食品中微生物检测新技术研究进展

＿＝＝２Ｊ７２　２０１１年１２月　第３２卷第１２期　ＦＯＯｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　食品研究与并发　专题论述　食品中微生物检测新技术研究进展　张冲　，刘祥。－。陈计峦　（１．新疆石河子大学食品学院，新疆石河子８３２０００；２．国家加工食品质量监督检验中心（天津），天津３００３８４）　摘要：食品微生物是影响食品安全的重要因素，由食源性致病菌引起的病例越来越多。但致病菌往往共存于复杂的　生物体系中，且数量极少、致病性高．因此，微生物检测方法要有高灵敏度、特异性以及较短的分析时间，现有的成熟　检测技术尚难以实现对微生物进行实时、准确、快速的检测，因而许多新的检测方法已成为研究的热点。从微生物检　测的角度出发，对逆转录聚合酶链式反应、叠氮溴化乙锭聚合酶链式反应、可视化基因芯片、荧光标记噬茵体等近年　来出现的新型检测技术进行论述，并分析各自的优缺点。　关键词：逆转录聚合酶链式反应；叠氮溴化乙锭聚合酶链式反应；可视化；荧光标记；基因芯片；噬茵体　Ｎｅｗ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ　ｉｎ　Ｆｏｏｄ　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ＺＨＡＮＧ　Ｃｈｏｎｇ　，ＬＩＵ　Ｘｉａｎｇ　，，ＣＨＥＮ　ｊｉ—ｌｕａｎ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｉｎ　Ｓｈｉｈｅｚｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ　８３２０００，Ｘｉｎｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ　ｆｏｏｄｓ（Ｔｉａｎｊｉｎ），Ｔｉａｎｊｉｎ　３００３８４，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｏｏｄ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ｉｓ　ａｎ　ｉｍｐｏ￣．ａｎｔ　ｆａｃｔｏｒ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｆｏｏｄ　ｓａｆｅｔｙ，ｆｅｏｄｂｏｒｎｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ｃａｕｓｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｃａｓｅｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ｏｆｔｅｎ　ｃｏｅｘｉｓｔ　ｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｙｓｔｅｍｓ，ａｎｄ　ｆｅｗ　ｉｎ　ｎｕｍｂｅｒ，ｈｉｇｈ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ，ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｈａｖｅ　ｈｉ　ｇｈ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｓｈｏｒｔ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｔｉｍｅ，ｂｕｔ　ｏｕｒ　ｅｘｉｓｔｉｎｇ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ　ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ　ｔｏ　ａｃｈｉｅｖｅ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ，　ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ＳＯ　ｍａｎｙ　ｎｅｗ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｈａｄ　ｂｅｃｏｍｅ　ａ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｈｏｔｓｐｏｔ．Ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｆｔｈｉｓ　ｄｅｐａｒｔｕｒｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＴ—ＰＣＲ，ＥＭＡ—ＰＣＲ，ｇｅｎｅ　ｃｈｉｐ　ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｐｈａｇｅ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｎｅｗ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ，ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅｓ　ｔｈｅｉｒ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ａｎｄ　ｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＲＴ－ＰＣＲ；ＥＭＡ－ＰＣＲ；ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｍａｒｋｅｒ；ｇｅｎｅ　ｃｈｉｐ；ｐｈａｇｅ　进入２１世纪后，我国对于食品中微生物的检测、　基金项目：国家质检总局科技项目（２０１０ＱＫ３０７）；天津市质监局科技　项目（ｔ０一ｌ１）　鉴定仍采用传统的方法，停留在分离培养、形态观察、　生化鉴定和血清学分型水平，这些方法对微生物的检　测特异性不高、灵敏度低、操作烦琐耗时，不能实现有　作者简介：张冲（１９８８～），男（汉），在读硕士研究生，主要从事食品　科学与分子生物学研究。　