乙酸乙酯回流法提取木瓜总黄酮及含量测定

2001年8月JOURNALOFGUIYANGMEDICALCOLLEGE200118

乙酸乙酯回流法提取木瓜总黄酮及含量测定

常楚瑞

(贵阳医学院药用植物学与生药学教研室,贵州贵阳 550004)

[关键词]木瓜;黄酮类;乙酸酯类;含量测定

[中图分类号]R281.4;R977.2 [文献标识码]B [文章编号]1000-2707(2001)04-0326-02 木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠(ChaenomelesspeciosaSweetNakai)的干燥近成熟果实,此外,少数地区以同属植物光皮木瓜[Chaenomelessinensis(Thouin.)Koehne]、木桃[Chaenomelellagenaria(Loisel.)Koidz.var.cathayensisRehd.]、木瓜海棠[Chaenomeleslagenaria(Loisel.)Koidz.Var.wilsoniiRehd.]、西藏木瓜(ChaenomelesthibeticaYii)或毛叶木瓜[Chaenomelescathayensis(Hem-sl.)Schneid]的果实作木瓜使用。中医论述木瓜的药性和功用为酸、温,归肝、脾经。具有平肝和胃、去温舒筋的功能。临床上用于治疗湿痹、吐泻转筋、脚气、水肿、痢疾等病[1],据报道尚有护肝、降酶、改善肝功能、抗菌等作用[2]。木瓜果实含皂甙、黄酮类、木瓜酚、还原糖、蔗糖、氨基酸、维生素C、木瓜酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、枸橼酸、反丁烯二酸、齐墩果酸等大量有机酸[3],还含有果胶、鞣质、10-二十九烷醇、B-谷甾醇、五环三萜类化合物[4]、过氧化酶、过氧化物酶、酚氧化酶等成分。木瓜在我省主要分布区域为遵义地区、安顺北部、铜仁地区,毕节地区东北部、盘县、兴义市北部、水城西南部及黔东南苗族、侗族自治州大部分地区[5]。1999年6月对乙酸乙酯回流提取的木瓜总黄酮进行了含量测定。

品检定所提供)。木瓜药材购于贵州省药材市场,经贵阳中医学院中药鉴定教研室鉴定为蔷薇科植物贴梗海棠的干燥近成熟果实1.2 方法

1.2.1 木瓜总黄酮的提取 木瓜粗粉500g,石油醚脱脂,乙酸乙酯加热回流3次(1500ml/5h,1000ml/4h,500ml/3h),滤液用氨水调pH6.5~7.0,回收乙酸乙酯至近干,用乙醇溶解提取物后,水浴蒸干,提取木瓜总黄酮,得黑褐色粘性干膏27.5g,收得率5.2%。

1.2.2 木瓜总黄酮的含量测定

1.2.2.1 吸收曲线 第一管(空白管)、第二管,分别精密吸取芦丁标准品溶液、供试品溶液3.0ml于25ml容量瓶中,两管均加入5%NaNO2的溶液1ml摇匀,放置6min,又加入5%AlCl3溶液1ml摇匀,放置6min,再加入4%NaOH溶液10ml,用蒸馏水定容,放置15min[7]。以第一管为空白,在360~900nm范围内扫描吸收曲线,得图1。

[6]

。

1 材料及方法

1.1 材料

BeckmanDU-70型分光光度计(美国贝克曼公司),HH-S恒温水仪器(江苏振兴仪器厂),光学读数分析天平(TG328B,分度值0.1mg,湘仪天平仪器厂)。石油醚、乙酸乙酯含量测定所使用的试剂均为分析纯;芦丁标准品(由中国药品生物检326图1 样品液与供试品液的吸收曲线Fig.1 Absorbtioncurvesofthesample

andstandardreagent

(1)芦丁标准品,(2)乙酸乙酯回流物

4期 常楚瑞 乙酸乙酯回流法提取木瓜总黄酮及含量测定 1.2.2.2 线形范围 精密称取干燥至恒重的芦丁标准品20.6mg,10ml甲醇于烧杯中,水浴微热使其溶解,用蒸馏水定容至100ml容量瓶中摇匀,以第一管为空白,再分别精密吸取样品110、210、310、410、510、610ml于6只25ml容量瓶中,按1121211方法显色,以第一管为空白,在510nm波长处测定吸收度。以浓度C对吸收度A作图,其回归方程:C=21347A-01023,r=019998(P<0101)。C与A存在良好的线形关系。

1121213 含量测定 精密吸取供试品液510ml各3份,按1121211方法显色,测定吸收度,代入回归方程,计算出乙酸乙酯回流提取物C=013462g/L,提取物中总黄酮含量为23102%,总黄酮的含量为11197%。并计算出平均值A=01182、标准差s=01002、变异系数CV%=01826%。11213 显色稳定性实验

样品溶液显色后,在510nm处测定不同时间的吸收度,显色时间分别为:5、10、15、20、30、40、50、60、80min,芦丁对照品的吸收度分别为:01211、01211、01210、01209、01209、01210、01209、01209、01206,乙酸乙酯回流物的吸收度(2种浓度)分别为:01162、01161、01160、01160、01159、01150、01145、01142、01138;01184、01183、01183、01182、01180、01175、01170、01168、01165。11214 加样回收实验

取供试品液3份,加入310ml芦丁标准品液后,按1.2.2.1方法显色,测定吸收度,计算百分回收率,见表1。

表1 加样回收率测定结果

Tab.1 Measurementresultsofreclamation

rateinthesample

样品号123

回收率96.5997.3597.35

97.10

0.4519

平均回收率%

CV%

2 讨论

2.1 根据溶剂的极性及相似相溶原理,采用乙酸乙酯回流法提取木瓜总黄酮的方法,得率高,杂质少。

2.2 从图1可见,供试品的吸收曲线与标准品芦丁的吸收曲线基本一致,并在510nm处有最大吸收。说明木瓜总黄酮与芦丁有相似结构,以芦丁为代表的黄酮类成分均具有一定生理活性,如芦丁有降低毛细血管通透性和脆性作用,用于防治高血压、脑溢血、糖尿病、视网膜出血和出血性紫癜等,而药典规定了芦丁类总黄酮的测定方法,因此将木瓜总黄酮测定作为测定指标。

2.3 从显色稳定性实验可见其吸收度在30min基本稳定,提示吸收度的测定需在显色后30min内完成。

[参考文献]

[1]薛玉梅,黄萍,裴月梅.木瓜中有机酸和黄酮类成分的

含量测定[J].基层中药杂志,1994,8(4):27-28.[2]郑智敏,王素源.中药木瓜对大白鼠肝损伤的实验观察

[J].福建中医药,1985,16(6):35-36.

[3]JohjiYamahara,ToshimasaYamada,TetuyaKitani.

YoshikazaNaitohandHajimeFujimura:Antianoxican-tianosicactionandactiveconstituentsofevodiaefructus[J].Chem.PharmBull,1989,37(7):1820.

[4]罗景方.木瓜中齐墩果酸分离和鉴定[J].中草药,

1983,14(11):48.

[5]贵州省中药资源普查办公室,贵州省中药研究所.贵州

中药资源[M].北京:中国医药科技出版社,1992.219.[6]中华人民共和国卫生部药典委员会1中华人民共和国

药典[S].广州:广东科技出版社,化学工业出版社,2000.45.

[7]王绮秋.中国制剂成分现代分析法[M].贵阳:贵州科

技出版社,1991.49.

(2000-10-28收稿,2001-03-26修回

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