・药物鉴定・ 中Ｉ 茜 Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ２０Ｉ４年３月２０¨第２３卷第６期 Ｖｏ１．２３，Ｎ０．６，Ｍａｒｃｈ ２０，２０ｌ４ Ｄｒｕｇ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 高效液相色谱法测定安神养血口服液中芒柄花素含量 陈业光，黄梦娴 （广西医科大学制药厂，广西南宁 ５３００２１） 摘要：目的建立测定安神齐血口服液中芒柄花素含量的高效液相色谱法． 方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ，ｓ柱 （２５０ ｎｌｎｌ ｘ ４．６ ｎｌＨｌ，５¨Ｉｎ），流动相为乙腈一水（４５：５５），流速为１．０ ｍＩ ／ｒａｉｎ，检测波长为２５０ ｎｌｎ。结果芒柄花素进样量在０．０１４ １６～ ０．１４ｌ ６ ｔｘｇ范围内与峰面积呈良好线性关系，ｒ＝０．９９９ ９（ｎ＝５），平均加样回收率为９９．３４％，ＲＳＤ为０．３６％（Ｈ＝５）。结论该方法准 确、灵敏、重现性好，可作为安神养血口服液中芒柄花素的定量分析方法。 关键词：反相高效液相色谱法；安神养血口服液；芒柄花素；含量测定 中图分类号：Ｒ２８４．１；Ｒ２８６．０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００６—４９３１（２０１４）０６—００３８—０２ 日前安神养血门服液质量标准缺乏对鸡血藤的质量控制。为完簖 和提高质量控制标准，本研究中建立ｒ测定安神养血口服液中 柄花素含量的高效液相色谱法。现报道如卜。 １ 仪器与试药 Ｗａｔｅｒｓ ５１５型高效液相色谱仪（美 Ｗａｔｅｒｓ公州）；Ｎ２０００ 安神养血口服液是南制何首乌、鸡血藤、 乌藤等７味中药 经提取精制 成，具有养血安神功效，临Ｊ未用于治疗肝血不足引 起的失眠、健忘等症。方中的鸡血藤丰要成分为芒柄花素，为强壮 件之补血药，适用于贫血性神经麻痹症及妇女月经不调、经闭等， 有活血镇痛之效 Ｉ。方中鸡血藤与制何首乌同为补血养血之药， 液，分别制成１０，２０，４０，８０，１６０ Ｉｘｇ／ｍＬ的溶液，精密吸取１０ ｔ．ｚＬ，注 入色谱仪进行分析。以盐酸麻黄碱峰面积值为纵 标、质量浓度 为横坐标绘制标准曲线，得回归方程ｌ，＝２９ ９８９ ６００ 一４３ １７２， ｒ＝０．９９９ ９（／Ｚ＝５）。结果表明，盐酸麻黄碱质量浓度在０．０１～ ０．３２ ｇ／Ｌ范围内与峰面积之问旱良好线性关系。 精密度试验：精密吸取同一对照品溶液１０ Ｌ，重复进样６ 次，记录峰 积。结果盐酸麻黄碱峰面积ＲＳＤ为０．１ ３％（／／，＝６）， 表２ 样品中盐酸麻黄碱含量测定 表明仪器精密度良好。 稳定性试验：精密吸取旧・供试品溶液１０ 【 ，每隔４ ｈ进 样，记录峰 积值。结果盐酸麻黄碱峰面积的ＲＳＤ为０．１７％，表 明供试品溶液在２４ ｈ内稳定。 ０．０９２％磷酸溶液（１．５：９８．５）Ｉ 、乙腈一０．０２５ ｎｌｏｌ／１ 磷酸溶液 （１０：９０）Ｉ：Ｉ、乙睛一０．１％磷酸（１０：９０）【３Ｉ、０．０２ ｍ０ｌ／１ 磷酸二氰 钾溶液（含０．２％二乙胺，用磷酸凋ｐＨ伞２．７）一乙腈（９６：４） ， 调节流动相比例，结果以乙腈一含０．１％二乙胺的０．１％磷酸溶 液（３：９７）为流动相的件效最高。 小儿解表止咳口服液为复方制剂，成分复杂，分离难度大 在 本试验条件卜，盐酸麻黄碱分离效果 ，达到基线分离，¨ 在 ２０ ａｒｉｎ内即＿Ｊ『分离完毕，无 他成分ｌ：扰，仃利ｒ盐酸麻黄碱 测定 夺，『法 彳丁简便、准确，重现性 的特点， 作为小儿觯 丧ｌ卜咳ｒ１服液的质麓控制检测方法 ． 