效的监测和防控。因此，从食品安全现状和存在的关键　通信作者　问题出发，研究我国食品安全中的关键技术，建立符合　我国国情的食品安全技术标准和检测体系，及时有效　内蒙古农业大学学报，２００８，２９（１）：２４８—２５２　【ｌ１】佚名．中国食品行业分析报告［Ｒ］．中国经济信息网，２００５（３）：２８　［１２】邢造宇．我国《食品安全法》实施路径的分析［Ｊ１．浙江工商大学学　报．２００９（５）：２２—２８　【１５］刘春梅．食品安全标准体系的整合【Ｊ】．商品储运与养护，２００７（３）：　１１３一ｌ１４　【１６］安雪铭．食品安全问题研究［Ｄ］．北京：首都经济贸易大学，２０１０：　ｌ１一ｌ３　ｆｌ３】杨明亮．国内外食品安全监管体制现状的研究ｆＲ］．食品药品安全　与监管政策研究报告，２００８（１）：１０７　【１　４Ｉ农业部．农产品质量安全监测扩范围增频次【Ｎ１．人民日报，２０１０—　０８—３０（２１　【１７］付文杰确保食品安全必须加强食品安全科技『Ｊ１．宜春学院学报，　２００５（２）：９７—９９　收稿日期：２０１１－０５—１６　专题论述　张冲，等：食品中微生物检测新技术研究进展　论上如果可视探针产生蓝色的杂交信号则即为阳性信　地控制和预防食源性致病菌的传播己迫在眉睫。本文　对近１０年发展的最新检测技术做了系统的比较和综　号，但在实际检测中，背景和其它没有发生杂交反应的　位点也可能会产生沉淀的堆积而造成表面颜色的改　述，旨在为今后该方法的研究应用提供一定的参考。　１微生物检测的意义　变。可视芯片检测技术虽然还不够完善，但其既有基因　芯片快速、准确、高效、高通量的特点，又可以摆脱昂贵　的基因芯片实验设备的限制，因此已成为国内外研究　的热点。　３荧光标记噬菌体技术　食品微生物检测方法为食品检测必不可少的重　要组成部分。首先，它是衡量食品卫生质量的重要指标　之一，也是判定被检食品能否适用的科学依据之一。其　次，通过食品微生物检验，可以判断食品加工环境及食　品卫生情况，能够对食品被细菌污染的程度作出正确　的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据，提供传染　病和人类、动物的食物中毒的防治措施。再次，食品微　生物检验是以贯彻“预防为主”的卫生方针，可以有效　荧光标记噬菌体技术是根据噬菌体特异性侵染　宿主菌的原理，选用一种合适的染色剂将噬菌体的核　酸染色标记，然后用标记过的噬菌体侵染相应的宿主　菌，噬菌体吸附在其宿主菌表面后，随即将标记过的核　酸注入宿主细胞，随着越来越多的噬菌体核酸的注人，　细胞内荧光随着荧光素的增多而增强，借助荧光显微　镜便能判定宿主菌的存在，从而实现病原菌的检测。　地防止或减少食物中毒和人畜共患病的发生，保障人　民的身体健康；同时，它对提高产品质量，避免经济损　失，保证出口等方面具有政治上和经济上的重大意义。　２可视化基因芯片技术　Ｍｏｓｉｅｒ—ｂｏｓｓ￣　］等在前人的基础上，将荧光染料　ＹＯＹＯ一１更换为灵敏度较高，且对噬菌体结构和功能　都无破坏性的ＳＹＢＲ　ｇｏｌｄ核酸染料标记沙门氏菌噬菌　体Ｐ２２，成功的检测到了沙门氏菌ＬＴ２株，同时与ＤＡＰＩ、　ＥＢ、ＹＯＹＯ一１等核酸染料作对比，结果显示ＳＹＢＲ　ｇｏｌｄ　染剂是实验效果最好的核酸染料；Ｐｈｅａ　Ｍ　Ｈ【５］与　Ｆｌ￣ｓｈａｎｓ　Ｍ同等分别将ＳＹＢＲ　ｇｒｅｅｎ　Ｉ和ＳＹＢＲ　ｇｒｅｅｎ　１１　用于大肠杆菌、沙门氏菌、以及李斯特菌的检测，均已　成功检出，且灵敏度较高，改方法完全能用于实际生产　中微生物的检测。　基因芯片以其高灵敏度、高通量的特点逐渐成为　致病菌检测研究的热点，但普通的基因芯片在杂交反　应结束后还需要使用荧光扫描系统进行结果分析，这　就给配备简单实验室在使用上造成了一定的困难。为　了解决基因芯片结果处理这一问题，开发了一种新的　芯片技术——可视芯片技术。其原理是在酶的催化作　用下产生的沉淀，沉积在芯片表面，使芯片的厚度发生　变化，致使反射在芯片上的光的波长发生改变，由此可　以通过芯片上颜色的变化来观察实验结果。　Ｏｓｔｒｏｆｌ￣１］等首先阐述了可视芯片的原理，然后利用　单个序列错误的片段，将它们用于单核苷酸错配的区　别实验后，结果表明，可视芯片对区分不同的序列有很　好的准确性，检测的浓度可以达到５　ｐｍｏｌ／Ｌ；Ｊｅｎｉｓｏｎ　多数噬菌体与宿主呈一一对应关系，虽特异性极　高，但宿主范围较窄，且噬菌体与宿主作用的裂解机理　用相对较少。但是荧光标记噬菌体技术，检测周期短，　能区分死活细菌，准确性好，检测前无需将各细菌纯　人工合成了金黄色葡萄球菌ｍｅｃＡ基因，并同时合成了　’尚不明确，有待进一步研究，所以该技术在实践中的应　化，预增菌后即可用＝Ｆ检测，整个过程可在８　ｈ内结束，　且多个细菌检测可同步进行，因此该项技术在食源性　Ｒｏｂｅｒｔｔ２１等对与捕获探针结合的芯片表面进行了改良，　并将该技术用于ＩＬ一６，ＩＬ一１ｐ及ＩＮＦ一　３种细胞因子的　鉴别，以及ＡＦ５０８，Ｇ５４２Ｘ，Ｇ５５１Ｄ与Ｎ１３０３Ｋ型突变的　致病菌的检测中有着广阔的发展前景。　４聚合酶链式反应（ＰＣＲ）　ＳＮＰ鉴别，发现可视芯片特异性高，准确性好，在混合　检测中无交叉反应的情况出现；Ｚｈｏｎｇ　Ｘｔ３Ｊ等利用可视　芯片技术对ＭＩＦ启动子的ＳＮＰ差异进行了检测，并通过　ＰＣＲ是体外选择性扩增ＤＮＡ或ＲＮＡ的技术，就是　模板ＤＮＡ、引物以及４种脱氧核糖核苷三磷酸（ｄＮＴＰｓ）　毛细管电泳法进行了验证，在３０个样品中，只有１个样　品的检测结果与毛细管电泳结果不同，其它的检测结　果都与毛细管电泳结果一致。　可视芯片依赖于引物的扩增和探针的特异性结　合，设计和筛选有效的、特异性强的引物和探针是建立　可视芯片检测技术的关键，但这具有一定的难度；在理　在ＤＮＡ聚合酶的催化作用下所发生的酶促集合反应，　由变性一退火一延伸３个步骤组成，应用该技术能在短　时间内对特定ＤＮＡ序列作百万倍扩增同。　目前在食品微生物检测中运用的ＰＣＲ技术，大多　是基于ＤＮＡ水平的检测技术，虽然快速特异，灵敏度较　高，但由于死菌中的ＤＮＡ降解较慢，很容易产生假阳性　一＝＝２　张冲，等：食品中微生物检测新技术研究进展　专题论述　结果［ｓｌ。