８０ 中国兽医杂志２０１８年（第５４卷）第３期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 小鼠生长迟缓模型的建立及指标评价 朱玉欣 ，马维超 ，范永超 ，冯 波 ，张倩 ，董虹 ，穆祥 ［１．北京农学院动物科技学院北京农学院兽医学（中医药）北京市重点实验室，北京昌平１０２２０６； ２．中国农业大学动物医学院，北京海淀１００１９３］ 摘要：试验旨在通过灌服细菌上清、破碎液建立小鼠生长迟缓模型，为开发具有促生长作用的饲料添加剂提供动物模 型。培养大肠杆菌Ｋ９９，离心收集培养上清，取部分细菌悬液进行超声破碎；试验小鼠随机分为４组（对照组、上清组、破碎 组、悬液组），对照组灌服０．２ ｍＬ生理盐水，另外３组分别灌服等体积细菌培养上清、破碎液及悬液，每日１次，连续灌服１５ ｄ；观察小鼠精神状态，记录小鼠体重，测定各脏器指数，采用ＥＬＩＳＡ方法检测各组小鼠血清ＩＬ一６和ＴＮＦ一 的水平。与空 白组相比，其余３组小鼠日增重及脾脏指数均显著降低；肺脏指数显著升高；肝脏、胸腺指数及血清ＩＬ一６和ＴＮＦ—ｄ的水平 无显著变化。通过灌服大肠杆菌Ｋ９９培养上清、破碎液及悬液成功建立了小鼠生长迟缓模型，能够为开发具有细菌毒素灭 活作用的中药添加剂提供动物模型。 ’ 关键词：大肠杆菌Ｋ９９；细菌毒素；小鼠；生长迟缓模型；指标评价 中图分类号：Ｑ９５—３３１ 文献标志码：Ａ 文章编号：０５２９—６００５（２０１８）０３—００８０—０５ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｄｅｘｅｓｅｖａｌｕａｔｉＯｎ ＺＨＵ Ｙｕ—ｘｉｎ ，ＭＡ Ｗｅｉ．ｃｈａｏ ，ＦＡＮ Ｙｏｎｇ．ｃｈａｏ ，ＦＥＮＧ Ｂｏ ，ＺＨＡＮＧ Ｑｉａｎ ，ＤＯＮＧ Ｈｏｎｇ ，ＭＵ Ｘｉａｎｇ （１．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｓｔｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｈｕｒｅ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０２２０６，Ｃｈｉｎａ；２ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｉｎ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１９３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ａｉｍｅｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ ｂｙ ｔａｋｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ ａｎｄ ｂｒｏｋｅｎ ｔｉｑ－ ｕｉｄ，ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ—ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ａｎｉｍａｌ ｆｅｅｄ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｅｓｃｈｅ— ｉｒｅｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ９９ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｔｏ ｃｏｌｌｅｃｔ ｃｕｈｕｒｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ａｎｄ ｔｏ ｍａｋｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ｂｒｏｋｅｎ ｌｉｑｕｉｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｕｈｒａｓｏｕｉｃａｔｉｏｎ．Ｂａｌｂ／ｃ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｆｏｕｒ ｇｒｏｕｐｓ（ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｓｎｐｅｒｎａｔａｎｔ ｇｒｏｕｐ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｃｒｕｓｈｉｎｇ ｇｒｏｕｐ，ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｇｒｏｕｐ）．