２０１４年１月 第１期（总第１６４期） 草食家畜（双月刊） 哨兵动物口蹄疫抗体及病原学检测报告 郭会玲 一，易 忠 ，魏玉荣 ，马文戈 ，埃尼瓦尔・太外库力 ，斯马依・伊斯拉木 ， 达力夏・孜乃提 ，包拉提 ，魏 婕 ，王 延 ，薛 英 ，黄 炯 ，姚 刚 （１．新疆农业大学动物医学学院，新疆乌鲁木齐８３００５２； ２．新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆４．新疆塔什库尔干县畜牧兽医站，新疆乌鲁木齐８３００００； ８４４０００； ８４５２５０； ８４５２５０； ３．新疆喀什地区动物疾病控制与诊断中心，新疆５．新疆塔什库尔干县达布达尔乡畜牧兽医站，新疆６．新疆昭苏县畜牧兽医站，新疆 昭苏喀什塔什库尔干塔什库尔干８３５６００） 摘 要：２０１３年哨兵动物口蹄疫抗体及病原学检测结果表明，哨兵动物群体中不存在口蹄疫病畜或健康 带毒畜，但是群体口蹄疫免疫抗体水平不高，需要强化免疫。 关键词：哨兵动物；口蹄疫；免疫抗体；病原学 中图分类号：￥８５５．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００３—６３７７（２０１４）０１—００６４—０５ 口蹄疫（Ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ，ＦＭＤ）是有口蹄疫病毒（Ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍｏｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ，ＦＭＤＶ）引起 的世界性重大动物疫病，严重制约着全球畜牧业的发展，世界各国深受其害＿ｌ＿。为了了解新疆边境地区野 生偶蹄动物中口蹄疫潜伏和感染状况，评价和监测口蹄疫随野生动物跨境传播的流行因素。本研究团队 存边境地区设置哨兵动物监ｔｉｎ，０站，并对哨兵动物进行口蹄疫抗体水平及病原学检测。现将检测结果报告 如下。 ｌ材料与方法 １．１样品采集情况 动物种类：羊、牛、牦牛及骆驼。 样品种类：血清、Ｏ—Ｐ液。 采集地点：阿尔泰山山区哨兵动物监测站、天山山区哨兵动物监测站及昆仑山山区哨兵动物监测站。 １．２检测方法及试剂盒 口蹄疫免疫抗体检测使用液相阻断ＥｕＳＡ（Ｌｉｑｕｉｄ—ｐｈａｓｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ＥＬＩＳＡ）方法，试剂盒购自中国农业 科学院兰州兽医研究所，批号２０１３０９２７。 口蹄疫感染抗体检测使用非结构蛋白３ＡＢＣ ＥＬ１ＳＡ（ＦＭＤ ３ＡＢＣ—Ｉ—ＥＬＩＳＡ）方法，试剂盒购自中国农 业科学院兰州兽医研究所，批号２０１３０７１０。 口蹄疫病原学检测采用多重ＲＴ—ＰＣＲ（Ｍｕｌｔｉ—ＲＴ—ＰＣＲ）方法，试剂盒购自中国农业科学院兰州兽医 研究所，批号２０１３０８２７ 收稿日期：２０１３－１２—２２ 基金项目：“十二五”国家科技支撑计划（２０１３ＢＡＤ２Ｂ０４），公益性行业（农业）科研专项（２０１１０３００８） 作者简介：郭会玲（１９７３一），女，甘肃人，兽医师，研究生，主要从事动物传染病研究。 通讯作者：黄炯（１９６３一），男，新疆人，研究员，博士生导师，主要从事动物传染病与生物制品研发。 ６４ ２０１４年１月 第１期（总第１６４期） １－３操作步骤与判定标准 １．３．１ 口蹄疫免疫抗体检测 草食家畜（双月刊） 按照口蹄疫免疫抗体检测使用液相阻断ＥＬＩＳＡ（Ｌｉｑｕｉｄ—ｐｈａｓｅ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ＥＬＩＳＡ）说明书的要求进行。 结果判定： １．３．１．１试验成立的标准体滴度应小于１：４。 每次试验，每块板必须设立病毒抗原对照和阴阳性血清对照。病毒抗原对照 至少两个孑Ｌ的ＯＤ值在１．０以上，最好在１．０～１．