大花蕙兰组织培养技术研究

・生物技术・　大花蕙兰组织培养技术研究　陈建科，杜双田，李惠娥，屈亚婷　（陕西省花卉种球种苗繁育中心．杨凌７１２１００）　中图分类号：￥６０３．８　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００１－－０００９（２００６）０４－－０１５４－－０２　大花蕙兰（Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ　ｈｙｈｒｉｄｕｍ）属兰科兰属植物，是　由兰属植物中大花种类碧玉兰（Ｃ．１ｏｗｉａｎｕｍ）、美兰花（Ｃ．ｉｎ－　ｓｉｇｎｅ）、虎头兰（Ｃ．ｈｏｏｋｅｒｉａｎｕｍ）、台兰（Ｃ．ｐｕｍｉｌ￣ｎ）等，经过　人工反复杂交培育出来的品种Ｅ”，具有很高的观赏价值。但　由于大花惹兰分株能力弱，繁殖系数太低，每年繁殖率只有　２～３倍．远远不能满足商品化生产的要求Ｅ　。利用组织培　养进行离体快速繁殖，可以大大提高繁殖系数，满足日益增　长的市场需求。有关洋兰的组培快繁有不少报道，但大花蕙　兰的报道很少，尤其是大花蕙兰叶片诱导植株的研究目前还　尚未见报道。本试验对大花蕙兰的叶片进行了离体培养，并　碍到了大量的试管苗，为降低种苗成本和快速大规模工厂化　生产大花蕙兰种苗提供了参考。　１材料与方法　１．ｉ材料　供试材料为黄色系大花蕙兰（商品名为：帝王）的幼叶。　花后取大花惹兰健壮植株新芽上的幼嫩叶片，用流水冲洗　３０ｍｉａ后，在超净工作台上用７０　酒精浸泡ｌＯｓ，然后用　０．１％ＨｇＣｌｚ浸泡６ｍｉｎ．进行表面杀菌，最后用无菌水冲洗６　次备用。　１．２方法　１．２．１原球茎的诱导　在超净工作台上将处理过的材料用　无菌吸水纸吸干叶片表面的水分，切成８ｍｍ左右的小方块，　置于原球茎诱导培养基：①２ＭＳ（大量元素加倍）＋２．４一Ｄ　０．Ｚｍｇ／Ｌ－Ｆ６一ＢＡ２．ＯｍｇｌＬ）②２ＭＳ＋２，４一Ｄｏ．２ｍｇ／Ｌ＋６　一ＢＡ３．０ｒａｇ／Ｌ；③ＭＳ＋２，４一Ｄｏ．２ｍｇ／Ｌ＋６一ＢＡ２．０ｍｇ／　Ｌ；④ＭＳ＋２，４一Ｄｏ．２ｍｇ／Ｌ＋６－－ＢＡ３．０ｍｇ／Ｌ附加２％蔗糖　及０．４３　琼脂粉上培养，ｐＨ值为５．８。培养温度为２５士　２℃，光照强度为２　０００Ｌｘ，每天光照１２ｈ。　１．２．２继代增殖培养将诱导出的原球茎切分后接种在①　２ＭＳ＋２，４一ＤＯ．２ｒａｇ／Ｌ＋６一ＢＡ２．Ｏｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５　ｒａｇ／Ｌ）　②ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｒａｇ／Ｌ＋６－－ＢＡ２．Ｏｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５　ｒａｇ／Ｌ）③　ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｉｎｇ／Ｌ＋６一ＢＡ１．０ｒａｇ／Ｌ＋ＫＴ０。５　ｒａｇ／Ｌ；④　ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｒａｇ／Ｌ＋６一ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５　ｍｇ／Ｌ，附加　３　蔗糖；ｐＨ值均为５．８上进行继代培养（培养条件与前相　同），每３０ｄ继代一次。　２结果与分析　２．１原球茎的诱导　叶片在①培养基上培养１５ｄ后叶片逐渐增厚，边缘开始　收稿日期ｌ２００６－－０１－－１０　ｌ５４　北方园艺２００６（４）：１５４～１５５　膨大，至４ｏｄ时，膨大部分形成５～８ｍｍ的原球茎（图１）。　在②上形成疏松的愈伤组织，后期水渍状，质量不好。