Ｍｉｃｅ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｆｅｄ ｗｉｔｈ ０．２ｍＬ ｎｏｒｍａｌ ｓａｌｉｎｅ ｏｎｃｅ ａ ｄａｙ ｆｏｒ １５ ｄａｙｓ，ａｎｄ ｍｉｃｅ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｑｕａｌ—ｖｏｌｕｍｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ，ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｒｏｋｅｎ ｌｉｑｕｉｄ ａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ．Ｔｈｅ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｅａｃｈ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎ— ｄｅｘｅｓ ｏｆ ｖｉｓｃｅｒａｌ ｏｒｇａｎｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ｓｃａｌｅｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＩＬ一６ ａｎｄ ＴＮＦ—ｏｄｎ ｓｅｎｌｍ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｂｏｔｈ ｄａｉｌｙ ｇａｉｎ ａｎｄ ｓｐｌｅｅｎ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｂｕｔ ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｉｎｄｅｘｓ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎｄｅｘ．ｔｈｅ ｔｈｙｍｕｓ ｉｎｄｅｘ ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＩＬ一６ ａｎｄ ＴＮＦ一仅 ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｃｈａｎｇｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｔｒａｄａｔｉｏｎ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｔａｋｉｎｇ ｂａｃ— ｔｅｒｉａｌ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ａｎｄ ｂｒｏｋｅｎ ｌｉｑｕｉｄ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｍａｙ ｐｒｏｖｉｄｅ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ——ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ａｎｉｍａｌ ｆｅｅｄ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ ｆｒｏｍ ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂｓ ｗｉｔｈ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｅｆｆｅｅｔ ｏｎ ｒｂａｅｔｅｒｉｌａ ｔｏｘｉｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ Ｋ９９；ｍｉｃｅ；ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｔｏｘｉｎ；ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｍｉｃｅ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ；ｉｎｄｅｘ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｍｕ Ｘｉａｎｇ 抗生素作为饲料添加剂具有促进机体生长的 品安全带来诸多问题，因此世界各国开始限制或禁 作用，但长期、大量地使用抗生素会给动物源性食 止抗生素在饲料中的使用，并开始研发新型促生长 饲料添加剂来逐步替代抗生素。