马杰；孙焱；丁野；李文莉1*
（湖南省食品药品检验研究院，长沙，湖南，410001）
摘要 目的：修订提高复方石淋通胶囊的质量标准。方法：采用薄层色谱法鉴别处方中的忍冬藤、石韦；采用HPLC法测定处方中绿原酸的含量。结果：在TLC色谱中可检出与忍冬藤、石韦药材的特征斑点，斑点清晰，分离度好；绿原酸进样量在0.02034～1.5255 μg (r=1,n=7)范围内线性关系良好，平均加样回收率（n=6）为99.2%，RSD=0.8%。结论：所采用的方法准确、可靠, 可行性及重复性良好, 能更有效控制该制剂的质量。 关键词：复方石淋通胶囊；绿原酸；TLC；HPLC
Modification of the Quality Standard for Fufang Shilintong Capsules
Ma Jie; Sun Yan;Ding Ye; Li Wenli
（Hunan Institute for Food and Drug Control, Changsha, Hunan,410001) Abstracts Objective To modificate and improve the standard of Fufang Shilintong Capsules. Methods Lonicerae Japonicae Caulis and Pyrrosoae Folium in Fufang Shilintong Capsules were identified by TLC, and the content of chlorogenic in Fufang Shilintong Capsules were determined by HPLC. Results Specific spots of Lonicerae Japonicae Caulis and Pyrrosoae Folium were identified in TLC; hlorogenic showed a good liner relationship at the range of 0.02034～1.5255 μg (r=1,n=7), the average recovery rate was 99.2 % (n=6). Conclusion The method is accurate and reliable, It can be used for quality control of Fufang Shilintong Capsules more effectively.
Key words: Fufang Shilintong Capsules;hlorogenic;TLC;HPLC
复方石淋通胶囊处方由广金钱草、石韦、海金沙、滑石粉与忍冬藤组成，具有清热利湿，通淋排石之功效，用于膀胱湿热、石淋涩痛，尿路结石、泌尿系统感染属肝胆膀胱湿热者[1-3]。复方石淋通胶囊现行质量标准为三个不同的国家食品药品监督管理局标准，方法各异且专属性较差，不利于实现对复方石淋通胶囊
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基金项目：国家药品标准提高行动计划（编号：9） 作者简介：马杰， Tel：（0731）82275844，E-mail：majie172@126.com *通讯作者：李文莉 主任药师，从事药物分析工作。Tel：（0731）82275866，E-mail：elileenwl@tom.com
质量的全面控制。为此，本文修订了现行标准中忍冬藤的薄层色谱鉴别，并增加了石韦和广金钱草的薄层色谱鉴别；对处方中忍冬藤和石韦所含的绿原酸的含量测定方法进行了研究。
1 鉴别 1.1 仪器与试药
CAMAG Linomat 5 半自动点样仪（瑞士卡玛公司）；CAMAG reprostar 薄层照相仪（瑞士卡玛公司）。
硅胶G薄层板（德国默克公司）；聚酰胺薄膜板（国药集团化学试剂有限公司）；其余试药均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。忍冬藤对照药材（批号：121069-201105，中国食品药品检定研究院），广金钱草对照药材（批号：121248-201104，中国食品药品检定研究院），石韦对照药材（由湖南德康制药股份有限公司提供），马钱苷（批号：111640-201005，中国食品药品检定研究院），绿原酸（批号：110753-201314，中国食品药品检定研究院）。
缺忍冬藤阴性样品、缺广金钱草阴性样品、缺石韦阴性样品由生产厂家提供。 供试品来自两家企业的3批样品（企业A：批号111101、110901，规格0.25g/粒；企业B：批号20111101，规格0.32g/粒）。
1.2 忍冬藤的薄层色谱鉴别
取本品2粒的内容物，加50%甲醇10 ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。取缺忍冬藤阴性样品，同法制成阴性对照溶液。另取忍冬藤对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取马钱苷对照品，加50%甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部VI B）[4]试验，吸取上述各种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65∶35∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无相应斑点，见图1。
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1~3. 复方石淋通胶囊 4.忍冬藤对照药材 5.马钱苷 6.阴性对照