同样　在ＭＳ培养基上接种的材料培养１０ｄ后，叶片开始发褐，以　后逐渐扩散至整个培养基。在培养过程中发现，原球茎的诱　导以靠近叶片下端鳞茎部位处的材料较好，诱导率高，中上　部次之。培养基中无机盐浓度以２ＭＳ较好，在叶片培养过　程中未见褐化现象。　２．２原球茎的增殖　诱导出的原球茎接种在增值培养基上１０ｄ后，③培养基　上的外植体切口逐渐愈合，３０ｄ后每个切块可形成８～ｌＯ个　原球茎（图２）。其他培养基上也行成原球茎，但数量较少，　增值速度慢。在增殖培养过程中，ＭＳ培养基上褐化较轻，　但增值快，为节省成本，使用ＭＳ培养基。生长素使用ＮＡＡ　比２，４一Ｄ要好．繁殖系数要高，这可能与２，４一Ｄ抑制芽的　形成和器官的发育有关【３］。　围１　叶片上诱导的原球茎　图２原球茎的增殖　圈Ｓ成苗培彝　维普资讯 http://www.cqvip.com

北方园艺２００６（４）：ｌ５５　・生物技术・　基托布津、代森锰锌等药剂随定植水埯浇，预防根腐病（俗称　红根病）发生，缓苗后视发生情况再浇施一次。　油豆角一旱黄瓜一婆婆丁　２早黄瓜栽培技术　２．１品种选择品质优、抗病、稳产的旱黄瓜品种，如秀春、　新研、吉杂四号等品种。品种选择总的原则是以市场需求决　定品种的选择．　轮作高效栽培技术　陆景贤　，杜衍辉。　（１．黑龙江省五常市农业广播电视学校，１５０２００Ｉ　２．黑龙江省五常市农业技术推广中心，１５０２００）　２．２育苗或直播此期正值７月份的高温季节，黄瓜栽培　可直播栽培，也可育苗移栽。直播可在７月５日左右。前茬　拉秧后及时进行整地，６６７　ｍ２施优质农肥３　０００ｋｇ。按６０ｃｍ　垄距起垄，然后直播。前茬拉秧过晚时，可提前于６月２０日　开始用营养钵直播育苗，苗龄１５～２０ｄ，于７月５日～１０日　开始定植。此茬黄瓜保苗３　１００株／６６７ｒｎ２左右，不可过密。　ｚ．３田间管理　此期正值高温多雨季节。生产中应注意加　强病虫防治工作。此茬黄瓜易发生细菌性角斑病和霜霉病，　除运用生态防治进行预防外，可用农用链霉素、ＤＴ杀菌荆、　克露、百菌清、瑞毒霉等药剂进行防治。　经科技人员多年研究，在黑龙江省五常市得到推广应用　的高寒地区普通目光温室一年三收（即春油豆角，秋黄瓜，冬　婆婆丁）的高效栽培模式，较好地解决了温室种植的重迎茬　问题，合理地利用了土地资源，减轻了病虫害的发生，并取得　了超万元的年收益。该模式的主要栽培技术如下。　３婆婆丁栽培技术　３．１　育苗　育苗在苗床地上进行。早春采收野生婆婆丁种　子备用，婆婆丁种子无休眠期，可随采随播，也可多次采收，　１油豆角栽培技术　１．１育苗　选择五常紫花大油豆角或适宜当地栽培的油豆　品种。１月中旬开始营养钵育苗，每钵保留一株，营养钵规　格９ｃｕｘ　ｒ９ｃｍ。育苗温度白天２Ｏ～２５℃，夜间８～１Ｏ℃，苗期　应保持钵体内营养土始终湿润，过干易伤根。秧苗日历苗龄　约３５ｄ。　集中播种。６６７　ｍ２施优质农肥１　００Ｏ～１　５００ｋｇ后，将苗床地　翻耙均匀，整平整细，做成１３０ｃｍ宽畦。６月上中旬播种．播　种可采用条播或撒播法。平方米播量３～４ｇ，保苗约７００～１　０００株，播后覆土ｌｃｍ，然后覆盖地膜，增温保嫡，以利出苗。　７Ｏ　出苗后及时撤除地膜，防小苗徒长倒伏。出苗后应适当　１．２整地施肥２月中下旬，６６７　ｍ２施腐熟农家肥５　０００ｋｇ、　二氨２５ｋｇ、硫酸钾２０ｋｇ，翻耙平整好土地后，按１３０ｃｍ垄距　起垄作畦，其中畦面宽８０ｃｍ，畦沟上口宽５０ｃｍ，下口宽　３０ｃｍ，畦高２５ｃｍ；畦面中间设一上口宽２５ｃｍ、下口宽１５ｃｍ、　深１Ｏ～１５ｃｍ的暗灌沟用于灌溉用，做畦后畦上用１３０ｃｍ宽　地膜覆盖。增温保墒。　１．３定植定植的温度指标是气温稳定通过８℃，日光温　室定植时间大约在２月２５日～３月５日。定植前在垄上按　３０ｃｍ株距用打穴工具开穴。