目前，关于饲料添 收稿日期：２０１７－１２－０５ 加用抗生素促生长的机理尚不完全清楚。通过查 基金项目：“十三五”国家重点研发计划（２０１７ＹＦＤ０５０１５０１）； 阅文献及本团队前期研究，我们认为抗生素促生长 ２０１７年北京农学院学位与研究生教育改革与发展项目（５０７５２３１０１６／ 的机制可能是抑制了饲料在储藏过程中细菌的增 ００３）；“十二五”国家科技支撑计划（２０１４０３０５１—１０） 殖，进而减少细菌毒素的释放。反之，饲喂含有大 作者简介：朱玉欣（１９９１一），女，硕士生，研究方向为中兽医药 及疾病防控，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｕｙｕｘｉｎ２０８＠１６３．ｃｏｎ 量细菌或毒素的饲料会导致动物生长迟缓。因此， 通讯作者：穆祥，Ｅ—ｍａｉｌ：ｍｕｘｉａｎｇｌ１０９＠ｓｉｎａ．ＣＯＢ 本研究尝试通过灌服细菌悬液及细菌毒素的方式 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 建立小鼠生长迟缓模型，期望能够为研发具有细菌 毒素灭活作用的中药饲料添加剂提供动物模型。 １ 材料 １．１试验菌株及试验材料大肠杆菌Ｋ９９来自北 京农学院，兽医学（中医药）北京市重点实验室保 藏；Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ、Ｔｒｙｐｔｏｎｅ，均购自ＯＸＯＩＤ公司，批 号分别为ＬＰ００２１、ＬＰ００４２；ＮａＣ１，购自ＶＥＴＥＣ公司， 批号Ｖ９０００５８—５００Ｇ；麦康凯培养基，购自北京奥博 星生物技术有限责任公司，批号０２—００５Ａ；小鼠 ＩＬ一６试剂盒及ＴＮＦ—ｏ【试剂盒，均购自美国Ｒ＆Ｄ 公司；ＳＰＦ级ＢＡＬＢ／ｃ雄性小鼠，体重ｌ０—１２ ｇ，８Ｏ 只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司 ［ＳＣＸＫ（京）２０１６—００１１］。 １．２试验仪器生物安全柜（Ｔｈｅｒｍｏ公司）；电子 天平（上海天平仪器厂）；涡旋振荡仪（海门市其林 贝尔仪器制造有限公司）；精密ｐＨ计（ＳＡＮＹＯ公 司）；显微镜（ＯＬＹＭＰＵＳ公司）；细胞破碎仪（宁波新 芝生物科技股份有限公司）；电热恒温培养箱（上海 一恒科学仪器有限公司）；多功能酶标仪（美国 ＢＩＯＴＥＫ公司）；全温振荡培养箱（上海一恒科学仪 器有限公司）。 ２方法 ２．１ 大肠杆菌的培养及破碎将冻存的大肠杆菌 Ｋ９９室温融化后接种到５ ｍＬ ＬＢ培养基中，３７ ｏ【二， ２２０ ｒ／ｍｉｎ，培养２４ ｈ。将１００ ｔｘＬ此菌液接种到５ ｍＬ ＬＢ培养基中，培养１８ ｈ，划线接种到麦康凯平板 培养基上培养１８ ｈ，挑取状态良好的单菌落接种到 ＬＢ培养基中，进行增菌镜检。取纯化后的菌液１００ 接种到５ ｍＬ ＬＢ培养基中，共接ｌ８管，３７℃， ２２０ ｒ／ｍｉｎ，分别在１６、１８、２０、２２、２４ ｈ取３管，测定 生长曲线。根据生长曲线选择细菌破碎时间。将 大肠杆菌菌体悬液放入５０ ｍＬ小烧杯中，超声破碎 仪进行破碎，每间隔５ ｓ破碎５ Ｓ；每５ ｍｉｎ检测一次 菌体破碎液的ＤＤ鲫ａｍ值（６００ ｎｍ），破碎１０ ｍｉｎ 后，取少量液体进行革兰染色镜检，观察细菌状态。 ２．２动物分组将８０只ＳＰＦ级ＢＡＬＢ／ｃ雄性小鼠 分为４组，每组２Ｏ只。空白组、上清组、破碎组、悬 液组分别给予生理盐水、细菌上清、破碎液及细菌 悬液，０．２ ｍＬ／只，连续灌胃１５ ｄ。 ２．３小鼠生长性能分别在第１天和第１５天称量 体重及采食量，计算各组平均日增重、平均日采 食量。 ２．４炎性因子的测定对称量完体重的各组小鼠 中国兽医杂志２０１８年（第５４卷）第３期 ８１ 进行眼球采血，室温静置１ ｈ，３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心ｌ５ ｍｉｎ后收集血清，使用ＥＬＩＳＡ试剂盒测定ＩＬ一６、 ＴＮＦ一仅的水平。 ２．５脏器指数的测定 脱颈处死采血后的各组 小鼠，采集肺脏、肝脏、脾脏并称重，计算脏器指 数。计算公式为：脏器指数＝脏器重量（ｇ）／活体 重（ｇ）。 ２．６统计分析使用ＳＰＡＳＳ １７．０统计软件进行数 据处理，采用独立样本ｔ检验，试验数据均以平均 值－４－标准差表示，Ｐ≤０．０５为差异显著，Ｐ≤０．０１为 差异极显著。 ３结果 ３．１ 大肠杆菌Ｋ９９生长曲线 如图１所示，在培 养到１６～２０ ｈ细菌达到平台期，在２２ ｈ时活菌数达 到最大，之后随着时间的延长活菌数下降。 ２ｏ０ 寒 邑１５０ 赫 ｛赶 艟ｌｏ０ 时间，ｌｌ 图１ 细菌生长曲线 ３．２细菌破碎时间的筛选在１０ ｍｉｎ之内，随着 破碎时间的延长，细菌悬液吸光度不断下降，１０ ｍｉｎ 后，吸光度不再改变（图２）。取破碎１０ ｍｉｎ的菌液 镜检，细菌失去正常的形态，活性丧失（图３）。 破碎时间／ｍｉｎ 图２细菌破碎 ＾，Ｉ暑ｄ）懈如 １Ｉ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ８ 一１ＩＩ ｄ）伽如窨宁 ＬＬ 中国兽医杂志２０１８年（第５４卷）第３期 ８３ ６ ４ ２ Ｏ 异（Ｐ＞０．０５）（图７）。上清、破碎、悬液３组中小鼠 血清中ＴＮＦ—ｏ【较稳定，与空白组比均无差异（Ｐ＞ 细菌外毒素在生长繁殖的过程中分泌到菌体 外，但也有少数则存在菌体内，当细菌裂解后释放 ０．０５），无统计学意义（图８）。 ｌＯ ８ Ｏ 空自组 上清组 破碎组 悬液组 图７小鼠血清ＩＬ一６水平 空白组 上清组破碎组 悬液组 图８小鼠血清ＴＮＦ—ａ水平 ４讨论与结论 在感染过程中，为对抗机体的免疫系统，细菌 会在不同的时期表达不同的毒力因子，在这些毒力 因子中发挥主要作用的就是细菌毒素 Ｊ，包括外毒 素和内毒素。外毒素是大部分病原菌在代谢过程 中分泌到菌体外的蛋白质，细菌产生的外毒素对组 织的毒性作用有高度的选择性，各自引起特殊的临 床症状。内毒素是革兰阴性细菌细胞壁的组成成 分，其主要化学成分为脂多糖 ，不同病原菌所产 生的内毒素引起的症状大致相同，都能引起机体体 温升高、腹泻和出现出血性休克和其他症状 。 但利用毒素建立生长迟缓模型的研究鲜有报道，因 此，本试验研究尝试采用灌服细菌培养上清液及破 碎液的方法来建立小鼠生长迟缓模型。 到菌体外。内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工 方法破坏菌体后才释放出来。因此，只有破碎细菌 才能获得高浓度的细菌毒素。通过对Ｋ９９生长曲 线的测定可知，１６～２０ ｈ是该菌生长的平台期，２２ ｈ 时活菌数达到最大，此时，细菌毒素产生的速率最 大，２４ ｈ时，活菌数显著下降，其可说明在２４ ｈ时产 生的毒素是最多的，因此选择此时进行细菌破碎可 获得最大的毒素浓度。张帅 报道采用微波法、珠 磨法、超声波法、反复冻融法、石英砂研磨法分别对 嗜酸乳杆菌进行细胞破碎分离细菌毒素，结果表明 超声波破碎法细胞破碎效果最好。本试验采取超 声破碎的方法进行细菌破碎，随着超声时间的延 长，探头温度上升，易破坏细菌外毒素，因此我们 选择工作５ Ｓ，间隔５ Ｓ，而且将菌液放人冰上以维 持低温。随着破碎时间的延长，ＯＤ值成依赖性下 降，破碎１０ ｍｉｎ时，ＯＤ值达到最低，取菌液进行革 兰染色，菌体失去原有的形态，说明细菌已完全 破碎。 尽管细菌的外毒素和内毒素在结构性质和作 用机制上完全不同，但都能不同程度地对机体产生 严重损害。体重是衡量小鼠生长发育的一项重要 指标。本试验研究结果显示，细菌上清组日增重与 空白组相比显著下降；破碎组、悬液组日增重与空 白组相比极显著下降，其说明细菌毒素能够使小鼠 生长迟缓，模型建立成功。动物的脏器指数是重要 的生物学特性指标之一，其数值大小可以在一定程 度上反映机体的功能状态。前期有报道 表明，口 服呕吐毒素组和各联合毒素组小鼠增重显著低于 对照组（Ｐ＜０．０５）；呕吐毒素组、烟曲霉素Ｂ。组和各 联合毒素组小鼠脾脏和胸腺指数显著低于对照组 （尸＜０．０５）。细菌毒素可能会通过影响机体器官功 能状态，进而造成动物的生长迟缓。本试验结果发 现，细菌上清组、破碎组、悬液组对脾脏指数的影响 差异均显著。 内毒素可以激活在上皮细胞、树突状细胞、巨 噬细胞上的Ｔｏｌｌ样受体４，然后通过骨髓分化初级 反应基因８８（ＭｙＤ８８）依赖途径激活ＮＦ—ＫＢ，释放 ＩＬ一６、ＴＮＦ一 等炎症细胞因子 。ＩＬ一６可通过 诱导纤维蛋白原启动凝血因子，在肠道黏膜异常堆 积，使炎症反应不断加重 。ＴＮＦ一仅可在受损的 肠黏膜中大量表达，并且其病变范围越大、病变越 严重，ＴＮＦ— 水平越高¨。。。我们猜测，口服细菌毒 ８４ 中国兽医杂志２０１８年（第５４卷）第３期 素会导致肠黏膜发生炎症反应，进而影响生长性 能。因此，我们通过检测ＩＬ一６、ＴＮＦ一０【的水平来 验证口服细菌毒素是否会造成小鼠炎症反应。结 果表明，通过灌服细菌毒素的方式对大部分小鼠不 会引起炎性反应。此外，Ｄｕｔｃｈ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｏｃｃｕ— ｐａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ证实：口服ＬＰＳ对健康的人群只 会造成微弱的伤害 。