华北理工大学生物制药考试重点全

1、中国几大药源是什么？

中国三大药源是化学药、生物药、中药---生化药物、微生物药物、生物制品2、生物药物、生物制药定义1

生物药物：是以生物材料（生物体、生物组织或其成分：组织、细胞、细胞器、代谢物、排泄物等）为原料，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术和药学等学科的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。生物技术制药：采用现代生物技术,借助某些微生物、植物、动物生产医药品，叫作生物技术制药。16、解释单克隆抗体、多克隆抗体、抗体、免疫佐剂

单克隆抗体：由单一克隆B细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子某一特定抗原决定簇的特异性抗体。多克隆抗体：指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。抗体：机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。

免疫佐剂：由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。3、生物药物分类

（1）重组DNA药物（2）基因药物（3）天然生物药物（4）合成或半合成生物药物4、几类抗生素的主要特性及生产菌种1

A、β-内酰胺类抗生素：羧基有弱酸性：影响溶解度β-内酰胺环不稳定

青霉素：菌种：最早的原始菌种是点青霉菌；现用产黄青霉菌◆理化性质：1、溶解性：受pH影响

游离酸：易溶于有机溶剂，难溶于水盐：易溶于水，几乎不溶于有机溶剂2、酸碱性：有机弱酸

3、稳定性：pH在5-7较稳定，最稳定pH为6-6.54、降解反应：强酸、弱酸、碱性条件或酶、胺或醇、

5、聚合反应：氨苄青霉素在水溶液中易形成聚合物，是氨苄青霉素过敏反应的主要过敏原之一。6、过敏反应

◆青霉素的缺点：对酸不稳定==只能注射给药，不能口服抗菌谱比较狭窄==对G+效果比对G-的效果好耐药性

有严重的过敏性反应 第1页共12页

B、氨基糖苷类抗生素链霉素：菌种：灰色链霉菌理化性质： 1、溶解性：易溶于水，难溶于有机溶剂2、酸碱性：强碱性 3、稳定性：较稳定pH4~7溶液数周内稳定pH4.0~4.5最稳定 降解反应：酸、碱条件下水解出链霉胍等4、醛基反应：与伯胺形成席夫碱

5、成盐：与磷钨酸、苦味酸、甲基橙等成盐沉淀，用于鉴别

与磺酸、羧酸、磷酸酯成盐，可溶于有机溶剂中，可用于溶媒萃取法。与某些盐形成复盐，用于精制。C、大环内酯类抗生素共性：1、无色弱碱性化合物

2、微溶于水，在水中溶解度随温度上升而下降3、酸性条件苷键易水解，碱性内酯环易破坏◆红霉素：菌种：红霉素链霉菌主要性质：1、酸碱性：二甲氨基呈碱性

2、溶解性：易溶于醇、丙酮、氯仿、酯，微溶于乙醚和水，在水中溶解度55℃时最小3、稳定性：pH6~8最稳定D、四环类抗生素

◆四环素：菌种：金色链霉菌性质： 1）、溶解性：在pH4.5~7.5之间难溶于水

游离碱能溶于吡啶、甲醇、丁醇等有机溶剂和稀酸、稀碱盐酸盐能溶于水，不溶或微溶于有机溶剂2）、稳定性：干燥低温稳定

水溶液碱性条件下不稳定，酸性条件下（pH4~5）较稳定3、化学反应：差向异构化：弱酸性pH2~6脱水反应：较强酸性pH<2时脱水

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碱性条件下降解：弱碱性pH8，C环打开螯合反应：与高价金属离子 成盐：四环素与尿素形成复盐，用于精制与长链季胺碱成盐，带同萃取反应5、基因工程药物制药的主要程序？

A、目的基因的克隆B、构建DAN重组体，C、DAN重组体转入宿主菌D、构建工程菌，E、工程菌发酵F、表达产物的分离纯化，G、产品的检验等。

获得目的基因--组建重组质粒--构建工程菌（或细胞）--培养工程菌--产物分离纯化--除菌过滤--半成品检定--成品检定--包装

6、基因工程载体分为哪几类？克隆载体、转录载体、表达载体1、常用基因工程制药载体类型和特点？

7、真核基因在原核细胞中表达载体必须具备条件？

⑴载体能够独立复制。载体本身是一个复制子，具有复制起点。 ⑵应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆鉴定和筛选。⑶应具有很强的启动子，能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别。⑷应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录。⑸应具有很强的终止子，只转录克隆的基因，所产生的mRNA较为稳定。