６之间；阳性对照抗体滴度应在１：１０２４１滴度；阴性对照抗 １．３．１．２病毒抗原对照平均ＯＤ值５０％计算（临界值）抗原对照孑Ｌ是４孑Ｌ，分别弃去最高和最低ＯＤ值， 计算剩余２孔的平均ＯＤ值，再除以２，即为５０％对照值。该值即为临界值。 １．３．１－３判定标准 以病毒抗原对照平均ＯＤ值的５０％为临界值。被检血清ＯＤ值大于临界值的孑Ｌ为阴 性，小于或等于的孔为阳性，阳性孔的ＯＤ值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。如病 毒抗原对照平均ＯＤ值为１．２，则其５０％为０．６。如待检血清在１：１２８时的ＯＤ值为０．６，则该份待检血清的 抗体滴度为１：１２８。若临界值处于两个之间，则抗体滴度取中间值。 １．３．１．４ ＥＬＩＳＡ抗体滴度与免疫动物攻毒保护的关系 牛、羊：ＥＬＩＳＡ抗体效价≥１：１２８时．属于９９％以上 保护范围；ＥＬＩＳＡ抗体效价≤１：１６时，属于不保护范围，需要进行基础免疫；抗体效价在１：２２～１：９０时，属 于５０％保护效价范围，需要进行加强免疫。 １．３．２ 口蹄疫感染抗体检测 按照口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒（ＦＭＤ ３ＡＢＣ—Ｉ—ＥＬＩＳＡ）说明书的要求进行。 结果判定：按检测试剂盒判定标准，即效价＜Ｏ．２，为阴性；效价在０．２～０．３之间为可疑；效价＞０．３为阳 性。阳性样品应进行复检。 １．３．３ 口蹄疫病原学检测 按照口蹄疫病原学检测采用多重ＲＴ—ＰＣＲ（Ｍｕｈｉ—ＲＴ—ＰＣＲ）说明书的要求进行。 结果判定紫外灯下，强阳性样品电泳结果应为３条大小不一的条带，分别为６３４ｂｐ、４８３ｂｐ和２７８ｂｐ。 某一待检样品扩增产物ＤＮＡ带至少有一条与上述条带大小相符，同时空白对照无扩增条带，则该样品判 定为阳性，否则为阴性。 ２结果与分析 ２．１ 哨兵动物监测站样品采集情况 本研究边境地区哨兵动物监测站动物进行定期采样，采样涉及３个地区４种动物２种类型的样品． 共计５６６份样品，具体样品采集情况见表１。 表１ 动物样品采集情况 ２．２ 哨兵动物监测站动物样品口蹄疫检测情况 为了清楚的了解哨兵动物口蹄疫免疫情况及携带或感染口蹄疫情况．分别对采集的动物样品进行了 口蹄疫３种检测项目，具体见表２。 ６５ ２０１４年１月 第１期（总第１６４期） 草食家畜（双月刊） 免疫抗体 地区 Ａ型抗体水平≥１：１２８ ２２－９０ ≤１：１６ ０型抗体水平 ≥１：１２８ ２２—９０ ≤１：１６ ＡｓｉａＩ型抗体水平 ≥ｌ：１２８ ２２—９０ ≤１：１６ 从表３中可见，阿尔泰山的骆驼口蹄疫免疫抗体最低，３种血清型抗体均≤１：１６：阿尔泰山的牛及天 山的牛口蹄疫免疫抗体水平比较整齐，３种血清型抗体几乎均在２２～９０或≥ｌ：１２８；３个地区的羊及昆仑 山的牦牛口蹄疫免疫水平均不高，有待于免疫加强。 ２．４ 口蹄疫感染抗体检测结果 采集哨兵动物样品的口蹄疫感染抗体检测结果如表４。 表４哨兵动物样品口蹄疫感染抗体监测结果 从表４中可见牦牛未检测到感染抗体；阿尔泰山的牛、羊中也未检测到口蹄疫感染抗体：昆仑山的 牛、羊口蹄疫感染阳性率分别是６．３５％￣Ｈ ７．９８％；天山的牛、羊感染抗体阳性率更高，分别是８９＿４７％和 ｌ６．１３％。口蹄疫感染抗体水平高，可能来自两个方面：曾经感染过口蹄疫；反复注射疫苗后引起的非结构 蛋白抗体致使检测结果呈现假阳性。为了更清楚获知感染抗体阳性动物是真正被口蹄疫感染还是注射疫 ６６ 垄 旦 第１期（总第１６４期） Ｓｕｒｖｅｙ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｎ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｆｏｏｔ—草食家畜（双月刊） ａｎｄ—Ｍ０ｕｔｈ Ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ Ｓｅｎｔｉｎｅｌ Ａｎｉｍａｌ ＧＵＯ Ｈｕｉ～ｌｉｎｇ￣，２，ＹＩ Ｚｈｏｎｇ２，ＷＥＩ Ｙｕ—ｒｏｎｇ ＭＡ Ｗｅｎ－ｇｅ２，ＡＩＮＩＷＡＥＲ．