法同时测定三七总皂苷中人参皂苷 Rg Rb

1218最大,回收率Y=9813%。

甘草饮片提取液,当V乙醇=6mL,V浓缩液=4mL,磷酸氢二钾为115g,加酸后提到结晶01052g,结晶是白色松散粉末。与传统工艺相比,工艺简洁,且结晶性状、纯度较高。乙醇󰃗磷酸氢二钾是基于与水互溶的有机溶剂和盐水相的双水相萃取体系,具有溶剂价廉、低毒、较易挥发而无需反萃取和避免使用粘稠水溶性高聚物等特点,易回收、易处理、操作简便。这种新型的萃

取体系在中草药有效成分提取中的应用还未见报

道,用此体系萃取其他中药有效成分还需继续研究。

参考文献:

[1]　梅乐和,朱自强1酶的双水相体系萃取分离技术[J]1现代化

工,1991,11(6):152191[2]　王志华,马会民,马泉莉,等1双水相萃取体系的研究[J]1应

用化学,2001,18(3):17321751

[3]　北京中医学院1中医药化学[M]1贵阳:贵州人民出版社,

19901

[4]　梁生旺,刘　伟1中药制剂定量分析[M]1北京:中国中医药

出版社,19971

HPLC法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1与Rb1的含量梁　宁1,赵怀清1,周迎春1,曲　燕1,鲁鑫焱1,张福蔓2Ξ

(11沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳　110016;21沈阳药大集琦药业有限责任公司,辽宁沈阳　110016)

摘　要:目的　建立HPLC同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1与Rb1的方法。方法　采用HPLC法,以茶碱为内标,氨基键合相为固定相,流动相为乙腈2水(80∶20),检测波长203nm。结果　三七总皂苷中人参皂苷Rg1和Rb1与其他成分分离良好,保留时间分别约为517和2115min。人参皂苷Rg1在80～280Λg󰃗mL(r=019995),Rb1在80～240Λg󰃗mL(r=019993)线性关系良好,Rg1和Rb1加样回收率分别为9711%和9814%,RSD分别为2144%和2135%(n=9)。结论　本法操作简便,准确,重现性好,可用于人参及三七的质量控制。关键词:三七总皂苷;人参皂苷Rg1;人参皂苷Rb1;高效液相色谱法

中图分类号:R286102　　　文献标识码:B　　　文章编号:02532670(2002)08070402

DeterminationofginsenosideRg1andRb1intotalsaponinsofPanaxnotoginsengbyHPLC

111112

LIANGNing,ZHAOHuai2qing,ZHOUYing2chun,QUYan,LUXin2yan,ZHANGFu2man

(1.SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China;

2.ShenyangYaodajiqiPharmaceuticalCo.,Ltd.,Shenyang110016,China)

Keywords:totalsaponinsofPanaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen;ginsenosideRg1;ginsenosideRb1;HPLC

　　三七为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根,有散瘀止血、消肿定痛的功效,用于咯血,吐血,衄血,便血,崩漏,外伤出血,胸腹刺痛,跌扑肿痛等。三七总皂苷主要有效成分为人参皂苷Rg1和Rb1。《中华人民共和国药典》2000年版一部采用薄层色谱法以人参皂苷Rg1和Rb1为指标进行含量测定。目前有关文献报道测定人参单体皂苷的方法有薄层光密度法[1],薄层扫描法[2],高效液相色谱法[3～6]。而在同一色谱条件下以内标法同时测定多种皂苷含量的方法未见报道。本实验采用氨基柱,流动相配比简单,以茶碱作内标,使人参皂苷Rg1与Rb1与三七总皂苷中的其他

成分及内标物均达到较好分离。实验证明,该方法准确可靠,重现性好,能够有效地测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1和Rb1的含量。1　仪器、试剂与材料

日立L27110型高效液相色谱仪,日立L27400型紫外检测器,江申色谱工作站,DT2100A光电天平。人参皂苷Rg1(07032200015)与人参皂苷Rb1(07042200012)对照品由中国药品生物制品检定所提供;三七总皂苷原料由沈阳药科大学天然药化研究室王金辉副教授提供,乙腈为色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。2　方法与结果

