The world leader in serving science 样品名称/基体 检测项目 葡聚糖/水 赛默飞世尔科技色谱与质谱事业部 葡聚糖的分子量分布 泵：DGP-3600RS （8084507） 仪器型号 与配置 自动进样器：WPS-3000RS （8086106） 柱温箱：TCC-3000RS（6000332） 检测器：CAD Veo RS（8081977） 名称：无 保护柱 PN： / SN：/ Biobasic SEC120 (7.8 x 300 mm, 5 µm) ； P/N:73405-分析柱 307846；S/N:10236969 Biobasic SEC300 (7.8 x 300 mm, 5 µm) ； P/N:73505-307846；S/N:10020731 检测器类型、工作参数 柱温 流动相 进样体积 流速 35 oC, 10 Hz, filter 5.0 30 oC 水 见正文 1 mL/min 一、 样品 用水分别溶解5种分子量的葡聚糖，4.32 x 103（1），1.26 x 104（2），6.60 x 104（3）， The world leader in serving science 1.10 x 10（4），2.89 x 10（5）。按一定比例稀释1-5号样品做检出限分析：1号样品（0.7 ppm, 3.5 ppm），2号样品（0.5 ppm, 2.5 ppm），3号样品（0.3 ppm, 3.0 ppm），4号样品（1.2 ppm, 12 ppm），5号样品（1.1 ppm, 11 ppm）。 55 二、 结果与讨论 （1） 不同规格SEC柱对葡聚糖分离检测的影响 如图1所示，Biobasic SEC120用于低分子量化合物的分析时具有较高的分离度，但当待测化合物分子量超过12600时，该色谱柱的分离能力有限，分子量超过12600的葡聚糖在Biobasic SEC120上几乎没有分离度。以Biobasic SEC300为固定相，虽然分子量较小的化合物（4320）分离度有所下降，但所有待测化合物均在该色谱柱上呈现一定的分离度，因此选择Biobasic SEC300做固定相，做待测物的分子量分布。 （1） （2） The world leader in serving science 图1 Biobasic SEC120 (1)和Biobasic SEC300 (2)用于几种葡聚糖对照品的分析。从上到下化合物分子量依次为4320，12600，66000，110000，289000。 （2） 分子量分布 如图2所示，以Biobasic SEC300为固定相，几种葡聚糖对照品和待测样品可以实现较好的分离。以对照品分子量的对数值为纵坐标，保留时间为横坐标，做标准曲线如图3。 图2 Biobasic SEC300分析样品1和几种对照品 The world leader in serving science 图3 葡聚糖标准曲线 （3） 样品分析 图4为样品分析谱图。根据标准曲线，计算主峰的分子量为116000左右。保留时间为10.187和10.973的肩峰为流动相水中杂质。在溶剂空白中也能观察到。 1 - 2 - 8.684图4 Biobasic SEC300分析样品 2 - 10.1873 - 10.973 The world leader in serving science 表1 图4对应数据表 （4） 低浓度对照品的检测 RI检测几种葡聚糖的检出限（S/N=3.0）为10 ppm。以CAD为检测器，即使样品浓度低至0.5 ppm，分子量为12600的化合物响应信号仍能达到3倍S/N。因此，CAD的灵敏度比RID高2个数量级。 表2 低浓度对照品检测结果 化合物分子量 4320 12600 66000 110000 289000 结论 l 与RI相比，CAD具有更高的检测灵敏度； l 变色龙软件具有一定的GPC功能，可用于聚糖的分子量分布分析； 样品浓度（ppm） S/N 0.7 0.5 3.0 1.1 1.2 20.0 3.0 44.8 23.0 19.4 进样体积（µL） 100 100 100 100 100 The world leader in serving science l Biobasic SEC300对4320到289000内的聚糖都具有分离能力，可满足该范围内聚糖的分离分析。