因此，我们推测造成小鼠生 长迟缓的原因并不是毒素进入机体引起炎症反应 造成的。本研究中极少数小鼠血清ＩＬ一６水平升高 可能是个体肠道机能减退造成的。 近半个世纪以来，抗生素作为抗菌助长剂添加 到饲料中，对控制畜禽疾病的发生，促进畜禽生长 发育，提高饲养效益确实起到积极的作用。目前， 抗生素促生长的机理尚不明确。传统的观点认为 抗生素的各种作用效果都是基于抗生素对肠道微 生物的直接作用。Ｎｉｅｗｏｌｄ则认为抗生素具有促生 长的作用可能是其抑制动物肠道的炎症反应 。 我们认为饲料在储存过程中，易滋生细菌，产生大 量的细菌毒素，其是引起动物生长迟缓的主要原 因，饲用抗生素主要通过抑制有害病原微生物的增 殖及活性，进而减少毒素的释放量，起到促动物生 长的效果。本试验中细菌破碎液和细菌悬液均能 极显著降低小鼠体重，说明细菌可通过产生毒素抑 制动物生长。但是，长期、大量地使用抗生素可能 会使病原菌产生耐药性＿１ 等多种副作用。因此，世 界各国陆续开始限制或禁止将抗生素添加在饲料 里 。中药具有天然性、毒副作用小、无残留和无 耐药性等独特优势 ｊ，可作为抗菌和促生长的饲 料添加剂，具有广阔的开发前景。目前，在代替抗 生素的中药饲料添加剂开发研究领域，尚缺乏统一 的动物模型。本研究中建立的小鼠生长迟缓模型， 可为该领域提供稳定可靠的实验动物模型，促进中 药添加剂的研究发展，也可为相关模型建立与发展 提供一定的参考。 本研究通过灌服细菌毒素成功建立了小鼠生 长迟缓模型，为研究替代抗生素饲料添加剂提供了 动物模型，但是本研究还存在很多不足。本试验采 用大肠杆菌Ｋ９９上清及破碎均是小鼠日增重显著 下降，但是其产生的毒素种类复杂，尚不清楚是那 一种毒素还是几种毒素联合导致小鼠生长迟缓，还 需进一步研究。灌服毒素抑制生长的机制还不清 楚，其机理还需深入研究，通过本试验初步确定与 炎性因子ＩＬ一６、ＴＮＦ一 水平升高无关。 本研究表明，成功建立了灌服细菌毒素导致小 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 鼠生长迟缓的模型，可为开发具有灭活细菌毒素的 中药添加剂提供动物模型。 参考文献： ［１］ Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ Ｇ．Ｇｒａｍ—ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｇｒａｍ—ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｔｏｘｉｎｓ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ：ａ ｂｒｉｅｆ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ，２０１４，５（１）： ２１３－２１８． ［２］ Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ Ｉ ｃ．Ａ ｐｈｙｌｕｍ ｌｅｖｅｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｃｅｌｌ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｏｒｂｉｏｌ，２０１０，１８（１０）：４６４—４７０． ［３］Ｌｉｕ Ｗ，Ｃｈｅｎ Ｊ Ｌ，Ｌｉｕ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ ｃｙｃｌｉｃ ａｄｅ— ｎｙｌａｔｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ １ｉｐ叩０ｌｙｓａｃｃｈａ订ｄｅ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ Ｍｅｄ Ｓｃｉ，２０１７，３７（３）：３３２—３３６． ［４］Ａｎｎａｎｅ Ｄ，Ｂｅｌｌｉｓｓａｎｔ Ｅ，Ｃａｖａｉｌｌｏｎ Ｊ Ｍ．Ｓｅｐｔｉｃ ｓｈｏｃｋ［Ｊ］．Ｌａｎ— ｃｅｔ，２００５，３６５（９４５３）：６３—７８． ［５］Ｌｉｕ Ｗ，Ｃｈｅｎ Ｊ Ｌ，Ｌｉｕ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ ｃｙｃｌｉｃ ａｄｅ－ ｎｙｌａｔｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｎ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｅｈａｒｉｄｅ ｉｎ ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ Ｔｅｅｈｎｏｌｏｇ Ｍｅｄ Ｓｃｉ，２０１７，３７（３）：３３２—３３６． ［６］ 张帅．