⑹所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号AUG和SD序列，以便转录后顺利翻译。8、质粒稳定性的分析方法

8、质粒不稳定的类型或表现形式1质粒不稳定可分为：1

分裂不稳定：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象（常见）。

结构不稳定：指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。9、为了提高质粒稳定性，工程菌培养采用什

第3页共12页 么方法

（1）选择合适的宿主菌

宿主菌的遗传特性对质粒的稳定性影响很大。（2）选择合适的载体

含低拷贝质粒的工程菌产生不含质粒的子代菌的频率较大--增加质粒拷贝数含高拷贝质粒的工程菌产生不含质粒的子代菌的频率较小--增加质粒拷贝数（3）选择压力

在培养基中加入抗菌素抑制质粒丢失菌的生长，提高质粒稳定性。注意：只能消除分裂不稳定性。（4）两阶段培养法：

A、先使菌体生长至一定密度；B、再诱导外源基因的表达

由于第一阶段外源基因未表达，减小了重组菌与质粒丢失菌的生长速率的差别，增加了质粒稳定性。（5）调控环境参数

如温度、pH、培养基组分和溶解氧浓度。

有些含质粒菌对发酵环境的改变比不含质粒菌反应慢，间歇改变培养条件以改变两种菌比生长速率，可改善质粒稳定性。通过间歇供氧和改变稀释数率，都可以提高质粒稳定性。（6）固定化

10、基因表达的宿主细胞分类？

A、第一类为原核细胞：常用有大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等；B、第二类为真核细胞：常用有酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。11、克隆真核基因的常用方法？A、逆转录法

逆转录法就是先分离纯化目的基因的mRNA，再反转录成cDNA，然后进行cDNA的克隆表达。⒈mRNA的纯化⒉cDNA第一链的合成⒊cDNA第二链的合成⒋cDNA的克隆⒌将重组体导入宿主细胞⒍cDNA文库的鉴定⒎目的cDNA克隆的分离和鉴定B、化学合成法

较小的蛋白质或多肽的编码基因可以用化学合成法合成。必须知道目的基因的核苷酸顺序或目的蛋白质的氨基酸顺序。

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12、影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素？

外源基因表达产量与细胞浓度和细胞表达产量呈正相关。单个细胞产量取决于：⑴外源基因的拷贝数⑵外源基因的表达效率

①启动子的强弱②核糖体接合位点的有效性③SD序列和起始密码ATG的间距④密码子组成⑶表达产物的稳定性

①组建融合蛋白②利用大肠杆菌的信号肽或真核多肽中自身的信号肽；③采用位点突变的方法；④选用蛋白酶缺陷型大肠杆菌为宿主细胞，可能会减弱表达产物的降解。

⑷细胞代谢负荷外源基因的表达产物属于异己物质，并可能对宿主细胞有毒性。调节表达物质的积累与细胞的生长和代谢之间的平衡有利于外源基因的高效表达。⑸工程菌的培养条件13、对基因工程菌发酵影响较大的几个因素？A、培养基的影响B、接种量的影响C、温度的影响D、溶解氧的影响E、诱导时机的影响F、pH的影响14、基因工程药物

A、胰岛素B、干扰素C、人白细胞介素-215、肽图分析

肽图分析是用酶法或化学法降解目的蛋白质,对生成的肽段进行分离分析。

它是检测蛋白质一级结构最有效的方法，该技术灵敏高效是对基因工程药物的分子结构和遗传稳定性进行评价和验证的首选方法。常用HPLC、毛细管电泳。17、抗体是如何产生的？

BALB/c小鼠和LOU大鼠--7～12周龄--20g～25g体重19、什么是福氏佐剂和不完全佐剂？佐剂的作用？常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。