因此，建立一种快速、灵敏高、特异性强，同时还　具有常规ＰＣＲ检验的高灵敏度、高特异性，因而具有较　大的实用和推广价值。　４．２　ＲＴ—ＰＣＲ　能区分死、活菌，避免常规ＰＣＲ中假阳性结果出现的方　法很有必要。　４．１　ＥＭＡ—ＰＣＲ　ＲＴ—ＰＣＲ就是将ＲＮＡ的反转录（ＲＴ）和ｅＤＮＡ的聚　合酶链式扩增（ＰＣＲ）相结合的一种新的扩增方法。首　ＥＭＡ（ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ）是一种荧光插　入型的核酸（ＤＮＡ）结合染料，这种染料最显著的特点　是当样品中死活细胞共同存在时，它能够选择性地与　死细胞中的ＤＮＡ共价结合。由于活菌的细胞膜比较完　整，ＥＭＡ不能渗透到活菌细胞内部；但在细菌死亡之　后，细胞膜遭到破坏，ＥＭＡ能够很容易地渗透到细胞内　部，嵌插到ＤＮＡ分子的双螺旋上嗍。有研究表明，死亡的　先在反转录酶的作用下，将ｍＲＮＡ反转录合成ｅＤＮＡ，　即用引物与ｍＲＮＡ杂交，然后由ＲＮＡ依赖的ＤＮＡ聚合　酶（反转录酶）催化合成相应互补的ｃＤＮＡ链，最后再以　反转录合成的ｅＤＮＡ为模板，借助ＰＣＲ技术扩增合成目　的片段。其最大优点在于，利用了只有活菌的ＤＮＡ才能　转录出ＲＮＡ的原理，用ＲＮＡ反转录出ｃＤＮＡ做为扩增的　目标片段，以解决死菌ＤＮＡ带来的假阳性问题。　Ｖｉｊａｙ　Ｋ．Ｓｈａｒｍａ［２４１采用ｒＲＴ—ＭＰＣＲ（ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ）　细菌暴露于ＥＭＡ染液中仅需１　ｍｉｎ，ＥＭＡ便可透过细胞　壁或细胞膜，插入ＤＮＡ的双螺旋，发生共价交叉偶合作　用，使其不能发生扩增反应【　ｎ１，从而导致死细胞内部　的ＤＮＡ在接下来的ＰＣＲ扩增过程中被抑制。　大量研究表明，ＥＭＡ与ＰＣＲ相结合的检测技术，能　技术，用２对引物和探针对大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７进行检测　分析后，认为以总ＲＮＡ为模板，ｒｉｂＥ与ｅａｅ为靶点的ＲＴ—　ＰＣＲ是一种特异性强，灵敏度高的快速检测方法；　够有效地抑制样品中死细胞ＤＮＡ的扩增，更精确地检　测到样品中的活菌细胞【　５１。Ｗｅｉｍｉｎ　Ｇｕｔ　等利用ＥＭＡ—　Ｍａｔｓｕｄａｔ２￣等以传统培养法以及常规ＰＣＲ为对照，用定　量反转录ＰＣＲ（Ｑ—ＲＴ—ＰＣＲ）方法检测到了处于活的非　培养状态（ＶＢＮＣ）的Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ菌，说明ＲＴ—ＰＣＲ具有　较强地区分死、活菌的能力；Ｃａｒｌｏｓ　Ａ．Ｇｕｚｍａｎｔ２６１等用Ｑ—　ＲＴ—ＰＣＲ（ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ＰＣＲ技术检测死、活类志贺邻单胞菌共存的菌液，发现　ＥＭＡ能够抑制志贺邻单胞死菌ＤＮＡ的扩增，无假阳性　的出现；Ｗａｎｇ　Ｓ．［９１等将创伤弧菌实验样品用ＥＭＡ染液　处理后，用ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ成功的检测出样品中的活菌，　并通过实验得出，不抑制活细胞ＰＣＲ扩增的最大ＥＭＡ　浓度是３　Ｉｘｇ／ｍＬ，完全抑制死细胞ＰＣＲ扩增的最ｄ￣ＥＭＡ　浓度为２．５　ｐ￣ｇ／ｍＬ；Ｐｉｌａｒ　Ｖｉｓｃｏｇｌｉｏｓｉ【　１等用Ｖ—ＰＣＲ　（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ＰＣＲ：ＥＭＡ与ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ相结）　对水中的军团杆菌进行了检测，并与普通培养法以及　ＰＣＲ）方法成功的检测出处于活的非可培养状态与饥　饿状态的霍乱弧菌，因此证实，Ｑ—ＲＴ—ＰＣＲ不仅可以避　免常规ＰＣＲ在检测霍乱弧菌时出现的假阳性结果，还　可以检测到代谢较弱的霍乱弧菌，由此证明，基于ＲＮＡ　水平的ＰＣＲ技术检测结果，可以显示细菌当前的代谢　活性，进而可以对细菌的代谢活性作出科学的评估；　Ｎａｒｊｏｌ　Ｇｏｎｚａｌｅｚ—Ｅｓｃａｌｏｎａｔ２７１等用Ｑ—ＲＴ—ＰＣＲ技术，以沙　Ｑ—ＰＣＲ对比，发现Ｖ—ＰＣＲ所得菌数高于普通培养法所　得菌数，低于Ｑ—ＰＣＲ所得菌数，由此证明，ＥＭＡ—ＰＣＲ技　术不仅能够避免常规ＰＣＲ中死菌带来的假阳性结果，　又能避免培养法中处于活的非可培养状态（ＶＢＮＣ）菌　带来的假阴性结果；Ｗａｎｇ　Ｌ【切等用ＥＭＡ－ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　的方法检测鸡肉与鸡蛋中活的沙门氏菌，并与常规　门氏菌ｉｎｖＡ基因为靶点，并设置ｍｙＩＣ内参，成功的避免　了假阳性以及假阴性的出现，并且准确定量出体系中　的活菌数量，从而证实，Ｑ～ＲＴ－ＰＣＲ是一种快速而精确　的检测方法。　ＲＴ—ＰＣＲ技术已经广泛的应用于临床医学、分子　ＰＣＲ对照，结果显示无假阳性出现，并将其检出限降低　至１０　ｃｆｕ／ｍＬ。　生物学、微生物学等领域，一度被称为活菌检测的“金”　标准［２８１，但仍有一些不确定因素限制了ＲＴ—ＰＣＲ的使　ＥＭＡ～ＰＣＲ与传统ＰＣＲ相比，其最大优势在于在扩　增时具有选择性，能够抑制ＰＣＲ对死菌中的ＤＮＡ扩增，　用［２９－３５／，如样品的选择、靶点ＲＮＡ的选择、逆转录体系的　选择、扩增方式的差异等。但ＲＮＡ作为生物活性的标　志，ＲＴ—ＰＣＲ不仅能够有效地区分死活菌，其检测结果　还能作为菌体代谢的活性指标，因此，ＲＴ－ＰＣＲ有着极　其重要的研究价值。　５结论与讨论　只扩增其活菌的ＤＮＡｔ　删。但是，ＥＭＡ选择死活菌的能　力仍然受到一些质疑，ＥＭＡ对微生物ＰＣＲ扩增体系的　影响还有很多地方尚不明确［２０－￣，例如，ＥＭＡ会抑制处　于损伤状态的非死亡菌的扩增、ＥＭＡ自身会对ＤＮＡ产　生破坏等。