图1 忍冬藤的TLC色谱
1.3 广金钱草的薄层色谱鉴别[5]
取本品2粒的内容物，加80%甲醇25 ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加50%甲醇10 ml使溶解，作为供试品溶液。取缺广金钱草阴性样品，同法制成阴性对照溶液。另取广金钱草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取夏佛塔苷对照品，加50%甲醇制每1 ml含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部VI B）试验，吸取上述两种溶液各1 μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸丁酯－丁酮－甲酸（5∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无相应斑点，见图2。
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1~3. 复方石淋通胶囊 4.广金钱草对照药材 5.夏佛塔苷 6.阴性对照
图2 广金钱草的TLC色谱
1.4 石韦的薄层色谱鉴别[6]
取本品6粒的内容物，研细，加水20 ml微热使溶解，滤过，滤液加稀盐酸调节pH值至2，用乙酸乙酯振摇提取三次，每次20 ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加乙醚10 ml，浸泡2分钟，弃去乙醚液，残渣用无水乙醇1 ml溶解，作为供试品溶液。取缺石韦阴性样品，同法制成阴性样品溶液。另取石韦对照药材2 g，加水煮沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至20 ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部VI B）试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲酸乙酯－甲苯－甲酸（6∶3∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无相应斑点，见图3。
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1~3. 复方石淋通胶囊 4.石韦对照药材 5.阴性对照
图3 石韦的TLC色谱
2 绿原酸含量测定[7-9] 2.1 仪器与试药
安捷伦1200 高效液相色谱仪（包括GA1311A 四元泵、G1314B 可变波长检测器、G1316A 柱温箱、G1329A 自动控温进样器），色谱柱 Welch Ultimax XB C18(250 mm×4.6 mm,5 μm），Chem-station色谱工作站，Mettler AE-200电子天平（德国梅特勒公司，万分之一），Mettler CP-225D电子天平（德国梅特勒公司，十万分之一），KQ-300DE（300 W，30 kHz）超声仪（昆山超声仪器公司）。
绿原酸对照品 中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：110753－200413。
供试品来自两家企业的6批样品（企业A：批号111101、110901、111001、111002、111003，规格0.25g/粒；企业B：批号20111101，规格0.32g/粒）。 2.2 溶液制备 2.2.1 对照品溶液
精密称取绿原酸对照品约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液（101.7μg·mL-1），并逐步稀释为浓度为40.68μg·mL-1、4.068μg·mL-1的对照品溶液。另精密称取绿原酸对照品13.86mg，置100mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml置100mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得加样回收率所需对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液
取本品10粒，倾出内容物，精密称定，取细粉约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇溶液25 ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，称重，加50%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，置棕色瓶中，即得。
2.2.3 阴性样品溶液
按处方比例和方法取除忍冬藤及石韦外的其余各味药材制成缺忍冬藤及石韦样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺忍冬藤及石韦的阴性样品溶液。 2.3 色谱条件
色谱柱：Welch Ultimax XB C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸水（8:92）；流速1.0 mL·min-1；进样量10μl；检测波长为327 nm；柱温30 ℃。理论板数按绿原酸计，不低于1500。
取对照品溶液、供试品溶液及缺忍冬藤及石韦的阴性样品溶液按上述色谱条件进样，记录色谱图（图4）。结果表明，样品中其他成分对绿原酸的测定无干扰。