Ξ收稿日期:2001210215

作者简介:梁　宁(19672),女,辽宁沈阳人,工程师,药物分析专业硕士研究生,研究方向为中药材和中成药质量评价方法以及中药药动学研

究。Tel:(024)23902568　E2mail:zfmln@online.ln.cn

中草药　ChineseTraditionalandHerbalDrugs　2002年第33卷第8期・705・

211　色谱条件:色谱柱为NH2P250柱(416mm×250mm,5Λm),流动相为乙腈2水(80∶20),流速

为110mL󰃗min,检测波长为203nm,柱温为室温,进样量为20ΛL。在此色谱条件下,对照品与样品的色谱图见图1。

谱峰与内标物的峰面积比值的RSD分别为1163%(n=6)和1174%(n=6)。结果表明12h内供试品溶液基本稳定。

218　回收率试验:精密称取已知含量的样品,分别加入人参皂苷Rg1与Rb1及内标溶液适量,用流动相稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下取20ΛL进样,结果人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的平均回收率及其RSD分别为9711%,2144%;9814%,2135%(n=9)。

219　样品测定:按213项下制备供试品溶液,取20

12人参皂苷Rg1　22茶碱　32人参皂苷Rb1

图1　对照品(A)和样品(B)色谱图

212　对照品溶液及内标溶液制备:精密称取人参皂苷Rg15mg及人参皂苷Rb14mg,分别置5mL量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀。取茶碱约715mg,精密称定,置25mL量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,作为内标溶液。

213　供试品溶液制备:精密称取三七总皂苷原料约8mg,置10mL量瓶中,加内标溶液014mL,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀。

214　线性范围考察:分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液0108,0112,0116,0120,0124,0128mL和人参皂苷Rb1对照品溶液0110,0114,0118,0122,0126,0130mL及内标溶液0104mL,用流动相定容至1mL,得到系列浓度的对照品混合溶液,分别进样,以对照品溶液浓度为横坐标(X),对照品与内标物峰面积比为纵坐标(Y),进行线性回归,人参皂苷Rg1和Rb1的回归方程分别为:Y=010038X+010217(r=019995)和Y=01003X-010696(r=019993),人参皂苷Rg1在80～280Λg󰃗mL,人参皂

ΛL注入高效液相色谱仪,记录色谱峰面积,采用工

作曲线计算人参皂苷Rg1的含量为23713mg󰃗g(RSD=1131%,n=3),人参皂苷Rb1的含量为28716mg󰃗g(RSD=1114%,n=3)。3　小结与讨论311　色谱条件的选择:文献报道采用ODS柱较多,

大多是对一种人参皂苷单体进行定量,我们分别用ODS柱和氨基柱以甲醇2水,甲醇2水2磷酸,乙腈2甲醇2水,乙腈2水以不同比例的流动相对色谱条件进行了考察。实验结果表明,ODS柱分离效果较差。文献中同时测定多种皂苷成分采用的是梯度洗脱法,对设备要求高,重复性差。本法采用氨基键合相,乙腈2水(80∶20)的二元溶剂系统为流动相,配比简单,就可使人参皂苷Rg1与相邻峰分离较好,人参皂苷Rb1的保留时间适中。

312　内标物的选择:文献报道未见采用内标法对人

参皂苷Rg1与Rb1的含量测定,采用上述色谱条件,人参皂苷Rg1的tR=517min,人参皂苷Rb1的tR=2115min。为了减小定量误差,并获得较好的重现性,经过考察几种物质,最终选用茶碱作为内标,其tR=1212min,与相邻峰分离度均大于115。

参考文献:

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人参单体皂甙的研究[J]1中草药,1998,29(4):22822301

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总皂苷及血塞通注射液中三种皂苷的含量[J]1药物分析杂志,2000,20(6):41024121

苷Rb1在100～300Λg󰃗mL呈现良好线性关系。215　精密度试验:取214项下同一对照品溶液,按上述色谱条件重复进样6次,人参皂苷Rg1和Rb1的色谱峰与内标物的峰面积比值的RSD分别为0126%(n=6)和1121%(n=6)。

216　重现性考察:按213项下平行制备5份供试品,测定含量,人参皂苷Rg1与Rb1的平均含量分别为23711mg󰃗g(RSD=1114%)和28512mg󰃗g(RSD=1104%)。

217　稳定性试验:取供试品溶液分别于0,2,4,6,8,12h进样20ΛL,测得人参皂苷Rg1和Rb1的色