重复性试验：精密鼍取同一样品（批号为１１１１Ｏ１）５．１１ ，共６ 份，按供试品溶液制备 法处理后测定 结果盐酸麻黄碱含量的 ＲＳＤ为１．５％（，一６），表明方法苇复 良好。 加样 收试验：精密量取已知含｛ 的样品（批号为１１１１０１） ２．５ ｍＬ，共９份，精确加入盐酸麻黄碱对照牖遁蕈，按供试品制备 方法处理后，测定盐酸麻黄碱含 ，汁算 收率。结果见表ｌ。 表Ｉ 盐酸麻黄碱加样回收试验结果（ｎ＝９） 作者简介：马玉，女，讲师，主要从事中药及天然药物化学成 分和质量标准化研究，（电子信箱）７７４９４３０６＠ｑｑ．ＣＯＩｌｌ；张俊侠， 女，副教授，主要从事中药及天然药物的成分和质量研究，本文通 讯作者，（电子信箱）８２４３８０３１３＠ｑｑ．ｃｏｒｎ 参考文献： Ｉ Ｉ ｌ国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部） Ｍ Ｉ北京：中国医药 科技出版社，２０ｌ０：３００． ２．４ 样品含量测定 １ ２１郭德铭，蒋 琼，陈 波．ＨＰＩ Ｃ测定小儿化痰止咳颗粒中的盐酸 麻黄碱ｌ Ｊ１．华西药学杂志，２００８，２３（５）：５９８—５９９． 取６批样 ，按供试品溶液的制备方法制备，每批平行制备３ 次，测定盐酸麻黄碱的含量。结果样品中盐酸麻黄碱含量的平均值 【３ｌ李文烈，姬雪礼，曹海芳，等．高效液相色谱法测定加味定喘片中盐 酸麻黄碱含量ＩＪ１．中国药业，２０１３，２２（６）：７０—７１． 为０．８０ ｍｇ，即每支样品含８．０ ｍｇ盐酸麻黄碱。测定结果见表２ ３ 讨论 Ｉ４ｌ魏萍，张亚锋，王苑桃．高效液相色谱法测定定喘止咳胶裳中盐酸麻 黄碱含量ｌＪ】．中国药业，２０ｌ ２，２ｌ（１７）：２２—２３． 流动相选择：甲醇一含０．０４％二乙胺和０．０２％二正丁胺的 （收稿日期：２０１３—０５—２２：修回日期：２０１３—１０—２２） ２０１４年３月２０口第２３卷第６期 Ｖｏｔ．２３，Ｎｏ．６，Ｍａｒｃｈ ２０，２０１４ 中ｃ虱茜 Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ・药物鉴定・ Ｄｒｕｇ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；ＢＰ２１１Ｄ型电子天 平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；ＵＶ一２１００型双光束紫外一 可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）。芒柄花素对照品（中 圜药品生物制品检定所，供含量测定用，批号１１１７０３—２００５０１）； 安神养血口服液（广西医科大学制药厂，批号分别为２０１００３０２， ２０１１０５０１，２０１２０２０１，规格为每瓶３０ ｍＬ）；乙腈为色谱纯，甲醇为 分析纯。 ２ 方法与结果 ２．１ 色谱条件 色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ Ｃ． 柱（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５ ｍ）；流动相为 乙腈一水（４５：５５）；流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２５０ ｎｍ；ＡＵＦＳ １．０００；进样量：１０ ；柱温：２５℃。理论板数以芒柄花素计均不 低于４ ０００。 ２．２ 溶液制备 精密称取芒柄花素对照品７．０８ ｍｇ，加甲醇溶解定容至１００ ｍＬ， 摇匀，得对照品贮备液（质量浓度为７０．８ Ｉｘｇ／ｍＬ）。精密取对照品 贮备液，加甲醇稀释制成含芒柄花素７．０８￣ｇ／ｍＬ的对照品溶 液。