但ＥＭＡ与Ｑ—ＰＣＲ相结合的方式，无疑为食品　中微生物的检测提供了一个新思路，既能够弥补基于　ＤＮＡ水平的ＰＣＲ法无法选择活死细胞的扩增不足，又　与传统方法相比，这些新的检测技术具有明显的　专题论述　张冲等：食品中微生物检测新技术研究进展　，优势，不但快速方便、特异性强、灵敏度高，且能够检测　ｄｅａｄ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　ｍｉｘｅ　ｄ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ　ｂｙ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　到一些传统方法难以检测到的病原体；与其它生物学　检测技术相比，如：依赖核苷酸序列扩增技术　（ＮＡＳＢＡ）、酶联免疫吸附技术（ＥＩＩＳＡ）、免疫金技术　（ＩＣＧＴ）、固相细胞计数（ＳＰＣ）等，具有操作简单、检测　成本低的特点。尤其是ＲＴ—ＰＣＲ技术，不但能够检测到　活性较强的细菌，而且还能够检测到处于ＶＢＮＣ状态下　的细菌，具有较强的区分死活菌的能力，其检测结果可　作为菌体活性评估的重要参照，这是其它快速检测技　术以及传统检测技术均无法比拟的优势，因而有着不　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ　Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，７２　１９９７－　２００４　［１　１］Ｋｎｕｔ　Ｒｕｄｉ，Ｂｉｒｇｉｔｔｅ　Ｍｏｇｅｎ，Ｓｉｇｅｎ　Ｍ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｕｓｅ　ｏｆ　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ　ａｎｄ　ＰＣＲ　ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｉｃａｔｆｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉａｂｌｅ　ａｎｄ　ｄｅａｄ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｌａ　ｍｉｃｒｏ—　ｂｉｏｌｏｇｙ，２００５，７１（２）：１０１８—１０２４　［１２］Ｇｕ　Ｗ　Ｍ，Ｌｅｖｉｎ　Ｒ　Ｅ．Ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｂｌａｅ　ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ　ｓｈｉｇｅｌ—　ｌｏｉｄｅｓ　ｉｎ　ａ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆ　ｖｉａｂｌｅ　ａｎｄ　ｄｅａｄ　ｃｅｌｌｓ　ｕｓｉｎｇ　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ　ＰＣＲ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２１　（２）：１４５－１４９　可估量的发展前景。　总之，这些新的检测技术在食品微生物检测方面　均发挥着一定的作用，不同的检测技术具有不同的适　用范围，可以满足差异化的检测需求。随着研究的深　入，各种检测技术得到不断发展与完善，传统的食品微　生物检测技术将逐步被各种简便、快速、高灵敏度的新　型检测技术所取代。　参考文献：　［１】Ｏｓｔｏｒｆ　Ｒ，Ｈｏｐｋｉｎｓ　Ｄ，Ｈａｅｂｅｒｌｉ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｉｎ　ｉｆｌｍ　ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ｖｉｓｕａｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｔａｒｇｅｔｓ『Ｊ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９９，　４５（９）：１６５９－１６６４　［２］２　Ｊｅｎｉｓｏｎ　Ｒ，Ｙａｎｇ　Ｓ，Ｈａｅｂｅｒｌｉ　Ａ，ｅｔ　１ａ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ－ｂａｓｅｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｔａｒｇｅｔｓｏｎｏｐｔｉｃａｌｌｙｃｏａｔｅｄｓｉｌｉｃｏｎ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　２００１．１９（１）：６２—６５　【３】Ｚｈｏｎｇ　Ｘ，Ｒｅｙｎｏｌｄｓ　Ｒ，Ｋｉｄｄ　Ｊ，ｅｔ　１ａ．Ｓｉｎｇｌｅ—ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　ｏｎ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｔｈｉｎ－ｆｉｌｍ　ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ　ｃｈｉｐｓ［Ｊ］．ＰＮＡＳ，２００３，１００　（２０）：１　１５５９—１　１５６４　『４］Ｍｏｓｉｅｒ－ｂｏｓｓ　Ｐ　Ａ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ　Ｓ　Ｈ，Ａｎｄｒｅｗｓ　Ｊ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｕｓｅ　ｏｆ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｔｌｙ　ｌａｂｅｌｅｄ　ｐｈａｇｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｓｐｅｃｉｅｓ【Ｊ］．