DAD1 A, Sig=327,4 Ref=off (D:\\2012年\\马杰\\一季度\\复方石淋通\\试\\绿原酸对.D)mAU140120100806040200-200246810绿原酸 A 12141618min DAD1 A, Sig=327,4 Ref=off (D:\\2012年\\马杰\\一季度\\复方石淋通\\试\\阴性.D)mAU140120100806040200-20024681012141618min B DAD1 A, Sig=327,4 Ref=off (D:\\2012年\\马杰\\一季度\\复方石淋通\\试\\样品.D)mAU140120100806040200-20绿原酸 C 1618min024 B.缺石韦、忍冬藤阴性6810114 A.绿原酸对照品 2C.样品图4 复方石淋通胶囊绿原酸HPLC色谱图
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液（4.068 µg/ml）5、10 μl，对照品溶液（40.68 µg/ml）2、5、10 μl及对照品溶液（101.7 µg/ml）10、15μl， 注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为（ng）为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程为：
y = 3811.7x - 11.503，r=1。结果表明：绿原酸对照品在0.02034～1.5255 μg范围内线性关系良好。 2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于配制后的0、3、7、12、18、24小时，精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，测定，结果RSD为0.4%，表明供试品溶液在配制后24小时内稳定。 2.6精密度试验
按“2.3”项下色谱条件，精密吸取供试品溶液，重复进样5次，测定峰面积。结果所得峰面积RSD为0.3%（n=5），结果表明本法的精密度较好。 2.7 重复性试验
取同一批号（110901）样品，依法制备6份供试品溶液，测定并计算，结果平均含量为0.34mg/粒，RSD为0.4%，表明重复性良好。 2.8 加样回收率试验
取已测定含量的同一批号（110901）样品（含绿原酸0.3398 mg/粒）约0.125 g（6份），精密称定，置25 ml量瓶中，精密加入浓度为0.00693mg/ml的对照品溶液25ml，依法制备供试品溶液，测定并计算，结果见表1。
表1 回收率试验结果表
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取样量
样品中含量
（mg） 0.1722 0.1716 0.1704 0.1734 0.1742 0.1722
0.17325 添加量（mg）
实测量（mg) 0.34581 0.34354 0.34212 0.34724 0.34462 0.34288
回收率（%）
100.1 99.1 99.0 100.3 98.3 98.5
99.2 平均回收率
0.1269 0.1265 0.1256 0.1278 0.1284 0.1269
2.9 样品测定
取不同厂家和批次的复方石淋通胶囊样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液并照拟定方法测定绿原酸含量，结果批号为111101，110901，111001，111003，111002，20111101的样品含量(n=2)0.30,0.34,0.31,0.32,0.31,0.65 mg/粒。 3 讨论
3.1 本质量标准中建立的薄层色谱鉴别方法不受处方中其他药味的干扰，可作为本品定性检验的指标。
3.2 绿原酸含量测定限度的统一
复方石淋通胶囊的制法各企业间有差异[1-3]，但均是由相同处方量制成总量一致的胶囊粒数，故每粒相当的生药量也是一致的。现行质量标准中对绿原酸含量测定限度的规定分别为不低于0.52 mg/粒、0.42 mg/粒、0.25 mg/粒，因此有必要统一不同企业间绿原酸的含量限度。参照《中国药典2010年版一部》规定石韦的绿原酸限度为0.20%，忍冬藤为0.10%。按处方中石韦和忍冬藤的量折算，理论含量限度应为1.5 mg/粒。6批样品的含量测定结果平均值为0.37 mg/粒，按6批样品平均值的70%计算，将限度统一为0.25 mg/粒。
参考文献：
1 国家药典委员会. 国家食品药品监督管理局复方石淋通胶囊标准（YBZ07932008）（S） 2 国家药典委员会. 国家食品药品监督管理局复方石淋通胶囊标准（YBZ04472009）（S） 3 国家药典委员会. 国家食品药品监督管理局复方石淋通胶囊标准（YBZ09912008）（S） 4 国家药典委员会.中国药典2010年版一部[S]. 北京,中国医药科技出版社, 2010：41-42 5 张亚秋, 高春华, 姚丹, 等. 复方石淋通片中广金钱草、石韦的薄层定性鉴别[J].锦州医学
院学报.2005,26(6):90
6 赵素容，卢兖伟, 吴文雅, 等. 广金钱草总黄酮胶囊对照品的研究[J]. 中成药.2007,
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7 张亚秋, 高春华, 姚丹, 等.高效液相色谱法测定复方石淋通片中绿原酸的含量[J]. 时珍国
医国药, 2006,17(3):375-376
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师,2014,16(10):1514-1515
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