酶联免疫吸附法检测梅毒抗体假阳性原因分析

中国中医药咨讯　・２０１０年７月上第２卷第１３期　Ｊｕｌｙ　２０１０　Ｖｏ１．２　Ｎｏ．１３　８８・　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　酶联免疫吸附法检测梅毒抗体假阳性原因分析　王秀华　（尚志市疾病预防控制中心，黑龙江【关键词】酶联免疫吸附测定；梅毒血清诊断；假阳性反应　尚志，１５０６００）　梅毒是苍白螺旋体引起的一种性传播疾病．梅毒血清　学检测一直是梅毒实验诊断的主要方法，但也存在假阳性　假阳性。　３操作因素　的问题。近年来在我国的发病率呈逐年上升的趋势，对梅　毒作出快速、准确的诊断是非常重要的。目前临床上梅毒　的诊断主要是根据临床症状和血清学检查，酶联免疫吸附　法ｆＥＨＳＡ）对ＩｇＧ、ＩｇＭ都有很好的检测能力［１］，因其灵敏　度高、价格低廉、操作方便、结果客观在国内广泛使用。但　在工作中遇到的最大问题是出现假阳性的问题，为避免假　阳性结果的出现，现将产生假阳性的原因作以总结如下：　１机体的内在因素　１．１年龄因素有些老年人梅毒检测结果阳性，而无临床　症状，也无发病史和疾病接触　。ＥＬＩＳＡ试剂盒主要是选　自梅毒螺旋体外膜的脂蛋白４７　ＫＤ、１７　ＫＤ、１５　ＫＤ为分子　抗原，用基因重组表达和ＢＯＣ氨基固相法得到多肽抗　原，为使小分子多肽有较好的吸附性，再用人血清白蛋白　与之连接，而且合成后的多肽一般不做提纯，直接作为试　剂抗原使用。由于抗原不纯和使用了人血清白蛋白，增加　了意外假阳性抗原位点的可能。老年人容易出现免疫功能　的异常，易产生一些针对连接用的白蛋白的抗体或一些异　常蛋白质而干扰了检测的结果出现假阳性。　１．２　疾病因素某些疾病例如系统性红斑狼疮、丙型肝　炎、艾滋病、麻风、Ｌｙｍｅ病、肝硬化、淋巴肉瘤、结肠癌、生殖　器疱疹、糖尿病、海洛因成瘾及妊娠等可出现检测结果假　阳性。本文发现白血病、冠心病、脑供血不足等内科慢性病　亦引起出现假阳性，提示患有难以治愈的慢性疾病患者长　期用药可使机体免疫机能发生改变，出现抗原一抗体交叉　反应，干扰试验结果，导致出现假阳性。　２标本因素　２．１标本处理不完全血液抽取后未完全凝固即离心分　离血清，纤维蛋白未完全析出，容易在板孔中形成纤维蛋　白薄膜或絮状物，造成洗板时清洗不干净，酶残留在相应　的板孑Ｌ中，使吸光度值偏高，造成假的阳性结果。　２．２标本溶血标本溶血时细胞内液的各种活性酶及具　有酶样活性的物质可与底物非特异性结合；Ｈｂ具有类过　氧化物酶的活性，其效应与辣根过氧化物酶类似，溶血后　反应孔非特异性吸附Ｈｂ，洗涤时不易洗去，催化底物产生　一定程度的显色，使本底吸光度值升高而造成假阳性［３］。　２．３标本被细菌污染标本采集后及分离血清时应避免　细菌污染，因一些细菌体内可能含有内源性辣根过氧化物　酶，会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰，　造成弱的假阳性结果。　２．４标本保存不当　标本在冰箱存放过久，易使细菌繁　殖，会影响结果的测定；存放过久的标本，血清中ＩｇＧ可聚　合成多聚体，ＡＦＰ可形成二聚体，导致本底过深，造成弱的　洗涤过程中有溢出现象，使强阳性标本的反应液污　染临近的阴性孑Ｌ而出现假阳性；洗涤时间短或洗涤次数　少，使洗涤不充分，板孔中酶试剂残留而出现假阳性；底物　液反复使用被污染或受到强光照射时间过长也会出现假　阳性；判读结果或登记、发报告时错位，出现错报的假阳性　结果。　４仪器因素　４．１　酶标仪使用的影响酶标仪是ＥＬＩＳＡ试验所必须的　仪器，它是对反应孔进行垂直比色，当反应板底部有污染　时，容易出现吸光度值升高，导致假阳性的结果。　４．２拖带阳性全自动加样仪加样时不是一份标本一个　加样头，虽然仪器能对加样针内壁和外壁自动清洗，但遇　到高浓度抗体标本时，由于加样针清洗程度不够，同一加　样针拖带污染导致其后一孔甚至多孔出现假阳性的现象。　５方法学因素　５．１　灰带区现象梅毒ＥＬＩＳＡ测定是一种定性试验，须　在阳性与阴性之间有一条明确的分界线，即阳性判定值　（Ｃｕｔ　ｏｆｆ），通常将以Ｃｕｔ　ｏｆｆ值左右的一定范围定为灰带　区。测定结果在灰带区的标本易出现假阳性，应通过确认　试验或跟踪检测来确定是阳性还是阴性。　５．２空白对照的影响用单波长法测定ＥＬＩＳＡ结果时，设　置空白对照对测定结果的准确性有很大的影响。由于反应　孔有划痕，可使测定Ａ值升高，如果不设空白对照，判读结　果时可引起假阳性。　综上所述，在工作中出现可疑的阳性标本时，应仔细　查找干扰因素，并重抽血复查，如果还不能确定的标本应　建议其定期随访，用ＰＣＲ检测梅毒ＤＮＡ，必要时做确证试　验来确定结果，避免假阳性报告的发出。　参考文献　［１］傅均星，周潇，曾铁兵．基因重组抗原ＥＬＩＳＡ法在梅毒螺旋体　抗体检测中的评价［Ｎ］．南华大学学报（医学版），２００４，３２（３）：３０５　３０６，３　１４．　［２ｌ周毅．老年梅毒螺旋体感染５ｌ例调查与分析［Ｊ］．中国现代医　药杂志，２００４，６（５）：７．　［３］彭明喜．酶联免疫吸附试验检测梅毒抗体假阳性的原因分析　［Ｊ］．现代实用医学杂志，２００６，１８（２）：１２７　１２８