Ｔａｉｗａｉｋｕｌｉ ，． ＳＩＭＡＹＩ・Ｙｉｓｉｌａｍｕ４，ＤＡＬＩＸＩＡ・Ｚｉｍａｉｔｉ ＢＡＯ Ｌａ－ｔｉ６，ＷＥＩ Ｊｉｅ２ ＷＡＮＧ Ｙａｎ２，． ＸＵＥ Ｙｉｎ ，ＨＵＡＮＧ Ｊｉ０ｎ ＹＡＯ Ｇａｎｇ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔＸｉｎｊｉａｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００５２ Ｃｈｉｎａ： ，２・Ｉｎ吼ｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ，Ｕｍｍｑｉ ８３００００Ｃｈｉｎａ： ，３・Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ ｆｒｏｍ Ｋａｓｈｇａｒ Ｒｅｇｉ０ｎ，Ｋａｓｈｇａｒ ８４４０００，Ｃｈｉｎａ： ４・ｓｔｏｃｋ Ｆａｒｍ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｓｈｋｕｒｇａｎ Ｃｏｕｎｔｙ，Ｔａｓｈｋｕｒｇａｎ Ｘｉｎｊｉａｎｇ ８４５２５０，Ｃｈｉｎａ： ． ５・Ｄａｂｕｄａｒ Ｃｏｕｎｔｙ Ｓｔｒｏｃｋ Ｆａｒｍ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｔａｔｉ０ｎ ｏｆ Ｔａｓｈｋｕｒｇａｎ ＣｏｕｎｔｖＴａｓｈｋｕｒｇａｎ Ｘｉｎｊｉａｎｇ ８４５２５０，Ｃｈｉｎａ； ６・Ｓｔｏｃｋ Ｆａｒｍ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｚｈａｏｓｕ Ｃｏｕｎｔｙ，Ｚｈａ０ｓｕ Ｘｉｎｊｉａｎｇ ８３５６００，Ｃｈｉｎａ． Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ Ｓｕｎｒｅｙ ｗａｓ ｄ。ｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ａｎｔｉｂ。ｄｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｔｉｏｌ。ｇｙ。ｆ ｆｏｏｔ－ａｎｄ—ｍ。ｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ。ｆ ｓｅｎｔｉｎｅｌ ａｎｉｍａｌ ｉｎ ２０１３，Ｔｈｅ ｒｅｓｕｉｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｅｘｉｓｔ ｆ０ｏｔａｎｄ—ｍ。ｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｎｔｉｎｅｌ ａｎｉｍａＩｓ・ＮｅＶｅｒｔｈｅｌｅｓｓ ｉｍｍｕｎｅ ａｎｔｉｂ。ｄｉｅｓ。ｆ ｆｏｏｔ—ａｎｄ—ｍ。ｕｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｗｅｒｅ １。ｗｅｒ ｌｅｖｅｌ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｎｔｉｎｅｌ ａｎｉｍａｌｓｎｅｅｄ ｔｏ ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ—， ． Ｋｅｙ ｗ０ｒｄｓ：ｓｅｎｔｉｎｅｌ ａｎｉａａ１ｔｓ；ｆｏ。ｔ—ａｎｄ—ｍｏＨｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ；ｉｍｍｕｎｅ ａｎｒｉｂ。ｄｉｅｓ；ｅｔｉ。１。ｇｙ ６８