Ａｐｐｌ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，２００３，５７（９）：１１３８—１１４４　［５］Ｐｈｅａ　Ｍ　Ｈ，Ｄｏｓｓｏｔｂ　Ｍ，Ｇｕｉｌｌｏｔｅａｕ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｆｌｕｏ—　ｒｏｃｈｒｏｍｅｓ　ａｎｄ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ　ｐｒｏｖｅ　ｕｓｅｆｕｌ　ｉｎ　ａｓｓｅｓｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｉｎａｔｉｏｎｏｎｄｒｉｎｋｉｎｇｗａｔｅｒｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．Ｗａｔｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，３９（１５）：　３６１８－３６２８　【６］Ｆｌａｊｓｈａｎｓ　Ｍ，Ｃｏｓｓｏｎｃ　Ｊ，Ｒｅｄｉｎａ　Ｍ．Ｔｈｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｍａｇｅ　ｃｙｔｏｍ－　ｅｔｒｙ　ｔｏ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｉｎ　ｄｕａｌ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ—ｓｔａｉｎｅｄ　ｆｉｓｈ　ｓｐｅｒ－　ｍａｔｏｚｏａ［Ｊ］．Ｃａｌｌ　ｂｉｏｌ　ｉｎｔｅｍａｔｉｏｎａｌ，２００４，２８（１２）：９５５—９５９　［７］Ｇｉｏｒｇｉｏ　Ｇｉｒａｆｆａ，Ｅｒａｓｍｏ　Ｎｅｖｉａｎｉ．ＤＮＡ－ｂａｓｅｄ，ｃｕｌｔｕｒｅ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｆｏｒ　ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ　ｉｎ　ｆｏｏｄ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆｆｏｏｄ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００１，６７（２）：　ｌ９—３４　【８］Ｋｅｅｒ　Ｊ　Ｔ，Ｂｉｒｃｈ　Ｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ，２００３，５３（２）：１７５—１８３　【９］Ｗａｎｇ　Ｓ，Ｌｅｖｉｎ　Ｒ．Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｂａｌｅ　Ｖｉｂｒｉｏ　ｖｕｌｎｉｉｆ—ＣＵＳ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｄｅａｄ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｉｃｒｏ—ｂｉｏｌ　Ｍｅｔｈ，２００６，６４（１）：　１－８　［１０］Ａｎｄｒｅａｓ　Ｎｏｃｋｅｒ，Ａｎｎｅ　Ｋ　Ｃａｍｐｅｒ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　［１３】Ｌｅｅ　Ｊ　Ｍ，Ｌｅｖｉｎ　Ｒ　Ｅ．Ｕｓｅ　ｏｆ　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｂａｌｅ　ａｎｄ　ｄｅａｄ　ｍｉｘｅｄ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｆｌｏｒａ　ｆｒｏｍ　ｆｉｓｈ　ｉｆｌｌｅｔｓ　ｂｙ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ，２００６，６７（３）：４５６－４６２　【１４】Ｎｏｇｖａ　Ｈ，Ｄｒｏｍｔｏｒｐ　Ｓ，Ｎｉｓｓｅｎ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ　ｆｏｒ　ＤＮＡ－ｂａｓｅｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉａｂｌｅ　ａｎｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｂｙ　５　－ｎｕｃｌｅａｓｅ　ＰＣＲ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２００３，３４（４）：８０４—８１３　【１５】ＲｕｄｉＫ，ＭｏｅｎＢ，ＤｒｏｍｔｏｒｐＳ，ｅｔａ１．Ｕｓｅ　ｏｆｅｔｈｉｄｉｕｍｍｏｎｏａｚｉｄｅａｎｄ　ＰＣＲ　ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ：ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉａｂｌｅ　ａｎｄ　ｄｅａｄ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｌａ，２００５，７１（２）：１０１８—１０２４　【１６］Ｐｉｌａｒ　Ｄｅｌｇａｄｏ—Ｖｉｓｃｏｇｌｉｏｓｉ，Ｌｙｄｉｅ　Ｓｏｌｉｇｎａｅ，Ｊｅａｎ－Ｍａｒｉｅ　Ｄｅｌａｔｔｒｅ．Ｖｉ—　ａｂｉｌｉｔｙ　ＰＣＲ，ａ　Ｃｕｌｔｕｒｅ－Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉａｂｌｅ　ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎ—　ｔａｌ　ｗａｔｅｒ　ｓａｍｐｌｅｓ［］ｊ．Ａｐｐｌｉｄｅ　ａｎｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｌａ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００９，　７５（１１）：３５０２－３５１２　［１７】Ｗａｎｇ　Ｌ，Ｍｕｓｔａｐｈａ　Ａ．