不同破碎方法提取嗜酸乳杆菌细菌素的研究［Ｊ］．哈 尔滨商业大学学报（自然科学版），２０１３（４）：４３２—４３４． ［７］ 张静，朱风华，高晨，等．呕吐毒素、玉米赤霉烯酮和烟曲霉 毒素Ｂ１单一及联合致小鼠毒性作用［Ｊ］．中国畜牧杂志， ２０１３，４９（２１）：６５—６８． ［８］ Ｌｕ Ｙ Ｃ，Ｙｅｈ Ｗ Ｃ，Ｏｈａｓｈｉ Ｐ Ｓ．ＬＰＳ／ＴＬＲ４ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２００８，４２（２）：１４５—１５１． ［９］ Ｃｕｎｙ Ｃ，Ｇｏｅｔｚｍａｎｎ Ｔ，Ｄｅｄｏｍｅ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｅｇｒａｄｅ ｎａｉｌｉｎｇ ｅｖｏｌｕ· ｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐｒｏｘｉｍａｌ ｈｕｍｅｒａｌ ｆｒａｃｔｕｒｅｓ，ｔｈｅ Ｔｅｌｅｇｒａｐｈ ＩＶ（（Ｒ））：ａ ｓｔｕｄｙ ｏｆ６７ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｏｒｔｈｏｐ Ｓｕｒｇ Ｔｒａｕｍａｔｏｌ，２０１５．２５ （２）：２８７—２９５． ［１０］ Ｍａｎｓａｔ Ｐ，Ｂｏｎｎｅｖｉａｌｌｅ Ｎ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｆｒａｃｔｕｒｅ ｓｅｑｎｅｌａｅ ０ｆ ｔｈｅ ｐｒｏｘｉｍａｌ ｈｕｍｅｒｕｓ：ａｎａｔｏｍｉｃａｌ ＶＳ ｒｅｖｅｒｓｅ ｓｈｏｕｌｄｅｒ ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］． Ｉｎｔ Ｏｒｔｈｏｐ，２０１５，３９（２）：３４９—３５４． ［１１］Ｗａｌｌａｃｅ Ｒ Ｊ，Ｇｒｏｐｐ Ｊ，ＤｉｅｒｉｅｋＮ，ｅｔ ａ１．Ｒｉｓｋｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓ ｉｎ ｆｅｅｄ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｎｖｉ． ｒｏｎ Ｈｅａｌｔｈ，２０１６，１５：５． ［１２］ Ａ Ｎ Ｔ．Ｔｈｅ Ｎｏｎａｎｔｉｂｉｏｔｉｅ Ａｎｔｉｌｎｆ１ａｔｍｍａｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏ． ｂｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ，ｔｈｅ Ｒｅａｌ Ｍｏｄｅ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ？Ａ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ ［Ｊ］．Ｐｏｕｌｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００７（８６）：６０５—６０９． ［１３］Ｙａｎｇ Ｑ Ｅ，Ｗａｌｓｈ Ｔ Ｒ．Ｔｏｘｉｎ—ａｎｔｉｔｏｘｉｎ ｓｙｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ｉｎ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｎｇ ａｎｄ ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］． ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ，２０１７，４１（３）：３４３—３５３． ［１４］ 孙玉华．添加中草药对断奶仔猪生产性能及经济效益的影响 ［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１４，５０（６）：１０８—１１１． ［１５］王振东．畜禽养殖合理选用中草药添加剂［Ｊ］．中国畜牧兽 医文摘，２０１７，３７（４）：２２２． ［１６］ 张周年．中草药在畜禽养殖生产中的添加应用［Ｊ］．中兽医 学杂志，２０１７（２）：８２—８３．