苗保苗３５００株左右。定植前　钵内营养土应浇透水，定植后埯内浇足定植水，水渗后封埯。　１．４　田间管理　温度：定植后保温以利缓苗，此期白天２５　～控水蹲苗，促进根系生长，时间约２５ｄ左右。蹲苗结束后，应　视土壤墒情适时浇水。保持土壤湿润，促茎叶生长，此期可视　苗长势，随水追肥１～２次，每亩次追尿素１Ｏ～１５ｋｇ，磷酸二　氢钾５ｋｇ。整个苗期应防草荒出现，及时人工除草，并及时　拔除过密株。婆婆丁抗逆性很强，不需病虫防治。　３．２　定植　９月上旬，在前茬黄瓜拉秧后，施优质农肥　１　０００ｋｇ／６６７　ｍ２，翻地、耙细、整平后做成畦面宽１２０ｃｍ、埂窀　２０ｃｍ、埂高１０ｃｍ的畦子定植婆婆丁苗。做畦后将婆婆丁苗　起出，大小株分级后，按５ｃｍ株行距栽苗。栽后浇足定植　水。　２８℃，夜间１Ｏ～１５℃，３～５ｄ缓苗后。白天２Ｏ～２５℃，夜　间８～１３℃．中午温度过高时可结合放风排湿，短暂放风降　温０．５～１ｈ。灌水追肥：缓苗后埯浇一次缓苗水，直至开花　前不再浇水，开花前视土壤墒情小水一次。以满足开花座果　需要，座荚之后应保持土壤。见干见湿”。座荚之后追施　１５ｋｇ／６６７ｍ　硫酸钾复合肥或１５０ｋｇ／６６７　ｍ２充分腐熟鸡粪　＋５ｋｇ硫酸钾一次，可随水冲施。另外可根据秧苗及荚果长　势用氨基酸类叶肥根外追肥２～３次。病虫防治：油豆角主　要发生灰霉病、菌核病、斑潜蝇、红蜘蛛等。可用速克灵、灰　霉王、菌核净、潜克等药荆进行预防。另外，在定植时可用甲　３．３　田间管理　栽苗后应注意保温，促进缓苗，白天超过　２５℃时及时揭棚放风，夜晚盖棚保温。１Ｏ月中旬，随气温降　低，土壤逐渐结冻。此时可灌一次封冻水，以利越冬。棚内土　壤结冻后，应盖严棚膜，加盖草苫等外覆盖为棚室保温，防土　壤冻层过厚。为使婆婆丁能在元旦、春节上市，在ｌ１月下旬　和春节前４５ｄ分另ｑ给温室点火升温，白天掀开覆盖见光，夜　晚盖土保温。温度白天２５～３Ｏ℃，夜间８℃左右，３０ｄ即可　采收上市。　在给婆婆丁点火升温的同时，可着手下茬油豆角的育苗　工作。　２．３成苗培养及移栽　将以上原球茎按自然大小进行切分，在原球茎增殖培养　基③上继续培养至５０ｄ时．即可长出带有３～４片叶的无根　苗（图３）。　很难诱导出丛生芽，因此，在工厂化生产中，以原球茎的形式　进行扩繁，将是大花蕙兰种苗快速繁育的有效途经。　参考文献：　［１］秦魁杰，陈耀华，温室花卉［Ｍ　，中国林业出版社，１９９９：ｚ２ｚ一　２２３．　有关大花蕙兰的生根培养及试管苗的移栽管理，刘敏等　人已做了详细研究［　”，这里不在赘述。　［ｚ］王维华、毕英娜，大花蕙兰磷茎培养及高频率幼苗繁育［Ｊ］，莱　阳农学院学报，２００３、２０（１）　４６－－４７．　３　结论　大花蕙兰的组织培养常利用种子或茎尖等器官来进行　繁殖　，以幼叶为试材，不但充分利用了原材料，节省了成　本，而且对原植株的伤害较小。可快速得到大量的组培菌，　在生产中具有一定实用价值。　在大花蕙兰的组织培养中，高的无机盐浓度可防止培养　［３］曹孜义，齐与枢．葡萄组织培养及应用［Ｍ］，北京：高等教育出　版社，１９９０；５５．　［４］刘敏、杨柏云．卡特兰和大花蕙兰的组织培养及试管苗的栽培　管理口］，江西大学学报，１９９１、１５（３）ｚ２２—２４．　ＥＳ］曾学君．大花蕙兰的繁殖栽培，花卉口］，２ＯＯｌ（６）：１４—１５．　Ｅ６］钟士传，郑亚琴．大量元素、激素和糖对大花蕙兰组织培养的　影响，中国农学报Ｉｌｌ，２０００、１６（３）：４８—５２．　［７］宋仪农、朱毅．不同碳源对大花蕙兰组培快繁的影响口］，山东　林业科技，２００２（５）：１８—１９．　】５５　基褐变［　，较低的糖浓度有利于增殖［　，本研究用添加２　蔗糖的２ＭＳ培养基为基本培养基，也收到了同样的效果。　另外，在培养中还发现原球茎一且诱导成苗后，其根茎部位