ＥＭＡ－ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　ａｓ　ａ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｖｉａｂｌｅＳａｌｍｏｎｅｌｌａｉｎｃｈｉｃｋｅｎａｎｄｅｇｇｓ［］ｊ．ＪＦｏｏｄＳｃｉ，２０１０，　７５（３）：Ｍ１３４－Ｍ１３９　［１８】Ｂｉｎ　Ｃｈａｎｇ，Ｔｏｓｈｉｔｓｕｇｎ　Ｔａｇｕｒｉ，Ｋａｎｊｉ　Ｓｕｇｉｙａｍａ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｉｄｕｍ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｂａｌｅ　ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊａｐａｎｅｓｅ　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ　ｄｉｓｅａｓｅｓ，２０１０，６３（２）：１　１９－１２３　【１９】Ｓｏｎｉａ　Ｅ　Ｌｒｔａｎｔ，Ｇｌｏｒｉａ　Ａ　Ｍｕｒｐｈｙ，Ｔｅｎｅｉｌｅ　Ｍ　Ａｌｆａｒｏ，ｅｔ　１ａ．Ｒａｐｉｄ－Ｖｉ—　ｂａｉｌｉｔｙ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆｌｉｖｅ，ｖｉｒｕｌｅｎｔ　ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｎｔｈｒａｃｉｓ　ｉｎ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｌａ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　２０１　１，７７（１８）：６５７０—６５７８　【２０］Ａｎｄｒｅａｓ　Ｎ，Ｙｃａｋｃ　Ｃ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ　ｗｉｔｈ　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ　ｆｏｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｖｅｖｓ　ｄｅａｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｂｙ　ｓｅ—　ｌｅｃｔｉｖｅ　ｒｅｍｏｖａｌ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｄｅａｄ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ，２００６，６７（２）：３　１０－３２０　［２１】Ｇａｂｒｉｅｌｅ　Ｆｌｅｋｎａ，Ｐｏｌｏｎｃａ　Ｓｔｅｆａｎｉｃ，Ｗａｇｎｅｒ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｓｕｆｉｆｃｉｅｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｖｅ　ａｎｄ　ｄｅａｄ　ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ　ｊｅｊｕｎｉ　ａｎｄ　Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ（ＥＭＡ）ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｓ　ＥＭＡ／ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ＰＣＲｌ叨．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｎ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，１５８（５）：４０５—　４１２　［２２】Ｐｈｉｌｌｉｐ　Ｂ　Ｇｅｄａｌａｎｇａ，Ｂｅｔｔｙ　Ｈ　Ｏｌｓｏｎ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｖｉｂａｌｅ　ａｎｄ　ｎｏｎｖｉｂａｌｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｗａｔｅｒ　ｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００９，　８２（３）：５８７－５９６　［２３］Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｈ，Ｏｅｔｈｉｎｇｅｒ　Ｍ，Ｔｕｏｈｙ　Ｍ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｕｎｓｕｉｔｂａｌｅ　ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ　２１６　２０１１年１２月　第３２卷第１２期　Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　食品研究与开发　专题论述　同时蒸馏萃取技术在食品分析中的应用　安红梅　，尹建军　．２．’，张晓磊　，柯润辉１－一，宋全厚　，　（１．中国食品发酵工业研究院，北京１０００２７；２．国家食品质量监督检验中心，北京１０００２７）　摘要：同时蒸馏萃取技术（ＳＤＥ）是当今使用极其广泛的样品前处理方法，简要介绍ＳＤＥ装置的发展以及与其他样品　制备技术的联用，阐述了ＳＤＥ在国内食品香味成分分析中的应用，并对其在食品分析应用中存在的问题进行讨论。　关键词：同时蒸馏萃取；香味成分；食品分析　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｆｏｏｄ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ＡＮＨｏｎｇ－ｍｅｉ　，ＹＩＮ　Ｊｉａｎ－ｊｕｎ　，ＺＨＡＮＧＸｉａｏ－ｌｅｉ　，ＫＥＲｕｎ—ｈｕｉ　一，ＳＯＮＧＱｕａｎ—ｈｏｕ　＇　（１．