常用的佐剂是福氏佐剂（Freundadjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg卡介苗就成为完全佐剂。佐剂的作用：免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。20、细胞融合中，采用的融合剂是什么？规格和浓度如何？PEG:分子量4000的PEG是最常用的细胞融合剂

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（5）植物组织培养：组织或组织块放在离体的无菌环境中让其生长发育的方法，由于离体组织的组织块大多为先脱分化形成愈伤组织然后再进一步生长分化，因此也将植物组织培养定义为愈伤组织培养。

（6）植物原生质体培养：将植物细胞去除细胞壁后形成裸露的原生质体，把原生质体放在无菌的人工环境中使其生长发育的方法。

又：植物细胞培养，按培养对象来说，可分为原生质体培养和单倍体细胞培养；按照培养基类型可分为固体培养和液体培养；按培养方式可分为悬浮细胞培养和固定化细胞培养。大规模培养系统

1、成批培养法2、半连续培养法3、连续培养法4、固定化培养法35、植物细胞的生理活性物质和后含物各有哪些？

（1）生理活性物质：酶类、维生素、植物激素、抗生素和植物杀菌素（2）细胞后含物：生物碱、糖苷类、挥发油、有机酸36、植物细胞制药的进展主要有哪些？

20世纪90年代以来，对于植物细胞及其代谢产物的研究进入了新的发展时期，并出现了很多新技术和新方法，比如诱导子、前体饲养、两相培养法、质体转化、毛状根和冠瘿瘤组织培养等，显示了植物细胞培养工程制药的广阔发展前景。37、固定化酶和固定化细胞的方法。A、酶和细胞固定化方法

（1）载体结合法：A、物理吸附法B、离子结合法C、共价结合法（2）交联法

（3）包埋法：A、网格型B、微囊型（4）选择性热变性法B、固定化细胞的制备技术

（1）载体结合法（2）包埋法（3）交联法（4）无载体法38、固定化酶和固定化细胞的特点（和游离酶和细胞相比）。

A、固定化酶的特点：具有生物催化剂的功能，又有固相催化剂的功能。①可多次使用

②反应后，酶底物产物易分开，产物中无残留酶，易纯化，产品质量高。③反应条件易控制。④酶的利用效率高。⑤比水溶性酶更适合于多酶反应。B、固定化细胞的特点：有细胞特性，生物催化剂功能，固相催化剂特点。优点：①无须进行酶的分离纯化②保持酶的原始状态，酶回收率高③比固定化酶稳定性高④细胞内酶附助因子可再生⑤细胞本身含多酶体系⑥抗污染能力强

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39、酶工程在医药工业中的应用有哪些方面？酶在医药领域的应用A、在疾病诊断方面的应用

（1）根据体内原有酶活力的变化来诊断某种疾病：利用谷丙转氨酶活力升高来诊断肝炎（2）用酶测定体液中某些物质的量诊断疾病：利用葡萄糖氧化酶测定血糖含量，诊断糖尿病B、在疾病治疗方面的应用

（1）蛋白酶，主要用于治疗消化不良和食欲不振（2）溶菌酶，具有抗菌、消炎、镇痛等作用

（3）超氧化物歧化酶，具有抗辐射作用（4）L-天冬酰胺酶，用于治疗白血病（5）α淀粉酶，消化药。

（6）乳糖酶，治疗乳糖缺乏症，有些人或婴儿肠道中缺乏乳糖酶，饮用含有乳糖的牛奶等食品时，由于不能分解乳糖，在肠道中，乳糖会因为细菌分解而产生有机酸，刺激肠道引起呕吐。

（7）脂肪酶，消化剂。假单胞菌脂肪酶能分解血液中的低密度脂蛋白和乳糜微粒，可用于预防和治疗高血脂病（8）右旋糖苷酶，水解右旋糖苷生产小分子产物，对龋齿有显著的预防作用，可加到牙膏和淑口水中。（9）链激酶，可催化纤维蛋白酶原，激活成纤维蛋白酶，将纤维蛋白水解，使血栓溶解。（10）尿激酶，具有溶血栓的活性

C、在药物生产方面的应用：利用蛋白酶和羧肽酶将猪胰岛素转化为人胰岛素D、在分析检测方面的应用

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