抗体检测中的评价[N].南华大学学报(医学版),2004,32(3):305 306,3 14. [2l周毅.老年梅毒螺旋体感染5l例调查与分析[J].中国现代医 药杂志,2004,6(5):7. [3]彭明喜.酶联免疫吸附试验检测梅毒抗体假阳性的原因分析 [J].现代实用医学杂志,2006,18(2):127 128 

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