Ｃｈｉｎａ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００２７，Ｃｈｉｎａ；２．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔｅｓｔｉｎｇ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００２７，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（ＳＤＥ）ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｗｉｄｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ａ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｔｈｉｓ　ｒｅｖｉｅｗ　ｂｒｉｅｆｌｙ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｓ　ｔｈｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＤＥ　ｅｑｕｉｔｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｓａｍｐｌｅ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．Ｉｔ　ａｌｓｏ　ｓｕｍｍａｒｉｚｅｓ　ＳＤＥ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｒｏｂｌｅｍｓ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ａｒｏｍａ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ａｎａｌｙｓｉｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｉｍｕｈａｎｅｏｕｓ　Ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ａｒｏｍａ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ；ｆｏｏｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　作者简介：安红梅（１９８７一），女（回），在读研究生，研究方向：食品分析。　通信作者：尹建军（１　９６６一），男，高级工程师，长期从事食品质量安全技术研发管理工作。　・●　◆，ｌｌＪ　ｉ●　●＿¨●　ｉｉ　ｉｂｅｔｗｅｅｎ　ｖｉａｂｌｅ　ａｎｄ　ｄｅａｄ　ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ａｎｄ　ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　［２９］Ｊｕｎｈｕｉ　Ｌ，Ｃｈｕａｎｈｏｎｇ　Ｔ．Ａ　ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｏｔｌａ　ＲＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ　ｅｄｏｄｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　Ｌｅｔｔ，２００６，　ｆ２８）：１　１９３－１　１９７　ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ　ｂｙ　ｅｔｈｉｄｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ　ｍｏｎｏａｚｉｄｅ［３３．Ｌｅｔｔ　Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，　２００９，４８（５）：６３３－８　［２４】Ｖｉｊａｙ　Ｋ　Ｓｈａｒｍａ．Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ＰＣＲ　ｆｏｒ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｉｃ　ｄｅｔｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｆｂＥ　ａｎｄ　ｅａｅ　ｇｅｎｅｓ　ｏｆ　ｆ３０】Ｆｌｅｉｇｅ　Ｓ，ＰｆａｆｆｌＭＷ．ＲＮＡｉｎｔｅ　ｔｙ　ａｎｄｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎｔｈｅ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｑＲＴ—ＰＣＲ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ａｓｐｅｃｔｓ　Ｍｅｄ，２００６，２７（２）：１２６—１３９　［３１】Ｂｕｓｔｉｎ　Ｓ　Ａ．Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ，ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ—ｂａｓｅｄ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ：ａ　ｓｎａｐｓｈｏｔ　ｏｆ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ａｎｄ　ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｆＪＩ．Ｅｘｐｅｒｔ　Ｒｅｖ　Ｍｏｌ　Ｄｉａｇｎ，２００５，５（４）４９３—４９８　Ｅｓｃｈｅｒｉｅｈｉａ　ｃｏｌｉ０１５７：Ｉ－Ｉ７［３．