ABCD医院 文件编号： ABCD-02-15 免疫实验室 HBsAg 版序：ABCD 页码：第1 页，共4 页 用途： 用免疫学方法定性测定人血清或血浆中的乙肝表面抗原(HBsAg)。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys2010免疫测定分析仪。 概述: HBsAg是乙肝病毒颗粒（HBV）的外壳成份，为一条大小不一的多肽。HBV感染者的血液中除存在完整的HBV病毒颗粒外，还含有较小的非传染性\"空\"壳颗粒，其数量极多并含有乙肝表面抗原。HBsAg决定簇a是引起免疫反应的主要成份，普遍存在于HBsAg颗粒上。另外，还有d、y、w、r等主要决定簇。检测人血清或血浆中的HBsAg可以查明HBV感染。HBsAg是首选的免疫学标志物。在临床症状出现前的数天或数周，HBsAg就已存在。急、慢性乙肝患者体内均含有HBsAg，但也有极少数HBV感染者体内测不到HBsAg。HBsAg检测用于诊断HBV感染和预防HBV通过血制品传播。也可用于急、慢性乙肝患者的病程监测，有时也可用于抗病毒疗效观察。此外，也可用作产前检查的实验室检测项目之一，以尽早预防HBV的母婴传播。Elecsys HBsAg试验采用单克隆抗HBsAg抗体。 原理： 采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 · 第1步：50µl标本、生物素化的抗HBsAg单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗HBsAg单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。 · 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 · 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。Elecsys自动将标本产生的光电信号与从HBsAg定标液得出的Cutoff值相比较。 试剂： M： 链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。 R1：生物素化的抗HBsAg单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml，浓度高于0.5mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH7.4含防腐剂。 R2：Ru(bpy)32+标记的抗HBsAg单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。浓度高于0.8mg/l，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH 8.0含防腐剂。 Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶，1.3ml/瓶人血清, 含防腐剂 Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1.3ml/瓶，HBsAg浓度约为0.5IU/ml,人血清，含防腐剂 ABCD医院 文件编号： ABCD-02-15 免疫实验室 HBsAg 版序：ABCD 页码：第2 页，共4 页 储存和稳定性： 存放在2－8 度，切莫倒置。 未开封，可稳定至标明的保质期。 M，R1 ，R2试剂开封后，2－8 度12周； 在仪器2010上，4周。（使用后放回2－8 度；开瓶使用时间累计约20小时）。 Cal 1，Cal 2开封后， 2－8 度12周； 在仪器上， 5小时。 注意：保证定标液不污染瓶盖。 标本采集和准备： 血清：按标准常规方法采集。 血浆：肝素钠、EDTA-K3或枸橼酸钠抗凝。不要使用肝素锂抗凝血浆。标本在2－8度可稳定5天，-20oC可稳定3个月。标本可冻融6次。有沉淀的标本使用前需离心。加热灭活的标本可使用。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。 检测步骤： 提供的材料： 货号：11820532，100人份的Elecsys HBsAg试剂盒包含： · M 链霉亲和素包被的微粒 · R1 生物素化的抗HBsAg抗体 · R2 Ru(bpy)32+标记的抗HBsAg抗体 · Cal 1 阴性定标液 · Cal 2 阳性定标液 需要的材料（未提供）： · Elecsys HBsAg质控品1和2 （PreciControl）货号11876309 · Elecsys HBsAg确证试验货号11820648 · Elecsys通用稀释液货号11732277 · Elecsys 2010分析仪 · Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号11662988 · Elecsys测量池清洗液（CleanCell）货号11662970 · Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 · Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号11298500 ABCD医院 文件编号： ABCD-02-15 免疫实验室 HBsAg 版序：ABCD 页码：第3 页，共4 页 方法： 按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。 Elecsys2010： 将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。系统自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。将HBsAg Cal 1和Cal 2放在分析仪的标本测试区。只在标定时打开瓶盖。条形码自动提供定标所需的数据资料。定标完成后，将Cal 1和Cal 2放回2－8度保存。 定标： 每批HBsAg试剂盒必须用新鲜试剂和HBsAg Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下 情况需要再次定标： · 一个月（同一批号试剂） · 7天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；根据规定进行多次标定。 定标液范围： (电化学发光信号计数) 阴性（Cal 1） 600-1200 阳性（Cal 2） 3000-8000 质控： 用Elecsys HBsAg质控品1和2 （PreciControl）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。 计算： 仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数形式（标本信号/ Cutoff）报告。 结果解释： 标本的Cutoff指数<1.0判断为HBsAg无反应性，可判定该标本HBsAg阴性，不需进一步的试验。标本的Cutoff指数≥1.0判断为HBsAg有反应性。所有呈现有反应性的标本必须重新测定一次，并且每份标本做二次测定。如果二次均为无反应性，标本可确认为HBsAg阴性。如果二次重复测定中有一次为有反应性，则该标本确认为重复有反应性。重复有反应性的标本必须用中和试验(ElecsysHBsAg证实试验)进行测定。如中和试验阳性,标本判定为HBsAg阳性。 ABCD医院 文件编号： ABCD-02-15 免疫实验室 HBsAg 版序：ABCD 页码：第4 页，共4 页 干扰因素： 该方法不受黄疸（胆红素<30mg/dl）、溶血（血红蛋白<1.4g/dl）、脂血（脂质<2800mg/dl）和生物素<40ng/ml等干扰。接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（2000U/ml）。HBsAg浓度高达1.5百万IU/ml也不出现钩状效应。21种常用药物经试验对本测定无干扰。根据目前所知，所有HBsAg测定方法均不能够检测出全部被感染的标本和病人。因此，阴性结果不能绝对排除HBV接触或感染的可能性。有HBV接触史的人，HBsAg阴性可能是因其体内HBsAg含量低于检测下限或抗原对所用抗体无反应性的缘故。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体和抗钌抗体的干扰。Elecsys HBsAg测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。 稀释： 可用Elecsys通用稀释液稀释标本。HBV阴性的正常人血清也可用来稀释标本。血浆或小牛血清不适用。 正常参考值： 在欧洲和澳洲随机选择的供血者当中，ElecsysHBsAg重复呈现阳性反应的比例 \\低于0.1%。用该项试验检测364例HBsAg有反应性患者，364例呈现阳性反应（100%）。