取安神养血口服液５ ｍＬ，加７０％甲醇定容至２５ ｍＬ，滤过，取 滤液，即得供试品溶液。除鸡血藤外，按安神养血口服液的处方比 例及制备工艺制成缺鸡血藤的阴性对照品，按供试品溶液制备方 法操作，制得阴性对照品溶液。∞∞加∞∞∞∞加Ｏ ∞∞加∞∞∞∞加０ ２．３方法学考察 系统适用性试验：取供试品溶液及对照品溶液，按拟订色谱 条件进行色谱分析。结果芒柄花素出峰时间为６．７６ ｍｉｎ，峰形尖 锐、对称、陡峭，无杂质峰干扰，见图１。 ＝Ｊ 线性关系考察：精密吸取芒柄花素对照品贮备溶液，制成含芒 柄花素质量浓度分别为１．４１６，４．２４８，７．０８，１０．６２，１４．１６ ｔ￣ｇ／ｍＬ 的系列标准溶液。分别进样１０ ，按拟订色谱条件测定峰面积， 以进样量（ ）为横坐标、峰面积（ｙ）为纵坐标进行线性回归，得回 ＝＝二 归方程Ｙ＝２５２ ４２３．２Ｘ＋５１６．６，ｒ＝０．９９９ ９（ｎ＝５）。结果表明， 芒柄花素进样量在０．０１４ １６～０．１４１ ６ Ｉｘｇ范围内与峰面积呈良 好线性关系。 精密度试验：精密吸取同一对照品溶液ｌＯ Ｌ，连续进样１０ 次。结果的ＲＳＤ为０．８７％，表明仪器精密度良好。 重复性试验：精密取同一批（批号为２０１１０５０１）样品５份，按 拟订方法测定。结果芒柄花素的含量为５．０ ｔｚｇ／ｍＬ，ＲＳＤ为 １．２８％（ｎ：５），表明方法重复性良好。 稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液１０ ＩｘＬ，分别于０，６， １２ ｈ时进样，测定其峰面积。结果的ＲＳＤ为０．９８％，表明供试品 溶液在１２ ｈ内稳定。 加样回收试验：精密取已知含量的样品（批号为２０１１０５０１） ５ ｍＬ，分别精密加入对照品溶液（７０．８￣ｇ／ｎｌＬ）各１ ｎｉＬ，共５份， 依法制备待测溶液，按拟订色谱条件测定含量，计算回收率。结果 见表１。 ２ ４ 样品含量测定 取样品３批，按拟订色谱条件操作，测定含量，结果批号为 ２０１００３０２，２０１ １０５０１，２０１２０２０１的３批样品中芒柄花素含量分别 为４．５，５．０，３．８ Ｉ￣ｇ／ｍＬ。 ３ 讨论 检测波长选择：取芒柄花素对照品溶液，于２００—４００ ｎｍ波 长范围内扫描，结果芒柄花素在２５０ ｎｉｌ１波长处有最大吸收，故选 择检测波长为２５０ ｎｍ －４１。 Ｕ ∞∞加∞∞∞∞加Ｏ ／ ¨ｖ ｍ ０ ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ，８ Ｃ Ｂ １芒柄花素 Ａ．对照品溶液 Ｂ．供试品溶液 Ｃ．阴性对照品溶液 图１ 高效液相色谱图 表ｌ 芒柄花素加样回收试验结果（ｎ＝５） 流动相选择：可选用甲醇与水的混合物或乙睛水作为流动 相Ｉ ～Ｉ。本试验发现，用适当比例的乙腈与水的混合物，更容易得 到对称的峰形。从样品含量测定结果分析，３批样品的芒柄花素 含量差别较大，可能与鸡血藤产地、采收季节及提取工艺有很大 关系。文献［２—４】报道了鸡血藤中芒柄花素的不同提取方法，建 议应用本试验所建立方法控制安神养血口服液的质量时，应对生 产中的提取工艺作进一步的研究。 参考文献： ［１】江苏新医学院．中药大辞典（上册）ｆＭ】．上海：上海人民出版社， １９７７：Ｉ ２０６． ｆ２】钟小群，李艳，王丽静，等．正交试验优选丰城鸡血藤的提取工艺 研究【Ｊ Ｊ．中草药，２００９，４０（７）：１ ０６６一ｌ ０６８． 【３ｉ杨遁嘉，霍 昕，刘文炜，等．鸡血藤颗粒质量标准的研究【Ｊ１．中成 药，２００９，３１（１）：１４４—１４６． 『４ｌ刘加元，周 伟．鸡血藤片质量控制研究ｌ Ｊ１．中外医疗，２０１１（１５）： ｌ５Ｏ—ｌ５１． （收稿日期：２０１３—０８—２２） Ｏ １２１Ｊ 一４ ５ ６ 一 ７ ８