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄ　ｃｅｌｌｕｌａｒｐｒｏｂｅｓ，２００６，２０　（５）２９８—３０６　【２５】Ｍａｔｓｕｄａ　Ｋ，Ｔｓｕｊｉ　Ｈ，Ａｓａｈａｒａ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｍｍｅｎｓａｌ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｂｙ　ｒＲＮＡ－ｔａｒｇｅｔｅｄ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ—ＰＣＲ　［３２】Ａｎｄｒｅａｓ　Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，Ｏｄｉｌｏ　Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｓｕｓａｎｎｅ　Ｓｔｏｃｋｅｒ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ＲＩＮ：　ａｎ　ＲＮＡ　ｉｎｔｅ　ｔｙ　ｎｕｍｂｅｒ　ｆｏｒ　ａｓｓｉｇｎｉｎｇ　ｉｎｔｅｇａｔｙ　ｖａｌｕｅｓ　ｔｏ　ＲＮＡ　［３．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００７，７３（１）：３７—３９　［２６】ＮａＩｊｏｌ　Ｇｏｎｚｄｌｅｚ—Ｅｓｃａｌｏｎａ，Ａｘｅ　Ｆｅｙ，Ｃａｒｌｏｓ　Ａ　Ｇｕｚｍｄｎ，ｅｔ　ａ１．　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ［Ｊ】．ＢＭＣ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ，２００６，７（１）：３　［３３］Ｂｕｓｔｉｎ　Ｓ　Ａ，Ｎｏｌａｎ　Ｔ．Ｐｉｔｆａｌｌｓ　ｏｆ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ—　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｍｏｌ　Ｔｅｃｈ，２００４，１５（３）：　１５５—１６６　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｖｉｂｒｉｏ　ｃｈｏｌｅｒａｅ　ｃｅｌｌｓ　ｅｎｔｅｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖｉａｂｌｅ　ｂｕｔ　ｎｏｎ－ｃｕｈｕｒａｂｌｅ　ｓｔａｔｅ　ａｎｄ　ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｃｏｌｄ　ｓｈｏｃｋ［３．Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００６，８　（４）：６５８—６６　［２７】Ｎａｒｊｏｌ　Ｇｏｎｚｄｌｅｚ－Ｅｓｅａｌｏｎａ，Ｔｈｏｍａｓ　Ｓ　Ｈａｍｍａｃｋ，Ｍｉｎｄｉ　Ｒｕｓｓｅｌｌ，ｅｔ　１．ａ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｖｅ　ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｓｐ．ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｅ　ｂｙ　ａ　ｔａｑＭａｎ－Ｂａｓｅｄ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ　Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｉｎｖＡ　［３４】Ｌａｃｅｙ　Ｈ　Ａ，Ｎｏｌａｎ　Ｔ，Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ　Ｓ　Ｌ，ｅｔ　１．Ｃ．ａＰ．Ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ｏｆ　Ｎａ＿，Ｈ＋ｅｘｃｈａｎｇｅｒ　ａｎｄ　Ｃ１７ＨＣＯ３－ａｎｉｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇｅｒ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｐｌａｃｅｎｔａ　ｕｓｉｎｇ　ｒｅａｌ　ｔｉｍｅ　ＱＰＣＲ［ＪＩ．Ｐｌａｃｅｎｔａ，２００５，２６（１）：９３—９８　［３５】Ｌｅｋａｎｎｅ　Ｄｅｐｒｅｚ　Ｒ　Ｈ，Ｆｉｊｎｖａｎｄｒａａｔ　Ａ　Ｃ，Ｒｕｉｊｔｅｒ　Ｊ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ｏｆ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｍＲＮＡ［３．Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００９，７５（１　１）：　３７　１４—３７２０　ｕｓｉｎｇ　ＳＹＢＲ　ｇｒｅｅｎ　Ｉ　ｄｅｐｅｎｄｓ　ｏｉｌ　ｃＤＮＡ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［３．Ａｎａｌ　［２８］Ｔａｎｉａ　Ｎｏｌａｎ，Ｒｅｂｅｃｃａ　Ｅ　Ｈａｎｄｓ，Ｓｔｅｐｈｅｎ　Ａ　Ｂｕｓｔｉｎ．Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍＲＮＡｕｓｉｎｇｒｅａｌ－ｔｉｍｅＲＴ－ＰＣＲ【Ｊ１．Ｎａｔｕｒｅｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００６，１（３）：１５５９－　】５８２　Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００２，３０７（１）：６３－６９　收稿日期：２０１１－０７—０１